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青虾“软壳综合症”病原及其特性

微生物学通报 2009年第10期36卷 1571-1576页

作者：潘晓艺沈锦玉李建应贺宝祥尹文林郝贵杰徐洋姚嘉赟中国水产科学研究院鱼类健康与免疫重点实验室浙江省淡水水产研究所浙江湖州313001 德清县水产技术推广站浙江湖州313100

从患软壳综合症的濒死青虾体内分离到一株细菌QXL0711B,经人工感染试验,其对青虾的半数致死浓度(LC50)为1.47×106CFU/mL,具有较强毒力。API32E系统鉴定及16SrRNA序列分析,该病原菌为维罗纳气单胞菌温和生物变种(Aeromonas veronii biov... 详细信息

从患软壳综合症的濒死青虾体内分离到一株细菌QXL0711B,经人工感染试验,其对青虾的半数致死浓度(LC50)为1.47×106CFU/mL,具有较强毒力。API32E系统鉴定及16SrRNA序列分析,该病原菌为维罗纳气单胞菌温和生物变种(Aeromonas veronii biovar sobria,登录号:FJ808727)。其系统发育分析表明,菌株QXL0711B与维罗纳气单胞菌(登录号:X71120)和维罗纳气单胞菌温和生物变种(登录号:AY987729)的亲缘关系最近,其同源性都为99%。药敏实验结果表明:菌必治、复达欣、环丙沙星、恩诺沙星、氟哌酸等5种化学疗剂对该病原菌有较强的抑菌作用。

关键词：青虾软壳综合症维罗纳气单胞菌日本沼虾

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)半乳糖凝集素PtGAL的基因克隆与原核重组表达

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海洋与湖沼 2016年第6期47卷 1241-1249页

作者：郝贵杰林锋母昌考李荣华姚嘉赟潘晓艺袁雪梅沈锦玉王春琳宁波大学海洋学院宁波315211 农业部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室浙江省淡水水产研究所湖州313001

半乳糖凝集素(Galectin)是动物凝集素家族的一员,在脊椎动物和无脊椎动物中都参与了重要的免疫防御反应,是一种重要的免疫因子。通过RT-PCR和RACE技术克隆获得了三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)半乳糖凝集素基因全长,并命名为PtGa... 详细信息

半乳糖凝集素(Galectin)是动物凝集素家族的一员,在脊椎动物和无脊椎动物中都参与了重要的免疫防御反应,是一种重要的免疫因子。通过RT-PCR和RACE技术克隆获得了三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)半乳糖凝集素基因全长,并命名为PtGal。该基因全长875bp,开放阅读框为669bp,编码222个氨基酸,包含一个糖识别结构域CRD(位于16—142位氨基酸),预测蛋白的分子量(Mw)为23529.4Da,理论等电点(p I)为5.21。同源性比对结果显示,PtGal编码的氨基酸序列与中华绒螯蟹、南美白对虾、日本囊对虾galectin的同源性分别为77%、66%、58%。实时荧光定量PCR(qRT-RCR)结果表明,PtGal在三疣梭子蟹肝胰腺、肌肉、肠、胃、鳃、心脏、性腺中都有表达,其中在性腺中的表达量最高,在肝胰腺中的表达量最低,但人工感染溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)后,肝胰腺的表达呈先升高后降低的趋势。利用原核表达系统对三疣梭子蟹PtGal进行了重组表达,并通过纯化复性获得了重组目的蛋白rPtGal,ELISA检测rPtGal与不同细菌及真菌的结合活性,结果表明,该重组蛋白与革兰氏阳性菌、阴性菌和真菌均有较强的结合。本研究为进一步深入研究三疣梭子蟹半乳糖凝集素的功能奠定了基础。

关键词：三疣梭子蟹半乳糖凝集素实时荧光定量PCR 溶藻弧菌重组蛋白

四氢异喹啉衍生物的合成及体外抗多子小瓜虫活性的研究

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渔业科学进展 2019年第1期40卷 141-146页

作者：姚嘉赟徐洋袁雪梅蔺凌云尹文林潘晓艺郝贵杰沈锦玉农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室浙江省淡水水产研究所湖州313001

合成四氢异喹啉衍生物并进行杀多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis)药效评价。以1-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉为起始原料,在2位的胺基上引入与环己甲酰氯、苯甲酰氯、噻吩甲酰氯、乙酰氯以及氯乙酰氯等不同的酰基进而合成5种四氢异... 详细信息

合成四氢异喹啉衍生物并进行杀多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis)药效评价。以1-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉为起始原料,在2位的胺基上引入与环己甲酰氯、苯甲酰氯、噻吩甲酰氯、乙酰氯以及氯乙酰氯等不同的酰基进而合成5种四氢异喹啉衍生物(化合物1~化合物5),研究其对小瓜虫掠食体和包囊的杀虫活性,并对杀虫活性物质进行安全性评价。结果显示,5种化合物均具有一定的杀虫活性,其中,化合物1 [(1-甲基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-苯基-甲酮]的杀虫活性最强,其对多子小瓜虫掠食体4 h的100%杀灭浓度为24.0 mg/L,对包囊6 h的100%杀灭浓度为60.0 mg/L,对掠食体的半数致死浓度(LD_(50))为16.4mg/L。急性毒性实验结果显示,化合物1对翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformi)的48 h LD_(50)为234.3 mg/L,其安全浓度为64.1 mg/L。研究表明,化合物1[(1-甲基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-苯基-甲酮]是一种具有较好开发前景的杀小瓜虫药物。

关键词：四氢异喹啉衍生物掠食体包囊多子小瓜虫

罗氏沼虾野田村病毒和双顺反子病毒双重RT-PCR检测方法与序列分析

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上海海洋大学学报 2012年第6期21卷 996-1002页

作者：潘晓艺刘杜鹃沈锦玉张宇飞蔺凌云王军毅郝贵杰姚嘉赟徐洋袁雪梅浙江省淡水水产研究所浙江湖州313001 温州医学院生命科学学院浙江温州325035

罗氏沼虾野田村病毒(Macrobrachium rosenbergii nodavirus,MrNV)和双顺反子病毒(*** dicistrovirus,MrDV)是已报道对罗氏沼虾易感的主要致病性病毒,该研究通过建立双重RT-PCR方法对MrDV和MrNV两种病毒同时进行检测。根据MrDV和MrNV基... 详细信息

罗氏沼虾野田村病毒(Macrobrachium rosenbergii nodavirus,MrNV)和双顺反子病毒(*** dicistrovirus,MrDV)是已报道对罗氏沼虾易感的主要致病性病毒,该研究通过建立双重RT-PCR方法对MrDV和MrNV两种病毒同时进行检测。根据MrDV和MrNV基因组序列的保守区分别设计特异性引物,并对双重PCR的退火温度和引物浓度进行优化,在获得优化反应体系和反应条件后,对罗氏沼虾样品进行检测。结果表明,双重PCR最佳退火温度为60℃,反应体系最佳引物终浓度MrNV384为0.1μmol/L,MrDV472为0.05μmol/L,对病样总RNA的最低检测限为360fg。引物的特异性检测表明,该检测方法对TSV、WSSV、IHHNV和嗜水气单胞菌TPS-30基因组无交叉反应。对阳性样品的病毒扩增序列分析表明,MrDV RNA依赖性RNA聚合酶编码区序列无变异,MrNV-RNA2序列存在较多变异,进化树结果表明2011年长三角的MrNV病毒主要来自于中国基因型和东南亚基因型。该方法的建立为罗氏沼虾病毒性疾病的预防和种苗的繁育奠定了基础。

关键词：罗氏沼虾双顺反子病毒野田村病毒双重RT-PCR

自然微生物挂膜处理水产养殖废水的效果及微生物群落分析

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水生生物学报 2017年第6期41卷 1327-1335页

作者：蔺凌云尹文林潘晓艺袁雪梅姚嘉赟徐洋王超沈锦玉浙江省淡水水产研究所湖州313001

以弹性填料和流化床填料为硝化反应的生物挂膜材料,聚羟基丁酸/戊酸共聚酯(PHBV)为反硝化反应的碳源和生物膜载体,通过微生物自然挂膜处理低C/N比水产养殖废水,去除水体中的氨氮、亚硝酸盐氮及总氮。应用Miseq高通量测序技术对生物膜的... 详细信息

以弹性填料和流化床填料为硝化反应的生物挂膜材料,聚羟基丁酸/戊酸共聚酯(PHBV)为反硝化反应的碳源和生物膜载体,通过微生物自然挂膜处理低C/N比水产养殖废水,去除水体中的氨氮、亚硝酸盐氮及总氮。应用Miseq高通量测序技术对生物膜的微生物群落组成和结构进行分析。结果表明:温度25—30℃,该处理系统首次挂膜成功需要4周,启动后运行稳定,对2种不同来源和氮污染程度的养殖废水均有较好的脱氮效果,氨氮、亚硝酸盐氮及总氮的去除率均在90%以上。硝化生物膜(a)的优势菌分别归属变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和厚壁菌门(Firmicutes)。反硝化生物膜(b)微生物群落的多样性指数和丰度指数均远大于前者,主要为变形菌门、厚壁菌门、拟杆菌门、螺旋体门(Spirochaetae)及绿菌门(Chlorobi)。其中,归属于变形菌门β-变形菌纲(Betaproteobacteria)的丛毛单胞菌科(Comamonadaceae)和红环菌科(Rhodocyclaceae)在2种生物膜中占比均较高。由于所处环境(载体,碳源、溶氧等)不同,在属分类水平上,2种生物膜的细菌群落结构表现出明显差异。生物膜a中属的种类仅为b的三分之二,相对丰度>0.5%的优势菌属,a为8个,b为18个。其中,隶属丛毛单胞菌科和红环菌科未知属的优势种群分别占到a、b总序列数的56.67%和45.51%。磁螺菌属(Magnetospirillum)和硝化螺菌属(Nitrospira)是a中特有的优势功能菌群,梭菌属(Clostridium)、动胶菌属(Zoogloea)、管道杆菌属(Cloacibacterium)、脱硫弧菌属(Desulfovibrio)等具有反硝化功能的菌群为b的优势菌属。

关键词：生物填料 PHBV 养殖废水生物膜微生物群落

一种源自马来西亚罗氏沼虾的双顺反子病毒基因组分析及分类

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一种源自马来西亚罗氏沼虾的双顺反子病毒基因组分析及分类

第十二届浙江渔业科技论坛

作者：潘晓艺蔺凌云徐洋袁雪梅姚嘉赟沈锦玉浙江省淡水水产研究所

本研究在源自马来西亚的罗氏沼虾中获得一种新的接近完整基因组序列的双顺反子病毒(strain MY13,KY607723),将其称为Macrobrachium rosenbergii dicistrovirus-2(MRDV-2),其基因组序列与我们之前在患罗氏沼虾幼体死亡综合征的幼体中发... 详细信息

本研究在源自马来西亚的罗氏沼虾中获得一种新的接近完整基因组序列的双顺反子病毒(strain MY13,KY607723),将其称为Macrobrachium rosenbergii dicistrovirus-2(MRDV-2),其基因组序列与我们之前在患罗氏沼虾幼体死亡综合征的幼体中发现的另一种双顺反子病毒(Macrobrachium rosenbergii Taihu virus)不同。该病毒基因组在肝胰脏组织中的具有较高含量,获得的MRDV-2 MY13基因组序列全长9669nt,带有poly(A)尾,并具有蟋蟀麻痹病毒属特征的核糖体进入位点。其非结构蛋白和衣壳蛋白的氨基酸序列与蟋蟀麻痹病毒属的按蚊C型病毒(Anopheles C virus)分别具有37%和40%的一致性。从以上结果可推断,该病毒为蟋蟀麻痹病毒属的一个新种,并对罗氏沼虾敏感。

关键词：罗氏沼虾双顺反子病毒基因组蟋蟀麻痹病毒属

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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两株草鱼呼肠孤病毒江西株的分离与鉴定

淡水渔业 2010年第3期40卷 44-49页

作者：徐洋郝贵杰沈锦玉郑善坚潘晓艺姚嘉赟尹文林浙江省淡水水产研究所浙江湖州313001 浙江海洋学院高职杭州分院杭州311258

对从江西省南昌县莲塘镇的患病草鱼鱼种池塘采集到草鱼出血病疑似病样材料分离出的两株病毒株进行了鉴定。结果显示:用除菌过滤后的患病鱼肝脏、脾脏、肾脏组织浆滤液腹腔注射感染8～10 cm健康草鱼鱼种,5 d后试验鱼发病,可复制出自然发... 详细信息

对从江西省南昌县莲塘镇的患病草鱼鱼种池塘采集到草鱼出血病疑似病样材料分离出的两株病毒株进行了鉴定。结果显示:用除菌过滤后的患病鱼肝脏、脾脏、肾脏组织浆滤液腹腔注射感染8～10 cm健康草鱼鱼种,5 d后试验鱼发病,可复制出自然发病症状,死亡率达50%以上,对照组未有死亡。用病样滤液接种草鱼肾细胞系(CIK),可产生细胞病变效应(CPE),病毒的TCID50分别为10-8.3/0.1 mL和10-8.0/0.1 mL。理化特性研究结果显示:氯仿、乙醚处理组病毒的感染力和对照组相比变化不显著。病毒基因组RT-PCR反应可扩增出目的片段,序列测定与分析结果表明,其与GenBank中GCRV(登录号为AF403392,AF239175)相应序列的同源性达99%以上。

关键词：草鱼(Ctenopharyngodon idellus) 呼肠孤病毒江西株分离鉴定

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大鲵病害的研究进展

农业灾害研究 2015年第7期5卷 24-27,63页

作者：尹文林左梦丽潘晓艺姚嘉赟沈锦玉浙江省淡水水产研究所鱼类健康与营养重点实验室浙江湖州313001

从介绍大鲵的主要病原出发,阐述了大鲵主要病害的发生原因,并对致病原因进行了总结和概括,同时提出了防治大鲵疾病的建议及研究的展望。

关键词：大鲵病原防治

异育银鲫(Carassius auratus gibelio)脊髓组织细胞系的建立及对CyHV-2的敏感性

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海洋与湖沼 2020年第5期51卷 1232-1238页

作者：魏钰娟潘晓艺蔺凌云姚嘉赟郝贵杰曹铮夏焱春尹文林刘忆瀚沈锦玉上海海洋大学水产与生命学院上海201200 农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室浙江省淡水水产研究所湖州313001

鲫造血器官坏死病是近些年来危害养殖鲫鱼最为严重的传染性疾病,其病原为鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2, CyHV-2)。本研究以异育银鲫(Carassius auratus gibelio)脊髓组织为材料,进行组织细胞体外培养,构建对鲤疱疹病毒Ⅱ型敏... 详细信息

鲫造血器官坏死病是近些年来危害养殖鲫鱼最为严重的传染性疾病,其病原为鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2, CyHV-2)。本研究以异育银鲫(Carassius auratus gibelio)脊髓组织为材料,进行组织细胞体外培养,构建对鲤疱疹病毒Ⅱ型敏感的异育银鲫脊髓细胞系(Spinalcordtissuecell lines of Carassius auratus gibelio, CSC)。采用组织块移植法,进行异育银鲫脊髓细胞的原代培养,并进行传代,已传代至第128代次,获得稳定传代的细胞系后,采用低渗法进行细胞染色体核型分析,并进行鲤疱疹病毒Ⅱ型的敏感性测试与传代。结果表明,以含10%胎牛血清的L-15培养基,在24℃恒温条件下,可稳定传代培养异育银鲫脊髓细胞,传代细胞呈成纤维样或纺锤状;核型分析显示,染色体数为156±2条,该细胞为三倍体细胞。通过对CyHV-2敏感性的测试,CSC细胞感染CyHV-2后产生典型的细胞病变,感染第7天的病变细胞液的TCID50达到109.33/mL,CyHV-2病毒可在CSC细胞上稳定传代;通过对病变细胞的电镜观察,可见大量直径为128-134nm大小的疱疹样病毒颗粒。以上研究结果表明,本研究构建的异育银鲫脊髓细胞系对CyHV-2敏感,并在细胞上能进行稳定传代,传代病毒具有较高病毒滴度,这为鲤疱疹病毒Ⅱ型的深入研究及疫苗开发奠定了重要的基础。

关键词：异育银鲫(Carassius auratus gibelio) 脊髓组织细胞系鲤疱疹病毒Ⅱ型