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整合素β3在牦牛繁殖周期各阶段输卵管不同部位中的表达研究

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核农学报 2021年第11期35卷 2535-2541页

作者：钟董兰何翃闳潘阳阳杨珊珊王军乾杨贻余四九徐庚全甘肃农业大学动物医学院/甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心甘肃兰州730070

整合素β3作为整合素超家族的一员,在早期胚胎发育和胚胎附植中发挥着重要作用。为探究牦牛繁殖周期各阶段输卵管不同部位中整合素β3的表达情况,本研究采集繁殖周期不同阶段(卵泡期、黄体期和妊娠期)雌性牦牛的输卵管组织,按照输卵管... 详细信息

整合素β3作为整合素超家族的一员,在早期胚胎发育和胚胎附植中发挥着重要作用。为探究牦牛繁殖周期各阶段输卵管不同部位中整合素β3的表达情况,本研究采集繁殖周期不同阶段(卵泡期、黄体期和妊娠期)雌性牦牛的输卵管组织,按照输卵管不同部位(峡部、壶腹部和漏斗部)将试验材料分为九组,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(WB)检测整合素β3基因和蛋白在繁殖周期各阶段输卵管不同部位中的表达水平,运用免疫组织化学法对整合素β3进行定位。结果显示,在繁殖周期各阶段中,输卵管峡部的整合素β3表达量均显著高于壶腹部和漏斗部。在峡部中,整合素β3的表达量在妊娠期最高,黄体期最低;而在壶腹部和漏斗部中,整合素β3的表达量在卵泡期最高。免疫组织化学结果显示,整合素β3主要分布于牦牛输卵管的肌层、浆液腺、基细胞、黏膜上皮的分泌细胞、纤毛细胞中。综上所述,整合素β3在牦牛繁殖周期各阶段输卵管的不同部位均有表达,且存在表达差异,由此推测整合素β3对牦牛受精以及早期胚胎的发育发挥着重要作用。本研究结果为进一步探索整合素β3对牦牛生殖繁育的作用提供了理论依据。

关键词：整合素β3 输卵管繁殖周期表达

CYP19A1调控内源性雌激素合成促进牦牛COCs细胞自噬和早期发育能力

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畜牧兽医学报 2022年第12期53卷 4283-4295页

作者：王立斌王萌孙莹陈睿张甜甜黄振华张倩余四九潘阳阳甘肃农业大学动物医学院兰州730070 甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心兰州730070

旨在探索牦牛卵母细胞成熟过程中细胞色素P450芳香化酶(cytochrome P450arom,CYP19A1)对内源性雌激素(17β-estradiol,E_(2))分泌、卵母细胞自噬和后续胚胎发育能力的影响。本研究在牦牛卵丘卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,CO... 详细信息

旨在探索牦牛卵母细胞成熟过程中细胞色素P450芳香化酶(cytochrome P450arom,CYP19A1)对内源性雌激素(17β-estradiol,E_(2))分泌、卵母细胞自噬和后续胚胎发育能力的影响。本研究在牦牛卵丘卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)体外成熟过程中,分别用等体积生理盐水、最佳浓度E_(2)(10^(-7)mol·L^(-1))、CYP19A1诱导剂黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)、CYP19A1抑制剂双酚A(bisphenol A,BPA)处理,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)、Western blot和免疫荧光技术检测各组成熟COCs中CYP19A1表达水平,酶联免疫吸附方法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测诱导和抑制CYP19A1处理组牦牛成熟COCs培养液中E_(2)水平;分析不同处理组COCs细胞自噬调控关键因子:自噬相关基因5(autophagy related gene 5,ATG5)、微管相关蛋白轻链3(microtubule associated protein light chain 3,LC3)和Bcl-2同源结构域蛋白(Bcl-2 homologous domain protein,BECLIN1)表达,比较不同处理组卵母细胞成熟率、孤雌激活胚胎卵裂率、以卵裂胚胎数为基数的囊胚率。结果显示,AFB1处理组COCs中CYP19A1的表达水平上调,内源性E_(2)分泌增加,自噬相关因子ATG5、BECLIN1和LC3表达水平增加,且与对照组差异均显著(P0.05)。研究表明,牦牛COCs成熟过程中CYP19A1上调内源性E_(2)水平,其上调的E_(2)与外源性E_(2)生理功能具有相似性,均可诱导细胞自噬发生,提升早期卵母细胞发育能力,结果为深入探索生殖激素调控哺乳动物卵母细胞成熟的分子机制提供了理论依据。

关键词：雌激素细胞自噬细胞色素酶卵母细胞成熟胚胎发育

甘南牦牛三种血液原虫多重PCR检测方法建立及流行病学调查

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核农学报 2023年第4期37卷 699-706页

作者：陈亚明李勇生高生智张莉徐庚全潘阳阳余四九甘肃农业大学甘肃兰州730070 甘肃省动物疫病预防控制中心甘肃兰州730070

为建立一种能同时快速检测弓形虫、环形泰勒虫、新孢子虫3种甘南牦牛血液原虫的多重PCR检测方法,掌握3种血液原虫在甘南牦牛中的流行情况,本研究以弓形虫hypothetical protein基因、环形泰勒虫Tams1基因、新孢子虫Nc-p43基因为靶标设计... 详细信息

为建立一种能同时快速检测弓形虫、环形泰勒虫、新孢子虫3种甘南牦牛血液原虫的多重PCR检测方法,掌握3种血液原虫在甘南牦牛中的流行情况,本研究以弓形虫hypothetical protein基因、环形泰勒虫Tams1基因、新孢子虫Nc-p43基因为靶标设计3对特异性引物,通过优化多重PCR反应条件,建立检测3种血液原虫的多重PCR方法,并检测甘南地区629份牦牛血清样品,进行流行病学分析。结果显示,建立的牦牛3种血液原虫多重PCR检测方法,具有特异性强、敏感性高和重复性好的优点,检测弓形虫、环形泰勒虫和新孢子虫DNA的最低浓度分别为0.01、0.02、0.01 ng·μL^(-1);流行病学调查结果显示,弓形虫、环形泰勒虫和新孢子虫的阳性率分别为4.29%、3.66%、5.88%,并存在混合感染现象,整体混合感染率为13.68%;季节性流行病学分析显示,3种原虫单一感染率均为冬季最高、春季最低(P>0.05),整体感染率为冬季最高、夏季最低(P>0.05)。按不同年龄分析,0~3岁牦牛3种原虫的整体感染率为27.83%,大于3岁的整体感染率27.46%(P>0.05)。分析风险因素发现,季节和年龄均不是牦牛感染3种原虫的风险因素(P>0.05)。本研究成功建立的多重PCR检测方法,可用于牦牛弓形虫、环形泰勒虫和新孢子虫的鉴别检测和流行病学调查,并检测了甘南地区牦牛三种血液原虫的流行情况,为该病的预防提供了重要的数据支撑。

关键词：牦牛原虫多重PCR 流行病学调查

甘南牦牛三种消化道线虫多重PCR检测方法的建立及流行病学调查

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中国兽医科学 2023年第4期53卷 468-475页

作者：郝明超潘阳阳李勇生张莉徐庚全余四九甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃省动物疫病预防控制中心甘肃兰州730076

为建立一种能同时检测奥氏奥斯特线虫、捻转血矛线虫和环纹背带线虫的多重PCR检测方法,掌握三种线虫在甘南牦牛中的流行情况,本研究以三种线虫的核糖体ITS序列为靶标设计3对特异性引物,建立了多重PCR检测方法,同时检测986份甘南牦牛粪... 详细信息

为建立一种能同时检测奥氏奥斯特线虫、捻转血矛线虫和环纹背带线虫的多重PCR检测方法,掌握三种线虫在甘南牦牛中的流行情况,本研究以三种线虫的核糖体ITS序列为靶标设计3对特异性引物,建立了多重PCR检测方法,同时检测986份甘南牦牛粪便样品,对三种线虫进行流行病学分析。结果显示,本研究建立的多重PCR方法检测到奥氏奥斯特线虫、捻转血矛线虫、环纹背带线虫DNA的最低浓度分别为0.03、0.03、0.02 ng/μL,三种线虫的感染率分别为12.58%、14.30%、11.36%,混合感染率为12.98%。1—4月份3种消化道线虫的感染率显著高于5—8月份和9—12月份(P<0.01),3种消化道线虫的感染率在0~3岁与大于3岁的牦牛之间差异不显著。本研究成功建立了用于牦牛奥氏奥斯特线虫、捻转血矛线虫、环纹背带线虫的多重PCR检测方法;甘南牦牛三种线虫的流行率较高,提示甘南牦牛消化道线虫的防控不能忽视。

关键词：牦牛奥氏奥斯特线虫捻转血矛线虫环纹背带线虫多重PCR 甘南藏族自治州流行病学调查

胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对小鼠卵丘细胞自噬与胞吞相关因子表达的影响

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胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对小鼠卵丘细胞自噬与胞吞相关因子表...

金黄色葡萄球菌和大肠杆菌感染对BMEC炎性因子mRNA表达的影响

中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第八届会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：叶小琳马睿潘阳阳王萌崔燕余四九甘肃农业大学动物医学院/甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心

引言卵丘细胞的质量对卵母细胞生长发育至关重要,其自噬和胞吞可调控细胞生长及营养运输,以应对恶劣环境对卵母细胞质量的威胁。本研究在小鼠卵丘细胞体外培养过程中分别添加0、50、100、150和200 ng/mL IGF-1,通过qPCR和WB等方法分别...

引言卵丘细胞的质量对卵母细胞生长发育至关重要,其自噬和胞吞可调控细胞生长及营养运输,以应对恶劣环境对卵母细胞质量的威胁。本研究在小鼠卵丘细胞体外培养过程中分别添加0、50、100、150和200 ng/mL IGF-1,通过qPCR和WB等方法分别从基因和蛋白水平检测其对Atg5、Beclin1、

关键词：

来源： cnki会议评论

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中国兽医科学 2018年第7期48卷 910-917页

作者：赵凌潘阳阳何翃闳李秦樊江峰王萌崔燕余四九甘肃农业大学动物医学院

为了探讨金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）在不同时间点对奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells,BMECs）相关炎性因子转录水平的调节作用。本试验通过体外培养BMECs并对其进行免... 详细信息

为了探讨金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）在不同时间点对奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells,BMECs）相关炎性因子转录水平的调节作用。本试验通过体外培养BMECs并对其进行免疫细胞化学方法鉴定。选取纯化后的原代BMECs,分别加入活菌比（MOI）为100∶1的最佳浓度的金黄色葡萄球菌或大肠杆菌对细胞进行感染,分别在感染后第0、3、6、9、12小时采样,采用qRT-PCR法检测IL1R1、IL-1β及TNF-α基因mRNA的表达情况。结果显示,在添加1×102CFU/m L金黄色葡萄球菌作用至第6小时IL1R1基因相对表达量显著高于其他时间点（P〈0.5）;在添加1×104CFU/m L金黄色葡萄球菌作用至第9小时,IL-1β基因相对表达量显著高于其他时间点（P〈0.5）;在添加1×103CFU/m L金黄色葡萄球菌作用至第12小时,TNF-α基因相对表达量显著高于其他时间点（P〈0.5）。在添加1×101CFU/m L大肠杆菌作用至第6小时,IL1R1基因相对表达量显著高于其他时间点（P〈0.5）;在添加1×103CFU/m L大肠杆菌作用至第9小时,IL-1β基因相对表达量显著高于其他时间点（P〈0.5）;在添加1×104CFU/m L大肠杆菌作用至第12小时,TNF-α基因相对表达量显著高于其他时间点（P〈0.5）。本试验结果表明,使用最佳浓度金黄色葡萄球菌或大肠杆菌作用于BMECs时,在最佳感染时间点可显著上调IL1R1、IL-1β及TNF-α基因mRNA的表达量。IL1R1、IL-1β及TNF-αmRNA表达量在临床上可作为创伤后炎症反应的敏感指标,能评价炎症反应的严重程度,对乳腺炎的病程诊断具有重要意义。本试验结果为进一步研究细菌感染引起乳腺炎的致病机理提供了理论依据。

关键词：金黄色葡萄球菌大肠杆菌奶牛乳腺上皮细胞实时荧光定量PCR

E-cadherin在牦牛不同繁殖周期输卵管不同部位中的表达与定位

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核农学报 2022年第1期36卷 57-65页

作者：杨珊珊何翃闳刘敏清赵凌王靖雷余四九蔡得琪潘阳阳甘肃农业大学动物医学院/甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心甘肃兰州730070 甘肃省金昌市金川区农业农村局甘肃金昌737100

为研究上皮钙粘蛋白(E-cadherin)在不同繁殖周期牦牛输卵管不同部位中的表达差异,本研究采集卵泡期、黄体期和妊娠期无临床病理表现的母牦牛(3~6岁)输卵管伞部、壶腹部和峡部的样品,将不同繁殖周期输卵管分别按照伞部、壶腹部和峡部分为... 详细信息

为研究上皮钙粘蛋白(E-cadherin)在不同繁殖周期牦牛输卵管不同部位中的表达差异,本研究采集卵泡期、黄体期和妊娠期无临床病理表现的母牦牛(3~6岁)输卵管伞部、壶腹部和峡部的样品,将不同繁殖周期输卵管分别按照伞部、壶腹部和峡部分为9组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(western-blotting)检测E-cadherin基因和蛋白在不同时期牦牛输卵管不同部位中的表达情况,运用免疫组织化学法检测E-cadherin在不同时期牦牛输卵管不同部位中的定位。结果显示,在卵泡期,E-cadherin基因和蛋白在输卵管壶腹部的表达量最高,显著高于伞部和峡部;在黄体期,E-cadherin基因和蛋白在输卵管峡部的表达量最高,显著高于伞部和壶腹部;在妊娠期,E-cadherin基因在输卵管壶腹部的表达量最高,显著高于伞部和峡部,而E-cadherin蛋白在输卵管壶腹部的表达量最高,显著高于伞部。在输卵管伞部,E-cadherin基因在黄体期的表达量最高,显著高于卵泡期和妊娠期,而E-cadherin蛋白在卵泡期的表达量最高,显著高于黄体期和妊娠期;在输卵管壶腹部,E-cadherin基因和蛋白在妊娠期的表达量最高,显著高于卵泡期和黄体期;在输卵管峡部,E-cadherin基因和蛋白在黄体期的表达量最高,显著高于卵泡期和妊娠期。免疫组织化学结果显示,E-cadherin主要分布于输卵管伞部、壶腹部和峡部的纤毛细胞、分泌细胞、基细胞、肌层和浆液腺等部位。E-cadherin在牦牛繁殖周期输卵管不同部位中的均有表达,且其基因和蛋白的表达存在显著差异,说明E-cadherin可能参与了牦牛卵母细胞的生长和成熟、精子储存和获能、受精及早期胚胎发育等一系列生殖过程。本研究为进一步明确E-cadherin对牦牛繁殖性能的生物学作用提供了基础资料。

关键词：上皮钙粘蛋白牦牛输卵管繁殖周期表达

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杭州市典型住户用能行为实测分析

建筑与文化 2017年第5期 141-142页

作者：潘阳阳葛坚陈淑琴浙江大学建筑工程学院

建筑节能具有复杂的系统属性,包括建筑系统形式、气象条件和人员用能等。目前居住建筑的节能设计由于缺乏对住户内人员用能行为的准确分析导致实际的节能效果并不理想,因而在进行节能设计改造前需对人员用能行为进行研究分析。本文选取... 详细信息

建筑节能具有复杂的系统属性,包括建筑系统形式、气象条件和人员用能等。目前居住建筑的节能设计由于缺乏对住户内人员用能行为的准确分析导致实际的节能效果并不理想,因而在进行节能设计改造前需对人员用能行为进行研究分析。本文选取杭州市区某住户进行调研和监测,以实测数据为基础,分析住户成员用能行为的时间特征、随机性特征和环境影响特征等。该研究方法可应用到其他不同类型住户的研究中,为建筑节能设计提供参考依据。

关键词：建筑节能居住建筑用能行为实测数据

抑制素A对牦牛颗粒细胞FSH、LH及其受体表达的影响

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核农学报 2023年第1期37卷 51-59页

作者：王立斌王军乾赵凌黄振华王萌王靖雷余四九潘阳阳甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心甘肃兰州730070

为了探明抑制素A(INHA)对牦牛卵泡颗粒细胞中促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)与其受体结合发挥的作用,通过体外培养牦牛卵泡颗粒细胞,采用免疫荧光技术(IF)检测促卵泡素受体(FSHR)和促黄体素受体(LHR)在颗粒细胞中的分布情况,用不同浓度外... 详细信息

为了探明抑制素A(INHA)对牦牛卵泡颗粒细胞中促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)与其受体结合发挥的作用,通过体外培养牦牛卵泡颗粒细胞,采用免疫荧光技术(IF)检测促卵泡素受体(FSHR)和促黄体素受体(LHR)在颗粒细胞中的分布情况,用不同浓度外源性INHA(0、1.25、2.5、5、10、20 ng·mL^(-1))作用12 h后,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测颗粒细胞中FSHβ、LHβ、FSHR、LHR基因的表达情况,采用酶联免疫分析试验(ELISA)检测细胞内外FSH、LH的含量。结果显示,FSHR和LHR在颗粒细胞质与细胞核中均有表达。FSHβ和LHβ基因在颗粒细胞中的表达随INHA浓度的增大呈先降后升的趋势;INHA浓度接近5 ng·mL^(-1)时,FSHβ表达最低;INHA浓度接近10 ng·mL^(-1)时,LHβ表达最低;FSHR和LHR基因的表达与INHA浓度呈负相关。INHA浓度接近5 ng·mL^(-1)时,颗粒细胞内外FSH含量最低;INHA浓度接近10 ng·mL^(-1)时,颗粒细胞内外LH含量最低;其他INHA浓度下,当颗粒细胞内容物中FSH和LH含量降低时,细胞上清中含量升高。综上所述,INHA对FSHR和LHR基因在颗粒细胞中的表达存在明显的抑制作用,并且影响FSHβ和LHβ基因在颗粒细胞中的表达。研究表明INHA可以抑制牦牛卵泡颗粒细胞中FSH、LH与其受体的结合;同时,INHA对颗粒细胞内外FSH和LH的含量具有重要调节作用。本研究为进一步探索抑制素对雌性牦牛生殖调控的影响提供了理论依据。

关键词：颗粒细胞抑制素A(INHA) 促卵泡素(FSH) 促黄体素(LH) 受体

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