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RNA interference and its current application in mammals

Chinese Medical Journal 2004年第7期117卷 1084-1091页

作者：沈维干 Jiangsu Key Laboratory for Medical Biotechnology

Objective The aim of this review was to assess RNA interference (RNAi) and its possibility as a potential and powerful tool to develop highly specific double-stranded RNA ( dsRNA) or small interfering RNA (siRNA) based gene-silencing therapeutics. Data sources The data used in this review were obtained from the current RNAi-related research reports. Study selection dsRNA-mediated RNAi has recently emerged as a powerful reverse genetic tool to silence, gene expression in multiple organisms. The discovery that synthetic duplexes of 21 nucleotides siRNAs trigger gene-specific silencing in mammalian cells has further expanded the utility of RNAi in to the mammalian system. Data extraction The currently published papers reporting the discovery and mechanism of RNAi phenomena and application of RNAi on gene function in mammalian cells were included. Data synthesis Since the recent development of RNAi technology in the mammalian system, investigators have used RNAi to elucidate gene function, and to develop gene-based therapeutics by delivery exogenous siRNA or siRNA expressing vector. The general and sequence-specific inhibitory effects of RNAi that will be selective, long-term, and systemic to modulate gene targets mentioned in similar reports have caused much concern about its effectiveness in mammals and its eventual use as a therapeutic mordality. Conclusions It is certain that the ability of RNAi in mammals to silence specific genes, either when transfected directly as siRNAs or when generated from DNA vectors, will undoubtedly accelerate the study of gene function and might also be used as a potentially useful method to develop highly gene-specific therapeutic methods. It is also expected that RNAi might one day be used to treat human diseases.

关键词： RNA interference post-transcriptional gene silencing double-stranded RNA small interfering RNA mammalian gene knock down therapeutics

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香烟对生殖力影响的研究进展

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中华预防医学杂志 2000年第6期34卷 371-373页

作者：沈维干江苏省扬州大学医学院生物学教研室 225001

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金雀异黄素对雌性小鼠卵母细胞成熟及其受精能力的影响

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南京医科大学学报（自然科学版） 2008年第7期28卷 845-849页

作者：林松沈维干江苏省妇幼卫生保健中心江苏南京210036 扬州大学医学院细胞生物学教研室江苏扬州225001

目的:探讨金雀异黄素(Gen)对小鼠卵母细胞成熟的影响。方法:用不同浓度的Gen给小鼠腹腔注射后,检测Gen对卵母细胞生发泡破裂(GVBD)、第一极体(PB1)释放、体外受精和胚胎发育等的影响;用含不同浓度的Gen的培养液培养小鼠未成熟卵母细胞,... 详细信息

目的:探讨金雀异黄素(Gen)对小鼠卵母细胞成熟的影响。方法:用不同浓度的Gen给小鼠腹腔注射后,检测Gen对卵母细胞生发泡破裂(GVBD)、第一极体(PB1)释放、体外受精和胚胎发育等的影响;用含不同浓度的Gen的培养液培养小鼠未成熟卵母细胞,观察卵母细胞GVBD、PB1释放的发生率;结果:腹腔注射Gen可以增加小鼠子宫湿重,增加小鼠的超排卵数(除高剂量组外)、影响卵母细胞体内成熟过程中的GVBD和第一极体的释放(Gen-0.5组除外),高剂量组小鼠成熟卵母细胞的受精能力和胚胎发育能力均下降。Gen以剂量依赖的方式抑制体外培养小鼠未成熟卵母细胞的GVBD和PB1的释放。结论:Gen能够可逆性地抑制小鼠未成熟卵母细胞的成熟,高剂量的Gen可能影响卵母细胞减数分裂过程,降低卵母细胞的受精能力,提示育龄妇女摄入过量Gen及其化合物可能会导致生育能力降低,甚至造成不育或不孕。

关键词：金雀异黄素卵母细胞生发泡破裂第一极体体外受精

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成纤维细胞分泌TIMP-1抑制小鼠黑色素瘤细胞浸润和转移

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生物医学工程学杂志 2009年第3期26卷 610-614页

作者：沈维干朱军于智勇薛庆於扬州大学医学院扬州225001 扬州教育学院生物系扬州225000

构建含人金属蛋白酶-1组织抑制剂(TIMP-1)基因的重组腺病毒载体(Ad-TIMP-1)。通过Ad-TIMP-1感染原代培养的小鼠成纤维细胞,研究Ad-TIMP-1成纤维细胞对小鼠黑色素瘤细胞浸润和转移的影响。结果显示,Ad-TIMP-1原代成纤维细胞能有效表达并... 详细信息

构建含人金属蛋白酶-1组织抑制剂(TIMP-1)基因的重组腺病毒载体(Ad-TIMP-1)。通过Ad-TIMP-1感染原代培养的小鼠成纤维细胞,研究Ad-TIMP-1成纤维细胞对小鼠黑色素瘤细胞浸润和转移的影响。结果显示,Ad-TIMP-1原代成纤维细胞能有效表达并分泌TIMP-1;其分泌的TIMP-1可以在体内和体外显著抑制小鼠黑色素瘤B16BL6细胞的浸润和转移;皮下注射Ad-TIMP-1原代成纤维细胞制剂到小鼠体内,可以分泌TIMP-1进入小鼠血液中并维持较高水平。提示,腺病毒介导的分泌型TIMP-1原代成纤维细胞制剂可以为临床治疗肿瘤转移提供一种新的基因治疗手段,具有潜在临床应用价值。

关键词：金属蛋白酶-1组织抑制剂重组腺病毒成纤维细胞黑色素瘤转移

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杨梅素对肝癌SMMC-7721细胞迁移及侵袭影响的研究

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中国药理学通报 2017年第6期33卷 823-829页

作者：朱磊沈维干许正新扬州大学医学院江苏扬州225001

目的探讨杨梅素对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响。方法以不同浓度杨梅素处理的肝癌SMMC-7721细胞为研究对象,分别采用Wound healing实验、Transwell细胞迁移和侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭过程,用RT-q PCR和Western blot检测E-cad... 详细信息

目的探讨杨梅素对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响。方法以不同浓度杨梅素处理的肝癌SMMC-7721细胞为研究对象,分别采用Wound healing实验、Transwell细胞迁移和侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭过程,用RT-q PCR和Western blot检测E-cadherin和N-cadherin的表达。结果杨梅素呈浓度依赖性(10~40μ mol · L^(-1))抑制肝癌SMMC-7721细胞活力;杨梅素还可以抑制SMMC-7721细胞迁移和侵袭过程,并且随着杨梅素浓度的增加,细胞中丝状、片状伪足逐渐减少,细胞排列越来越紧密;RT-qPCR和Western blot结果均显示,杨梅素可以上调SMMC-7721细胞的E-cadherin表达,下调N-cadherin表达。结论杨梅素能抑制肝癌SMMC-7721细胞的迁移和侵袭过程,此作用的发生可能是通过上调E-cadherin、下调N-cadherin等EMT相关的信号通路以及肌动蛋白细胞骨架的重排实现的。

关键词：上皮间质样转化杨梅素 SMMC-7721细胞细胞迁移细胞侵袭细胞骨架

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长链非编码RNA的免疫调控作用及在类风湿关节炎的研究进展

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中华风湿病学杂志 2017年第11期21卷 783-787页

作者：沈芹沈维干张育扬州大学临床医学院风湿免疫科 225001 扬州大学医学院细胞生物学教研室

从1958年Circk提出中心法则，到后来反转录酶的发现，表明非编码序列的存在。这些可以产生稳定转录本的序列称之为非编码RNA（non-coding RNA，ncRNA），细胞中含量最多的ncRNA是tRNA和rRNA，还有snRNA，snoRNA，piRNA，microRNA和长链... 详细信息

从1958年Circk提出中心法则，到后来反转录酶的发现，表明非编码序列的存在。这些可以产生稳定转录本的序列称之为非编码RNA（non-coding RNA，ncRNA），细胞中含量最多的ncRNA是tRNA和rRNA，还有snRNA，snoRNA，piRNA，microRNA和长链非编码RNA（long non-codingRNA，lncRNA）等。lncRNA是转录本长度超过200nt的非编码RNA，是RNA聚合酶Ⅱ转录的副产物。其生物学功能类似于mRNA，但对于特殊的细胞类型，lncRNA能够实现更精密的调控。根据lncRNA与编码基因位置的关系，分为五大类：基因间、基因内、双向、正义及反义lncRNA。通过分析功能性lncRNA的序列，发现具有如下特征：内含子及起始密码子的缺乏、GC含量的低下以及阅读框的开放。此外，一些lncRNA还具有高级结构，对于发挥特异性功能至关重要。2010年，lncRNA引起研究人员的广泛关注，虽已证实lncRNA几乎在基因生命周期的各个阶段，对基因的表达起调控作用，但具体机制尚需探讨。作为生命科学的重要组成部分，医学领域也日益关注lncRNA在疾病进程中发挥的作用。不少证据显示lncRNA涉及免疫功能的调控，现将与toll样受体（toll-like receptor，TLR）、免疫细胞相关的lncRNA及lncRNA在RA的研究进展作以下综述。

关键词：非编码RNA 免疫调控作用类风湿关节炎长链 toll-like microRNA receptor RNA聚合酶Ⅱ

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黑色素瘤抗原MAGE-A9基因在真核细胞中的表达研究

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第6期24卷 626-627,630页

作者：于智勇薛庆於沈维干扬州教育学院生物系江苏扬州225009 扬州大学医学院江苏扬州225009

目的:克隆MAGE-A9基因并对其进行真核表达及鉴定。方法:通过逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)从原发性肝癌的细胞中扩增MAGE-A9基因片段,将该片段克隆在真核表达载体pEGFP-C3中,转染NIH3T3细胞,经G418筛选,构建稳定表达细胞系,并用荧光显... 详细信息

目的:克隆MAGE-A9基因并对其进行真核表达及鉴定。方法:通过逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)从原发性肝癌的细胞中扩增MAGE-A9基因片段,将该片段克隆在真核表达载体pEGFP-C3中,转染NIH3T3细胞,经G418筛选,构建稳定表达细胞系,并用荧光显微镜和Western blot对其进行鉴定。结果:经RT-PCR扩增出945bp基因片段,经测序分析并与GenBank的DNA序列比对分析后,在NIH3T3细胞中表达。G418筛选后,细胞荧光信号较强,Western blot检测,细胞中的融合蛋白能够与抗MAGE-A9的多抗结合。结论:成功地扩增了肝细胞肝癌中的MAGE-A9基因全长cDNA并进行真核表达与鉴定。

关键词： MAGE-A9 真核表达稳定细胞系

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金雀异黄素对胶原诱导性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞MAPK信号通路的影响

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中国中西医结合杂志 2011年第10期31卷 1405-1408页

作者：张学增张育沈维干高波许金鑫扬州大学医学院江苏225001

目的研究金雀异黄素(genistein,Gen)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)动物模型胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)MAPK信号传导通路的影响。方法建立CIA大鼠模型,将培养的CIA大鼠FLS采用随机法分组,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Gen(浓度分别为50、100、200μmol/L)对CIA大鼠FLS增殖的影响;采用免疫印迹(Western blot)法检测Gen(浓度分别为50、100、200μmol/L)对CIA大鼠FLS细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)和磷酸化的细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)表达的影响。结果 Gen能够抑制CIA大鼠FLS的增殖,Gen高剂量组细胞增殖度在72h仅为1.10±0.04,明显低于模型组2.12±0.03(P0.05)。结论 Gen能够抑制CIA大鼠FLS的增殖,其作用机制主要与下调MAPK信号传导通路的酪氨酸激酶,抑制ERK的磷酸化有关。

关键词：金雀异黄素胶原诱导性关节炎细胞外信号调节酶/磷酸化的细胞信号外节酶成纤维样滑膜细胞

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用极量稀释法从HeLa细胞中筛选多药耐药的亚克隆细胞株

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肿瘤 2005年第5期25卷 442-444页

作者：张育沈维干顾健江苏扬州大学医学院扬州市血液学研究所扬州225001

目的探讨肿瘤细胞亚克隆筛选在多药耐药研究中的应用。方法运用极量稀释法从亲代人宫颈癌HeLa细胞中筛选单个细胞的亚克隆细胞株,并采用Western Blot和MTT法检测亲代HeLa细胞株和亚克隆细胞多药耐药基因1(mdr-1)的基因产物P-糖蛋白(P-gp... 详细信息

目的探讨肿瘤细胞亚克隆筛选在多药耐药研究中的应用。方法运用极量稀释法从亲代人宫颈癌HeLa细胞中筛选单个细胞的亚克隆细胞株,并采用Western Blot和MTT法检测亲代HeLa细胞株和亚克隆细胞多药耐药基因1(mdr-1)的基因产物P-糖蛋白(P-gp)的表达及细胞的多药耐药性。结果共筛选了10个亚克隆细胞株,其中4个亚克隆细胞株有P-gp的表达,而有6个亚克隆株没有P-gp的表达。表达P-gp的克隆细胞株和亲代HeLa细胞株对柔红霉素、环磷酰胺及长春新碱具有多药耐药性,其IC50明显高于不表达P-gp的细胞株(P<0.05)。结论HeLa细胞株有原发性耐药倾向,而且P-gp表达上具有异质性,亚克隆细胞的筛选既可以用于原发性耐药的研究,也可以筛选出细胞生物学特性一致的敏感细胞株进行继发性耐药细胞模型的建立及相关的研究。

关键词： HeLa细胞抗药性,多药 P-糖蛋白

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氟化钠对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响

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中华预防医学杂志 2001年第3期35卷 171-173页

作者：沈维干王丽荀爱华朱银军陈兰江苏省扬州大学医学院生物学教研室 225001

目的　探讨氟化钠对小鼠生殖功能的影响。方法　采用小鼠卵母细胞体外培养、体外受精的方法研究了氟化钠对小鼠卵母细胞成熟和受精能力的影响。结果　 2 0 0mg/kg组氟化钠可以显著降低小鼠超排卵数 ,10 0mg/kg组和 2 0 0mg/kg组均可... 详细信息

目的　探讨氟化钠对小鼠生殖功能的影响。方法　采用小鼠卵母细胞体外培养、体外受精的方法研究了氟化钠对小鼠卵母细胞成熟和受精能力的影响。结果　 2 0 0mg/kg组氟化钠可以显著降低小鼠超排卵数 ,10 0mg/kg组和 2 0 0mg/kg组均可以显著抑制卵母细胞第一极体的释放 ,降低体外受精率 ,但对小鼠生发泡破裂没有影响 ,对卵母细胞的体外存活率也无显著影响 ;本实验结果还显示 ,2个染毒组均可以抑制体外受精 2 4h时的受精卵的卵裂 ,但是随着在正常培养液中培养时间的延长 ,这种抑制作用逐渐解除。结论　氟化钠可以破坏卵母细胞的成熟 ,降低卵母细胞的受精能力。

关键词：氟化钠小鼠卵母细胞体外受精

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