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腺苷酸激酶4慢病毒过表达质粒的构建及鉴定

中国生物制品学杂志 2016年第3期29卷 248-251页

作者：沈欢欢连帅计红杨焕民孔凡志黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

目的构建腺苷酸激酶4(adenylate kinase 4,AK4)慢病毒过表达质粒,并进行鉴定。方法从Hep G2细胞中扩增AK4基因,将其克隆至载体LV5,构建重组质粒LV5-AK4,经测序鉴定后,将鉴定正确的LV5-AK4和包装质粒p Gag/Pol、p Rev、p VSV-G共转染HEK2... 详细信息

目的构建腺苷酸激酶4(adenylate kinase 4,AK4)慢病毒过表达质粒,并进行鉴定。方法从Hep G2细胞中扩增AK4基因,将其克隆至载体LV5,构建重组质粒LV5-AK4,经测序鉴定后,将鉴定正确的LV5-AK4和包装质粒p Gag/Pol、p Rev、p VSV-G共转染HEK293T细胞,包装慢病毒;将慢病毒原液进行10倍系列稀释(10^(-1)~10^(-4)),感染HEK293T细胞,检测病毒滴度;慢病毒感染Hep G2细胞,Western blot法检测AK4蛋白的表达水平。结果重组质粒LV5-AK4经测序鉴定证明构建正确,并成功包装成慢病毒,病毒滴度为5×10~8 TU/ml。试验组Hep G2细胞中AK4蛋白的表达水平显著高于空白对照组及阴性对照组(P<0.01)。结论成功构建了携带AK4基因的重组慢病毒过表达质粒,为进一步研究低氧应激细胞中AK4的功能及其分子作用机制奠定了基础。

关键词：腺苷酸激酶4 慢病毒过表达

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大鼠急性冷应激模型的建立

中国兽医学报 2016年第5期36卷 819-822,832页

作者：彭梦玲刘艳芝何晶尹云厚马莉沈欢欢连帅杨焕民黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319 黑龙江省农垦哈尔滨管理局动物卫生监督所黑龙江哈尔滨150090 贵州民族大学贵州贵阳100081

通过分析冷刺激对大鼠血清中细胞因子、皮质酮(CORT)、促肾上腺皮质激素(ACTH)的含量以及外周血淋巴细胞中热休克蛋白70(Hsp70)表达量的影响,构建大鼠急性冷应激模型,旨在为其相关研究提供研究基础。本试验急性冷刺激时间为12h。利用EL... 详细信息

通过分析冷刺激对大鼠血清中细胞因子、皮质酮(CORT)、促肾上腺皮质激素(ACTH)的含量以及外周血淋巴细胞中热休克蛋白70(Hsp70)表达量的影响,构建大鼠急性冷应激模型,旨在为其相关研究提供研究基础。本试验急性冷刺激时间为12h。利用ELISA方法检测各组大鼠血清中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、CORT、ACTH的含量;采用Western blot和qRT-PCR方法检测各组大鼠外周血淋巴细胞中HSP70及mRNA表达量。结果表明,与对照组相比,急性冷刺激组大鼠血清中IL-2和ACTH的含量显著升高(P0.05);外周血淋巴细胞内HSP70及其mRNA表达量呈显著升高水平(P<0.05)。成功构建大鼠急性冷应激模型。

关键词：急性冷应激大鼠细胞因子 ACTH CORT HSP70

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促性腺激素调节的生物学机制研究进展

世界中西医结合杂志 2012年第6期7卷 546-549页

作者：李晶姚晶萍沈欢欢吴效科黑龙江中医药大学附属第一医院黑龙江哈尔滨150040

脉冲式激素的合成与分泌是生理过程关键,情景激素的释放异常与临床多种疾病相关[1]。促性腺激素释放激素（GnRH）脉冲的频率幅度促进垂体前叶黄体生成素（LH）和卵泡刺激素（FSH）[2]。Gn-RH脉冲的频率和幅度决定促性腺激素子单位基因... 详细信息

脉冲式激素的合成与分泌是生理过程关键,情景激素的释放异常与临床多种疾病相关[1]。促性腺激素释放激素（GnRH）脉冲的频率幅度促进垂体前叶黄体生成素（LH）和卵泡刺激素（FSH）[2]。Gn-RH脉冲的频率和幅度决定促性腺激素子单位基因的表达和LH和FSH的分泌,主要是由于促性腺激素细胞对GnRH输入模式的译解能力存在差异性[3]。最近研究发现,在促性腺激素细胞系（αT3-

关键词：促性腺激素释放激素卵泡刺激素促性腺激素黄体生成激素生殖

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激光驱动单颗粒与气体混合的实验研究

高压物理学报 2017年第2期31卷 187-192页

作者：张黎李牧张永强贺佳沈欢欢陶彦辉谭福利赵剑衡中国工程物理研究院流体物理研究所四川绵阳621999

利用激光驱动技术对微小颗粒进行加载,能够获得较高的颗粒速度,可能成为高速气相流场中气固两相流研究的有效实验手段。利用激光驱动微小金属颗粒模拟高速运动的物体,采用驱动靶优化设计、激光光束调节等方法控制颗粒加速过程,并利用高... 详细信息

利用激光驱动技术对微小颗粒进行加载,能够获得较高的颗粒速度,可能成为高速气相流场中气固两相流研究的有效实验手段。利用激光驱动微小金属颗粒模拟高速运动的物体,采用驱动靶优化设计、激光光束调节等方法控制颗粒加速过程,并利用高时空分辨率、高精度瞬态实验诊断技术获取高速颗粒的瞬态物理图像。研究表明,该方法能够有效地发射金属颗粒并获取清晰的高速颗粒物理图像,建立的实验、诊断手段可为进一步开展微喷混合、超燃发动机混合、颗粒高速碰撞以及工业粉尘爆炸等相关研究奠定基础。

关键词：激光驱动单颗粒发射技术气固两相流阴影成像

骗过中介，骗过承租人一房多租骗局终败露 A06

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上海法治报

作者：陈友敏沈欢欢

半个月不到的时间，同一套房子被陆续租给3个人，并且承租时间明显交叉，一房多租真的能实现吗？近期，经嘉定区人民检察院提起公诉，法院以合同诈骗罪判处被告人金某有期徒刑8个月，并处罚金8000元。起贪念，一房多租金某的外公早年间... 详细信息

半个月不到的时间，同一套房子被陆续租给3个人，并且承租时间明显交叉，一房多租真的能实现吗？近期，经嘉定区人民检察院提起公诉，法院以合同诈骗罪判处被告人金某有期徒刑8个月，并处罚金8000元。起贪念，一房多租金某的外公早年间购买了位于上海市嘉定区的一处房?

关键词：承租人

来源： cnki报纸评论

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鳖源胶原蛋白的提取工艺优化及结构表征

江苏农业科学 2013年第12期41卷 265-269页

作者：田永通沈欢欢宋伟毛玉婷周奕如彭茜李彩燕钱国英浙江万里学院生物与环境学院浙江宁波315100

为了研究新型鳖源胶原蛋白的提取方法及结构特征,以中华鳖的裙边为提取材料,比较酸法、碱法和酶法的提取效果,通过单因素正交试验设计优化酶种类、酶解温度、酶用量、底物浓度和提取时间等主要参数,并采用SDSPAGE电泳、HPLC、紫外扫描... 详细信息

为了研究新型鳖源胶原蛋白的提取方法及结构特征,以中华鳖的裙边为提取材料,比较酸法、碱法和酶法的提取效果,通过单因素正交试验设计优化酶种类、酶解温度、酶用量、底物浓度和提取时间等主要参数,并采用SDSPAGE电泳、HPLC、紫外扫描等方法分析胶原蛋白的生化特征。结果表明,酶法提取中华鳖裙边胶原蛋白的效果最好,提取用酶为胃蛋白酶,最佳提取工艺为温度40℃,酶用量1 mg/mL,底物浓度25%,提取时间20 h,该优化条件下胶原蛋白的提取率高达75.23%,得到的胶原蛋白为Ⅰ型胶原蛋白,其甘氨酸含量最高,且有特征吸收峰。

关键词：中华鳖裙边胶原蛋白提取优化结构表征