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作者：潘道延南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景2型糖尿病是一种遗传因素和环境因素共同作用而形成的多基因遗传性复杂疾病。近年来发病率逐年上升,严重危害了人类的身体健康并急剧加重了社会医疗成本。目前认为系统性(全身性)慢性炎症在2型糖尿病的发病机制中发挥着极其重... 详细信息

研究背景2型糖尿病是一种遗传因素和环境因素共同作用而形成的多基因遗传性复杂疾病。近年来发病率逐年上升,严重危害了人类的身体健康并急剧加重了社会医疗成本。目前认为系统性(全身性)慢性炎症在2型糖尿病的发病机制中发挥着极其重要的作用。研究证实,肠道革兰氏阴性杆菌的细胞壁成分脂多糖(LPS)诱导的全身系统性炎症是2型糖尿病、肥胖等代谢性疾病发病机制中的重要因素。这种循环中的脂多糖水平较正常值高2-3倍的病理现象被定义为“代谢性内毒素血症”。内循环中增多的LPS不仅可以引起肝脏的炎症,促进肝脏纤维化,还可以导致肌肉、脂肪等组织的炎症,介导胰岛素抵抗的产生。在不良的生活方式如高脂饮食的影响下,脂质会在肠上皮间隙过度堆积,破坏肠道紧密连接结构,另外肠道微环境包括肠道菌群等的改变,还会触发肠道炎症,使得肠屏障功能受损,肠道通透性增加,从而导致LPS入血增多。提示肠黏膜屏障功能的损害是代谢性内毒素血症发生机制中极其重要的环节。在维持肠黏膜屏障正常功能的诸多因素中,紧密连接(TJ)的作用十分重要,其不仅是肠上皮机械屏障的最重要的结构基础,也是调节细胞旁物质转运的限速步骤。紧密连接(TJ)主要由跨膜蛋白claudin、occludin和膜周蛋白zonula occludens (ZO)等组成,主要功能是维持肠上皮细胞的极性和调节肠道屏障的通透性,减少肠道大分子和微生物通过肠壁进入机体内环境。益生元、益生菌等调节肠道菌群或改善肠道炎症的手段可以通过减轻2型糖尿病或肥胖大鼠的肠道紧密连接蛋白的损伤,减轻肠道炎症,减少肠道LPS进入机体内环境。改善肠黏膜屏障功能,降低肠道通透性,减少肠道细菌代谢产物如脂多糖进入血循环目前被认为是改善诸如肥胖、2型糖尿病等代谢性疾病的一种新的治疗策略。胰高血糖素样肽-2(glucagon-likepeptide-2,GLP-2)是肠道L细胞分泌的一种多肽类物质,也是肠上皮特异性生长因子,其促进肠黏膜生长的作用明显强于其他肠上皮生长因子,对损伤的肠道上皮拥有强大的修复功能,可以明显上调肠上皮紧密连接蛋白的表达,显著的改善肠黏膜屏障功能。同GLP-1类似,GLP-2也可以被DPP-4酶降解失活。另外有研究表明,在介导代谢性炎症及胰岛素抵抗中拥有极其重要功能的蛋白酶激活受体2(protease activated receptors 2,PAR2),在促进肠道炎症,诱导肠黏膜损伤方面也有着举足轻重的作用。肠道激活的PAR2不仅可以诱导肥大细胞脱颗粒和激活核转录因子NF-κB,促进炎性因子的释放和炎性细胞的迁移浸润,引起肠道黏膜的损伤,还可以通过激活胞浆中的ERKl/2,促使肠道紧密连接蛋白和其周围肌动蛋白的重新分布,增加肠道通透性。近期有研究发现,DPP-4酶可能作为PAR2的激动剂参与了PAR2的各项病理生理活动,推测抑制DPP-4酶的活性可能可以减少肠道PAR2的激活,减轻其介导的肠黏膜损伤作用。使用DPP-4酶抑制剂抑制肠道GLP-2的水解和PAR2的激活,可能会对2型糖尿病大鼠肠黏膜屏障功能起到保护作用,从而减少肠道LPS入血,减轻代谢性内毒素血症。本研究通过检测2型糖尿病大鼠近端结肠紧密连接蛋白ZO-1、occludin的表达及门静脉血浆LPS和相关炎症因子水平的变化,探讨DPP-4酶抑制剂利格列汀对肠黏膜屏障及代谢性内毒素血症的保护作用及其可能的机制,为挖掘DPP-4酶抑制剂降糖之外的作用、扩展DPP-4酶抑制剂在临床的应用范围以及治疗肥胖及胰岛素抵抗等相关疾病提供新的策略和依据。研究方法：30只SPF级雄性SD大鼠,体重在180-200g之间,使用随机数字表随机分为正常对照组(NC组,n=10)和糖尿病组(T2DM组,n=20),正常对照组予普通饲料喂养,糖尿病组予高脂饲料喂养,第8周末两组大鼠禁食12 h,糖尿病组大鼠腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ,35 mg/kg)2次(间隔7天)进行造模,普通饮食组同时腹腔注射等体积柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。第9周末末次注射STZ 72 h后,门静脉取血测空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS),以胰岛素抵抗、空腹血糖≥111 mmol/L作为T2DM诊断的标准。将造模成功的大鼠按照随机数字表随机分为模型对照组和利格列汀干预组,利格列汀干预组予利格列汀3mg/kg/d连续灌胃4周,模型对照组和正常对照组均给予等体积生理盐水灌胃,继续饲养至13周末。观察各组大鼠食欲、毛发、大小便、行为及整体状态情况,根据大鼠体质量调整给药剂量。灌胃药液均每天配制。末次给药后,所有大鼠空腹过夜,称量体质量。以10%水合氯醛腹腔注射进行麻醉,经门静脉取血,离心取上清,-20℃保存,用于血清学指标的测定;截取近回盲部(<4cm)的近端结肠组织,于液氮中速冻,然后-80℃保存;全自动生化仪检测空腹

关键词：利格列汀 2型糖尿病紧密连接蛋白代谢性内毒素血症

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红细胞分布宽度、纤维蛋白原与D-二聚体预测糖尿病足发生发展风险的价值

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中国组织工程研究 2019年第23期23卷 3716-3721页

作者：黄泳清沈洁袁思捷潘道延南方医科大学第三附属医院内分泌与代谢科

背景:血栓形成相关指标红细胞分布宽度、纤维蛋白原、D-二聚体可能是预测糖尿病足发生发展的重要标志。目的:分析红细胞分布宽度、纤维蛋白原、D-二聚体预测糖尿病足发生发展风险的临床价值。方法:收集糖尿病足患者81例、2型糖尿病患者8... 详细信息

背景:血栓形成相关指标红细胞分布宽度、纤维蛋白原、D-二聚体可能是预测糖尿病足发生发展的重要标志。目的:分析红细胞分布宽度、纤维蛋白原、D-二聚体预测糖尿病足发生发展风险的临床价值。方法:收集糖尿病足患者81例、2型糖尿病患者82例、健康人67例做回顾性病例-对照分析。临床研究的实施符合南方医科大学第三附属医院对研究的相关伦理要求。所有受试者及家属对试验过程均知情同意,并签署知情同意书。对比3组受试者红细胞分布宽度、纤维蛋白原、D-二聚体;Logistic回归分析糖尿病患者糖尿病足的相关危险因素;应用受试者工作特征曲线得出红细胞分布宽度、纤维蛋白原、D-二聚体对预测糖尿病足发生的最佳切点及其敏感性、特异性;利用Spearman相关分析分析红细胞分布宽度、纤维蛋白原与D-二聚体的相关性。结果与结论:①糖尿病足组红细胞分布宽度、纤维蛋白原、D-二聚体均高于2型糖尿病组及健康组(P=0.000);②二元逻辑回归分析提示纤维蛋白原升高是糖尿病足的独立危险因素(OR=4.253,P=0.046);红细胞分布宽度、纤维蛋白原、D-二聚体与糖尿病足的相关系数分别为0.616,0.724,0.797,P均小于0.001。③受试者工作特征曲线分析提示,红细胞分布宽度、纤维蛋白原、D-二聚体预测糖尿病足发生的切点分别为40%、3g/L、329mg/L,敏感度分别为77.78%,72.73%、93.33%,特异度分别为71.95%、92.98%,88.24%;④结果说明,红细胞分布宽度、纤维蛋白原、D-二聚体对预测糖尿病足的发生发展风险具有一定的临床意义。

关键词：糖尿病足红细胞分布宽度纤维蛋白原 D-二聚体风险

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代谢手术对男性重度肥胖患者性激素水平影响的Meta分析

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中国糖尿病杂志 2015年第9期23卷 801-809页

作者：李文婷李章芳陈远程潘道延沈洁南方医科大学第三附属医院内分泌代谢科广州510515

目的探讨代谢手术（BS）治疗男性重度肥胖患者对性激素水平的影响。方法计算机检索医学文献数据库相关文献,行质量评价并提取数据,采用STATA 12.0对提取信息进行合并。以随机及固定模型转换行敏感性分析,并采用Q检验及χ2检验。行单个... 详细信息

目的探讨代谢手术（BS）治疗男性重度肥胖患者对性激素水平的影响。方法计算机检索医学文献数据库相关文献,行质量评价并提取数据,采用STATA 12.0对提取信息进行合并。以随机及固定模型转换行敏感性分析,并采用Q检验及χ2检验。行单个协变量的Meta分析,探索异质性来源。结果共纳入文献14篇,样本数400例。手术后卵泡刺激素（FSH）（1.15 U/L,95%CI：0.66~1.64,P〈0.001）、黄体生成素（LH）水平（0.94U/L,95%CI：0.41~1.47,P=0.001]、血清总睾酮（TT）（8.19nmol/L,95%CI：6.14~10.24,P〈0.001）、游离睾酮（cFT）（44.67pmol/L,95%CI：24.45~64.89,P〈0.001）、性激素结合球蛋白（SHBG）（18.39nmol/L,95%CI：10.64~26.14,P〈0.001）较术前增高,而雌二醇（E2）水平降低（30.00pmol/L,95%CI：12.61~47.38,P=0.001）。结论 BS有助于恢复男性肥胖患者内环境的性激素平衡。

关键词：肥胖性腺功能减退糖尿病代谢手术男性 Meta分析

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沉默DEPTOR表达促进胰岛细胞释放胰岛素

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中国组织工程研究 2018年第16期22卷 2577-2582页

作者：邱鸿赖舒畅潘道延王肖沈洁南方医科大学第三附属医院广东省广州市510630

背景:mTOR复合物是调控胰岛β细胞质量与功能的关键蛋白,Deptor是复合物中的共有组分,Deptor的丢失是否会影响胰岛β细胞的胰岛素分泌功能,目前尚缺乏相关研究。目的:利用si RNA干扰技术沉默小鼠胰岛素瘤NIT-1细胞DEPTOR基因的表达,探... 详细信息

背景:mTOR复合物是调控胰岛β细胞质量与功能的关键蛋白,Deptor是复合物中的共有组分,Deptor的丢失是否会影响胰岛β细胞的胰岛素分泌功能,目前尚缺乏相关研究。目的:利用si RNA干扰技术沉默小鼠胰岛素瘤NIT-1细胞DEPTOR基因的表达,探讨其对胰岛素瘤细胞分泌功能的影响及背后的机制。方法:设计合成3对针对DEPTOR基因的si RNA序列,利用脂质体法将si RNA转染至NIT-1细胞。实验组设为6组:(1)空白转染组(NIT-1细胞,转染复合液仅加Lipofectamin);(2)阴性对照转染组(NC-FAM);(3)阳性对照转染组(GAPDH);(4)si RNA deptor 1组(脂质体介导的转染复合+si RNA deptor385);(5)si RNA deptor 2组(脂质体介导的转染复合+si RNA deptor766);(6)si RNA deptor 3组(脂质体介导的转染复合+si RNA deptor1275)。荧光显微镜下观察转染效率;QPCR检测DEPTOR m RNA的相对表达量;ELISA胰岛素试剂盒检测NIT-1细胞胰岛素分泌情况;Western blot检测DEPTOR下游关键蛋白的表达。结果与结论:(1)在荧光显微镜下观察,si RNA能有效转入到NIT-1细胞内,呈绿色点状荧光;(2)PCR检测干扰后DEPTOR m RNA的相对表达量,发现设计合成3对si RNA序列中有两对si RNA序列(si DEPTOR385and si DEPTOR766)对DEPTOR基因有干扰效果,干扰效果与阴性对照差异有显著性意义(P<0.05);(3)ELISA胰岛素测定结果显示,在NIT-1细胞中沉默DEPTOR后,有效转染组细胞的胰岛素分泌显著升高(P<0.05);(4)Western-blot检测结果显示,Deptor下游关键蛋白S6、4EBP-1磷酸化明显增加,AKT磷酸化略有减少;(5)结果说明,利用RNAi技术在NIT-1细胞上可以有效地沉默DEPTOR基因的表达,并促进细胞胰岛素的分泌,该现象可能与mTORC1通路的激活相关。

关键词：胰岛素分泌细胞胰岛素瘤基因沉默 DEPTOR 胰岛细胞 RNA干扰胰岛素分泌

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二甲双胍对老年2型糖尿病患者血浆乳酸水平的影响

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中国老年学杂志 2017年第12期37卷 2956-2957页

作者：韩亚娟张彤刘瑛吴琳英潘道延南方医科大学第三附属医院内分泌代谢科广东广州510620 安徽医科大学附属巢湖医院内分泌科广州医科大学附属第一医院内分泌科

目的观察老年2型糖尿病(T2DM)患者二甲双胍治疗后血浆乳酸水平的变化。方法收集104例老年T2DM患者的资料,按有无使用二甲双胍分为两组:使用二甲双胍超过3个月者51例(老年双胍组);未使用二甲双胍者53例(老年对照组)。同时收集使用二甲双... 详细信息

目的观察老年2型糖尿病(T2DM)患者二甲双胍治疗后血浆乳酸水平的变化。方法收集104例老年T2DM患者的资料,按有无使用二甲双胍分为两组:使用二甲双胍超过3个月者51例(老年双胍组);未使用二甲双胍者53例(老年对照组)。同时收集使用二甲双胍的中年T2DM患者91例作为中年双胍组。比较三组血浆乳酸水平。结果老年双胍组血浆乳酸水平较老年对照组(t=0.902,P=0.369)及中年双胍组(t=0.359,P=0.720)无显著差异;老年双胍组及对照组的内生肌酐清除率(Ccr)明显低于中年双胍组(t=8.924,P=0.000和t=2.865,P=0.005);老年T2DM患者二甲双胍的用量与中年患者无显著差异(t=0.686,P=0.494)。结论二甲双胍在一定剂量范围内用于治疗老年T2DM患者不会增加乳酸酸中毒的风险。

关键词：二甲双胍 2型糖尿病乳酸

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肠道菌群与2型糖尿病研究进展

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中华临床营养杂志 2015年第2期23卷 121-124页

作者：李文婷潘道延陈远程李章芳沈洁南方医科大学第三附属医院内分泌代谢科广州510630

2型糖尿病是一种代谢疾病，其发病率日益增加，造成了巨大的社会经济负担。肠道菌群指定居于人体肠道的微生物群体，作为与人类紧密联系的环境因素，参与人体生长发育、生理过程，甚至疾病状态。近年来关于肠道菌群与2型糖尿病的关系的... 详细信息

2型糖尿病是一种代谢疾病，其发病率日益增加，造成了巨大的社会经济负担。肠道菌群指定居于人体肠道的微生物群体，作为与人类紧密联系的环境因素，参与人体生长发育、生理过程，甚至疾病状态。近年来关于肠道菌群与2型糖尿病的关系的研究已经成为内分泌代谢领域的热点问题。本文拟就2型糖尿病与肠道菌群的关系做一综述，梳理该方面研究的最新进展，提示这一领域的进一步研究方向。

关键词：肠道菌群 2型糖尿病胰岛素抵抗肠道代谢异常

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肾素-血管紧张素-醛固酮系统与糖尿病肾病

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中华临床医师杂志（电子版） 2015年第4期9卷 1-5页

作者：潘道延沈洁南方医科大学第三附属医院内分泌代谢科广州510630

糖尿病肾病作为糖尿病的一种慢性并发症,近年来其发病率随着糖尿病的发病率不断上升也呈现逐年上升的趋势。肾素‐血管紧张素‐醛固酮系统(RAAS)的激活在糖尿病肾病的发生发展中有着极其重要的地位,使用RAAS抑制剂可以明显地控制血压、... 详细信息

糖尿病肾病作为糖尿病的一种慢性并发症,近年来其发病率随着糖尿病的发病率不断上升也呈现逐年上升的趋势。肾素‐血管紧张素‐醛固酮系统(RAAS)的激活在糖尿病肾病的发生发展中有着极其重要的地位,使用RAAS抑制剂可以明显地控制血压、减少尿蛋白、减轻肾小球高滤过、延缓肾间质纤维化。一些大型的临床试验已经证实抑制RAAS的治疗可以明显减轻糖尿病肾病患者微量白蛋白尿及大量白蛋白尿的产生及发展,延缓糖尿病肾病的进展,减少终末期肾病的发病率。但目前关于联合应用RAAS阻滞剂因其不良事件的明显增加还需要我们进一步探索解决。

关键词：肾素-血管紧张素系统糖尿病肾病治疗

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温敏水凝胶负载脂源性干细胞对糖尿病大鼠皮肤创面血管新生影响的观察

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中国糖尿病杂志 2017年第5期25卷 449-453页

作者：林凯桑范丽君王思妤潘道延沈洁南方医科大学第三附属医院内分泌代谢科广州510630 澳门大学健康科学学院

目的观察和探讨普兰尼克F127(PF127)温敏水凝胶负载脂源性干细胞(ADSCs)移植对糖尿病大鼠皮肤创面血管新生的影响。方法胶原酶消化法分离培养健康SD大鼠ADSCs并流式鉴定细胞表型。建立SD大鼠模型24只,在背部对称制作2个直径9 mm的全层... 详细信息

目的观察和探讨普兰尼克F127(PF127)温敏水凝胶负载脂源性干细胞(ADSCs)移植对糖尿病大鼠皮肤创面血管新生的影响。方法胶原酶消化法分离培养健康SD大鼠ADSCs并流式鉴定细胞表型。建立SD大鼠模型24只,在背部对称制作2个直径9 mm的全层皮肤切口,随机分为4组,创面注射ADSCs-PF127复合物(ADSCs-·PF127)组、ADSCs组、PF127组及PBS组,每组6只。术后评估各组创面愈合率,CD31免疫组织化学染色观察新生血管情况,qPCR检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果 ADSCs-PF127组愈合较快,术后14 d时愈合率为(97.8±1.8)%,高于其他3组(P=0.000)。免疫组织化学结果显示,术后7 d,ADSCs-PF127组和ADSCs组的血管数直观较PF127组、PBS组丰富,对术后14 d进行微血管计数,ADSCs-PF127组微脉管数高于ADSCs组[(21.0±2.4)vs(15.7±1.4)个,P=0.000]。qPCR结果显示,ADSCs-PF127组在7 d、14 d时,VEGF均高于其他组(P<0.05)。结论PF127水凝胶负载ADSCs可通过促进糖尿病大鼠创面新生毛细血管形成,从而加速创面愈合。

关键词：脂源性干细胞水凝胶创面愈合血管新生

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不同糖代谢状态人群慢性肾脏病的患病率及危险因素

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南方医科大学学报 2016年第5期36卷 697-700页

作者：肖倩蓉范丽君蒋薇赵德福万亨潘道延林旭张彤沈洁南方医科大学第三附属医院内分泌与代谢科广东广州510630

目的探讨不同糖代谢状态人群的慢性肾脏病(CKD)患病率及危险因素。方法本横断面研究纳入2015年1月~2015年10月于南方医科大学体检中心及内分泌科门诊就诊的患者共934例,其中糖尿病患者425例,糖尿病前期患者243例,血糖正常人群266例,收... 详细信息

目的探讨不同糖代谢状态人群的慢性肾脏病(CKD)患病率及危险因素。方法本横断面研究纳入2015年1月~2015年10月于南方医科大学体检中心及内分泌科门诊就诊的患者共934例,其中糖尿病患者425例,糖尿病前期患者243例,血糖正常人群266例,收集其一般资料及实验室检查等数据。CKD诊断标准采用:估算的肾小球滤过率(e GFR)<60 m L/min/1.73 m^2和/或尿微量白蛋白与尿肌酐比值(ACR)≥30 mg/g,建立多元Logistic回归模型探讨糖尿病前期与CKD的关系。结果血糖正常组、糖尿病前期组和糖尿病组的CKD患病率分别为10.2%,26.3%,32.5%。糖尿病前期患者的CKD患病率较血糖正常组升高(P<0.001,OR=3.17,95%CI 1.94-5.17),糖尿病患者的CKD患病率较血糖正常组升高(P<0.001,OR=4.27,95%CI 2.72-6.65),糖尿病前期患者与糖尿病患者相比,CKD患病率无明显差异(P=0.115,OR=1.35,95%CI 0.95-1.91)。Logistic回归模型分析显示,校正性别、年龄、血压、高血压病史、血尿酸等混杂因素后,糖尿病前期(OR=2.03,95%CI 1.02-4.03,P=0.044)、糖尿病(OR=2.22,95%CI 1.16-4.25,P=0.016)分别与CKD独立相关。结论糖尿病前期与CKD独立相关,因此提高糖尿病前期人群的检出率和管理水平、积极从糖尿病前期就采取干预措施防治CKD是十分有必要的。

关键词：糖尿病前期糖尿病慢性肾脏病患病率

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条件性胰岛β细胞DEPTOR基因敲除小鼠构建及鉴定

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实用医学杂志 2018年第4期34卷 552-555页

作者：赖舒畅邱鸿王肖潘道延王桢钰李凯白晓春沈洁南方医科大学第三附属医院内分泌科广州510515 广州中医药大学经济与管理学院广州510515 南方医科大学第三附属医院医学实验研究中心广州510515

目的构建并鉴定条件性胰岛β细胞DEPTOR基因敲除小鼠,为研究DEPTOR基因在糖尿病发生机制的研究提供动物模型。方法将引进的条件性胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶小鼠与DEPTOR^(loxp/loxp)小鼠进行杂交繁殖,并对子代进行基因型鉴定,获得... 详细信息

目的构建并鉴定条件性胰岛β细胞DEPTOR基因敲除小鼠,为研究DEPTOR基因在糖尿病发生机制的研究提供动物模型。方法将引进的条件性胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶小鼠与DEPTOR^(loxp/loxp)小鼠进行杂交繁殖,并对子代进行基因型鉴定,获得基因型为DEPTOR^(loxp/-)Cre^(+/-)的小鼠;再让DEPTOR^(loxp/-)Cre^(+/-)的小鼠与DEPTOR^(loxp/loxp)小鼠杂交获得DEPTOR^(loxp/loxp)Cre^(+/-)小鼠;基因型为DEPTOR^(loxp/loxp)Cre^(+/-)的小鼠即为本实验所需要构建模型小鼠。3周龄时通过PCR法鉴定小鼠的基因型;8周龄时腹腔注射他莫昔芬诱导Cre重组酶表达后,免疫荧光验证DEPTOR基因敲除效果。结果从引进这两种小鼠开始繁殖10个月,共获得基因型为DEPTOR^(loxp/loxp)Cre^(+/-)的小鼠10只,PCR结果证实小鼠的基因型符合DEPTOR^(loxp/loxp)Cre^(+/-)。免疫荧光结果提示敲除效果明显。结论利用Cre/loxp系统,本研究成功构建并鉴定了条件性胰岛β细胞DEPTOR基因敲除小鼠,为在动物水平研究DEPTOR基因在糖尿病发病机制中的作用提供研究平台。

关键词： DEPTOR Cre/loxp系统胰岛β细胞

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