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两株丝状真菌N3、N9的分类鉴定

两株丝状真菌N3、N9的分类鉴定

作者：牛莉娜山西大学

学位级别：硕士

本实验室从一酸奶样品中分离到两株丝状真菌N3、N9。通过形态学观察、RAPD分析及5.8SrDNA及ITS区序列测定并结合出菇试验,初步确定了N3、N9菌株的分类地位以及它们与其近缘种的生物系统学关系。 1 分别观察了N3、N9菌株在PDA培养基上的... 详细信息

本实验室从一酸奶样品中分离到两株丝状真菌N3、N9。通过形态学观察、RAPD分析及5.8SrDNA及ITS区序列测定并结合出菇试验,初步确定了N3、N9菌株的分类地位以及它们与其近缘种的生物系统学关系。 1 分别观察了N3、N9菌株在PDA培养基上的菌落特征和菌丝体形态特征。结果表明:N3、N9菌株在PDA培养基上25℃培养7d后菌落生长旺盛,呈丝状辐射生长,表面呈绒絮状,圆形,平坦。菌丝浓密,粗壮,多气生菌丝,菌丝体上具有明显的锁状联合结构,故初步判定N3、N9菌株为担子菌。 2 比较了CTAB、SDS-CTAB和氯化苄这3种DNA提取方法提取8株担子菌DNA的效果。结果表明:CTAB法和SDS-CTAB法只适合于部分菌株的DNA提取,对另外一些菌株则提取不出谱带清晰的DNA;而氯化苄法适合于所有供试菌株的DNA提取,所有菌株的DNA凝胶电泳图谱带清晰,效果很好。同时研究比较了液氮研磨和提取液的pH值对氯化苄法提取DNA效果的影响。 3 运用RAPD技术对N3、N9菌株和6株担子菌标准菌株进行了比较。首先从40个10bp引物中筛选出18个有效引物,用于所有供试材料基因组DNA样品的扩增。这18个引物对8株供试菌株均能扩增出清晰的谱带。对RAPD结果进行聚类分析,构建了供试菌株基因型的亲缘关系图。从聚类图上可以看出,菌株N3、N9与糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)白平菇、糙皮侧耳澳黑平菇、姬菇(***)河北33、毛头鬼伞(Coprinus comatus)聚为一类,而香菇(Lentinus edodes)、金针菇(Flammulina velutipes)聚为另一类。其中菌株N3、N9与白平菇的亲缘关系最近,与澳黑平菇、河北33的亲缘关系稍近一些,故可初步确定N3、N9菌株应属于侧耳属。 4 再次运用RAPD技术对N3、N9菌株和侧耳属7株菌株进行了聚类分析。以扩增条带清晰、多态性丰富和重现性好为原则,从40个10bp引物中筛选出了21个有效引物,用于所有供试材料基因组DNA样品的扩增。聚类结果表明:菌株N3、N9与白平菇相似程度最高,三

关键词：丝状真菌 DNA提取 RAPD 序列测定出菇试验

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反义芥子酶基因转入甘蓝型油菜的研究

反义芥子酶基因转入甘蓝型油菜的研究

作者：牛莉娜华中农业大学

学位级别：硕士

油菜为双子叶十字花科芸薹属植物，包括甘蓝型油菜、白菜型油菜、芥菜型油菜三个栽培品种，其中以甘蓝型油菜分布最广，面积最大。作为人类的主要油料作物，油菜种植面积正在逐渐扩大。中国油菜面积和总产量约占世界1／3。随着人们生活... 详细信息

油菜为双子叶十字花科芸薹属植物，包括甘蓝型油菜、白菜型油菜、芥菜型油菜三个栽培品种，其中以甘蓝型油菜分布最广，面积最大。作为人类的主要油料作物，油菜种植面积正在逐渐扩大。中国油菜面积和总产量约占世界1／3。随着人们生活的不断提高和工业用油的需要，油菜在我国的发展尚有很大的潜力，也促使研究人员不断改良油菜品质。植物基因工程是指将目的基因与载体相连形成重组体DNA，将其导入寄主细胞中进行增殖和表达，得到突变体植株。基因工程技术主要包括农杆菌介导转化法，PEG原生质体融合法，电激法，基因枪法，显微注射法，花粉管通道法等。在油菜研究领域，基因工程技术可用来提高油菜品质，培育抗除草剂、抗虫、抗病转基因油菜。在国外，转基因油菜已进入大规模商业化应用阶段。硫代葡萄糖苷(以下简称硫苷)是广泛存在于十字花科植物中的含硫次级代谢产物，广泛存在于植株的各个部位。硫苷本身是稳定存在的化合物，但当植株受到病虫侵犯或机械损伤时，植物内源芥子酶(myrosinases)会降解硫苷并生成多种有毒降解产物，可以起到抵御某些病虫害的作用。这就是油菜著名的自身防御系统：芥子酶—硫苷系统。但仍然有某些害虫可以克服这一防御系统，并通过识别硫苷或其降解产物来取食油菜。本研究转换思路，利用基因工程抑制油菜体内芥子酶基因的翻译与表达，则得到的转基因植株中芥子酶表达量受到抑制，并进一步研究硫甙的降解情况和油菜的抗虫性品质。拟南芥(Arabidopsi)的芥子酶基因与甘蓝型油菜芥子酶基因高度同源。本研究已得到拟南芥反义芥子酶基因载体，利用农杆菌介导法将其转入甘蓝型油菜中双6号，主要研究成果如下：1．选择中双6号，浙双3号，湘油15号，华油杂7号做再生检测，最终选定中双6号作为受体材料。2．对GV3101，LBA4404，EHA105，AGL1，C58共五个农杆菌菌种进行抗性筛选，结合外植体组织培养状态，最终确定农杆菌GV3101作为转化菌种。3．建立了油菜遗传转化系统。研究表明，取5d—6d苗龄的具柄子叶作为外植体;将OD600=0.5的农杆菌菌液离心并收集菌体，用1／2MS液体培养基重悬至0.08，将具柄子叶在菌液中侵染5-10min，取出吸干多余液体并在M1培养基上共培养3d;然后在M2培养基上延迟培养5d-6d;最后在添加8mg／L壮观霉素M3培养基上进行筛选培养，直至分化出绿芽。生根培养基选择MS基本培养基，长势良好。研究证明该转化系统简单方便。4．转基因植株T0代检测。经PCR扩增，共有2个株系扩增出目的片段，初步证明外源基因已经整合入中双六号油菜基因组中;提取油菜总RNA，进行RT-PCR检测，证明外源基因已经在油菜中得到表达。5．T0代转基因植株抗虫性检测。相比非转基因对照植株，T0代植株对小菜蛾(Plutella xylostella)和蚜虫无明显吸引作用。相比非转基因对照植株，取食T0代植株的小菜蛾的死亡率和平均蛹重亦无显著差异;但取食T0代植株叶片的蚜虫数目明显少于非转基因对照植株。

关键词：甘蓝型油菜硫苷芥子酶根癌农杆菌GV31O1 遗传转化

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链霉素抗性筛选井冈霉素高产菌株的研究

安徽农业科学 2007年第28期35卷 8930-8932页

作者：牛莉娜葛翠凤葛绍荣四川大学生物资源与生态环境教育部重点实验室四川成都610064

对井冈霉素产生菌吸水链霉菌井冈变种SJ-6(Streptomyce shygroscopicusvar. Jingganggensis Yen)进行UV和亚硝酸复合诱变,在含有菌株孢子最小抑制浓度的链霉素培养基平板上,采用链霉素抗性筛选法获得大量的链霉素抗性突变株,筛选到突变... 详细信息

对井冈霉素产生菌吸水链霉菌井冈变种SJ-6(Streptomyce shygroscopicusvar. Jingganggensis Yen)进行UV和亚硝酸复合诱变,在含有菌株孢子最小抑制浓度的链霉素培养基平板上,采用链霉素抗性筛选法获得大量的链霉素抗性突变株,筛选到突变株UN-80,在摇瓶发酵条件下,井冈霉素化学效价达15 943μg/ml,比出发菌株SJ-6提高了84.4%。该菌株连续培养5代,其化学效价基本稳定,具有较好的遗传稳定性。

关键词：链霉素抗性筛选 UV诱变亚硝酸诱变井冈霉素

海南省4株血清型2型人源感染猪链球菌MLST分型及耐药分析

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中华检验医学杂志 2024年第7期47卷 819-822页

作者：周晓君范梦培牛莉娜陈少文海南医学院附属海南医院、海南省人民医院检验科海口570311 河北省沧州市献县人民医院病理科沧州062250 海南医学院热带病转化医学重点实验室海口571199 海南医学院附属二医院检验科海口570311

对海南省2021年临床分离的4株血清型2型猪链球菌进行了培养纯化、基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪和生化分析鉴定、药敏试验、耐药基因检测和多位点序列分型。菌株1和菌株2为ST7型,菌株3为ST1型,菌株4为ST2302型;4株菌株对左氧氟... 详细信息

对海南省2021年临床分离的4株血清型2型猪链球菌进行了培养纯化、基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪和生化分析鉴定、药敏试验、耐药基因检测和多位点序列分型。菌株1和菌株2为ST7型,菌株3为ST1型,菌株4为ST2302型;4株菌株对左氧氟沙星、青霉素、美罗培南、利奈唑胺、头孢曲松、头孢吡肟和达托霉素均敏感,3株对四环素、红霉素和阿奇霉素具有耐药性,2株对克林霉素和氨苄西林耐药,1株对氯霉素和万古霉素耐药,提示海南省多个地区可能存在猪链球菌感染源,猪链球菌ST分子分型呈现多样化。

关键词：猪链球菌多位点序列分型耐药性

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血常规检测对缺铁性贫血患者的诊断价值分析

临床医学研究与实践 2017年第1期2卷 132-132,134页

作者：牛莉娜洛阳市第七人民医院检验科河南洛阳471003

目的研究缺铁性贫血患者的血常规检验结果,探讨其临床应用价值。方法选取我院缺铁性贫血患者96例作为研究对象,同时选择自愿参与研究的地中海贫血患者及健康志愿者各100例作为对照,比较三组的血常规检验结果。结果缺铁性贫血患者的Hb、... 详细信息

目的研究缺铁性贫血患者的血常规检验结果,探讨其临床应用价值。方法选取我院缺铁性贫血患者96例作为研究对象,同时选择自愿参与研究的地中海贫血患者及健康志愿者各100例作为对照,比较三组的血常规检验结果。结果缺铁性贫血患者的Hb、RBC、MCV等指标均显著低于健康志愿者,RDW和MCH指标显著高于健康志愿者,差异均有统计学意义(P<0.05);缺铁性贫血患者的Hb、RBC显著低于地中海贫血患者,MCHC、MCH显著高于地中海贫血患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论血常规检测可以对缺铁性贫血和地中海贫血患者进行有效鉴别,具有操作简便、诊断准确率高的优点,具有临床应用价值。

关键词：血常规缺铁性贫血检验报告地中海贫血

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粉末冶金铜端环工艺的改进

跨世纪 2008年第12期16卷 247-248页

作者：牛莉娜中国电子科技集团第二研究所山西太原030024

本文结合实际生产讨论了粉末冶金铜端环的制作工艺并研究采用全整形方式从而达到提高产品质量的目的。

关键词：粉末冶金铜端环工艺整形

慢阻肺急性加重期患者痰液病原菌分布及耐药情况

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医学检验与临床 2018年第7期29卷 42-44页

作者：牛莉娜洛阳市第七人民医院检验科河南洛阳471003

目的：分析慢阻肺急性加重期患者痰培养的病原菌分布及耐药情况.方法：选取2016年1月～2017年1月我院呼吸内科收治的210例慢阻肺急性加重期患者进行痰细菌培养,并采用Microscan WalkAway-40 Plus微生物自动分析系统对培养出的菌株进行... 详细信息

目的：分析慢阻肺急性加重期患者痰培养的病原菌分布及耐药情况.方法：选取2016年1月～2017年1月我院呼吸内科收治的210例慢阻肺急性加重期患者进行痰细菌培养,并采用Microscan WalkAway-40 Plus微生物自动分析系统对培养出的菌株进行鉴定和药敏试验.结果：210例患者痰培养分离出病原菌68株,阳性率32.3％,其中革兰氏阴性菌55株,占80.8％,革兰氏阳性菌3株,占病原菌总分布4.4％,真菌10株,占病原菌总分布14.7％.常见病原菌分别是肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌,肺炎克雷伯菌对头孢唑林中度耐药;对氨苄西林高度耐药;铜绿假单胞菌对氨曲南、复方新诺明、头孢曲松中度耐药,对头孢唑林、氨苄西林高度耐药;鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类、喹诺酮类、磺胺类、头孢菌素类抗菌药物呈广泛耐药,对碳青霉烯类较敏感.结论：慢阻肺患者痰液培养的主要病原菌是革兰氏阴性菌,对于反复感染、病情严重的患者要使用广谱抗菌药物治疗或联合用药,同时警惕真菌感染.

关键词：慢阻肺急性加重期住院痰细菌培养病原菌分布耐药

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临终关怀的探讨

中华全科医学 2011年第4期9卷 629-630页

作者：牛莉娜安徽省蚌埠市第三人民医院中西医结合科 233000

随着社会老龄化问题的日趋严重，临终患者的数目日益增多，越来越多的临终患者愿意在医院中等待死亡，把病房当成最后的家。现代医学模式强调生命尊严，提出既要高质量的生，也要高质量的死。只有“优生学”而没有“优死学”的年代将成... 详细信息

随着社会老龄化问题的日趋严重，临终患者的数目日益增多，越来越多的临终患者愿意在医院中等待死亡，把病房当成最后的家。现代医学模式强调生命尊严，提出既要高质量的生，也要高质量的死。只有“优生学”而没有“优死学”的年代将成为历史。

关键词：临终关怀探讨

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小儿肺炎支原体感染的临床检验分析

临床医学研究与实践 2016年第19期1卷 75-75,77页

作者：牛莉娜洛阳市第七人民医院检验科河南洛阳471003

目的对小儿肺炎支原体感染的临床检验情况进行详细分析,总结合适的临床检验方法,提高确诊率。方法回顾性分析我院2015年2月至2016年3月69例小儿肺炎支原体感染患儿的临床资料,所有患儿均接受血尿常规、血沉、生化检验、酶联免疫检测等... 详细信息

目的对小儿肺炎支原体感染的临床检验情况进行详细分析,总结合适的临床检验方法,提高确诊率。方法回顾性分析我院2015年2月至2016年3月69例小儿肺炎支原体感染患儿的临床资料,所有患儿均接受血尿常规、血沉、生化检验、酶联免疫检测等临床检验,对每种检验方式的检验结果进行总结。结果 69例患儿白细胞计数、血小板计数、C反应蛋白等指标均存在不同程度上升表现,尿常规检验结果异常27例,主要为尿潜血、尿蛋白、尿白细胞+、尿红细胞+等;生化检验结果显示,本组患儿肾功能未受到损伤,少部分患儿出现ALT轻度升高、低钾、低钙等表现;酶联免疫检测证实,本组患儿主要疾病为支气管哮喘、支气管肺炎、急性支气管炎、肺炎支原体上呼吸道感染。结论对小儿肺炎支原体感染患者行综合性临床检验方法,可进一步明确患儿病情,对患儿早期诊断及治疗具有促进作用。

关键词：小儿肺炎支原体感染临床检验早期诊断