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外阴白斑组织中人乳头瘤病毒的快速检测与基因分型

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外阴白斑组织中人乳头瘤病毒的快速检测与基因分型

作者：沈柱第四军医大学

学位级别：硕士

目的：人乳头瘤病毒(Human papillomavims,HPV)是一类能够广泛感染人类皮肤、生殖道、呼吸道等上皮组织的无囊膜小DNA病毒，与多种良、恶性肿瘤的发生有关。为探讨HPV与外阴白斑发生的关系，应用通用引物聚合酶链式反应和反向点探针杂... 详细信息

目的：人乳头瘤病毒(Human papillomavims,HPV)是一类能够广泛感染人类皮肤、生殖道、呼吸道等上皮组织的无囊膜小DNA病毒，与多种良、恶性肿瘤的发生有关。为探讨HPV与外阴白斑发生的关系，应用通用引物聚合酶链式反应和反向点探针杂交方法对58例外阴白斑组织进行HPV6，11，16，18，31，33等型别的快速检测及基因分型。方法：将上述6种病毒型别的特异性寡核苷酸探针依次固定在尼龙膜上，再与经通用引物PCR扩增的已标记DNA靶序列杂交，即可在同一张膜上分辨出6型HPVDNA的任一型或几型。结果：在我们检测的58例外阴白斑患者中，总阳性检出率为37.9％(22/58)。其中，HPV6型7例(31.8％)，HPV11型5例(22.7％)，HPV6/11 第四军医大学硕士学位论文型（混合型）2例（9．l0），HPV16型 10例（45．5O），HPV18型 1例（4．5O）， HPV3型0例，HPV33型1例（4．5％）。外阴白斑增生型的阳性率为35．3 ％，萎缩型为 40．0％，混合型为 44．4％。外阴白斑组织中，低危 HPV型别（HPV6，11，6／11）占 45．50，高危型另u（HPV16，18，31，33）占 54．5％。经统计学分析，外阴白斑的发生与患者感染HPV有显著相关性T ＜0刀1）。结论：外阴白斑的发生可能与HPV的感染有关。

关键词：人乳头瘤病毒反向点探针杂交外阴白斑基因分型

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儿童斑秃与骨密度关系的初步探讨

临床皮肤科杂志 2006年第3期35卷 152-153页

作者：刘斌沈柱第四军医大学西京医院皮肤科陕西西安710032

目的:探讨儿童斑秃的发病与骨密度异常的关系。方法:对71例斑秃患儿[斑秃分为点状(1cm)秃发和普秃]及46例成人3种类型斑秃患者进行骨密度,血清锌、钙和铁测定比较及生活习惯调查。结果:儿童组斑秃患者中骨质疏松的阳性百分率明显高于成... 详细信息

目的:探讨儿童斑秃的发病与骨密度异常的关系。方法:对71例斑秃患儿[斑秃分为点状(1cm)秃发和普秃]及46例成人3种类型斑秃患者进行骨密度,血清锌、钙和铁测定比较及生活习惯调查。结果:儿童组斑秃患者中骨质疏松的阳性百分率明显高于成人斑秃组(P0.05);儿童组斑秃患者中血清锌和钙水平显著低于正常水平(P<0.05);骨密度下降斑秃患儿伴有“常吃零食”和“挑食”的不良生活习惯,并具有除斑秃以外的临床表现。结论:儿童斑秃,尤其是点状脱发和斑状脱发发病与骨密度异常的关系密切,此外血清锌、钙水平降低及不良生活习惯也与儿童斑秃发病有关。

关键词：斑秃微量元素骨质疏松锌钙儿童

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黑素瘤患者噬菌体抗体库的构建与筛选

细胞与分子免疫学杂志 2004年第5期20卷 588-591页

作者：杨军高天文王刚王雷沈柱李春英第四军医大学西京医院皮肤科陕西西安710032

目的 :构建噬菌体抗体库并筛选抗黑素瘤细胞的人抗体。方法 :从 1例长期存活的黑素瘤患者的外周血中分离单个核细胞 (PBMC) ,提取总RNA ,并逆转录为cDNA。用PCR扩增多样性κ链基因和重链Fd段基因 ,分别构建κ链库和重链库 ,组合为Fab段... 详细信息

目的 :构建噬菌体抗体库并筛选抗黑素瘤细胞的人抗体。方法 :从 1例长期存活的黑素瘤患者的外周血中分离单个核细胞 (PBMC) ,提取总RNA ,并逆转录为cDNA。用PCR扩增多样性κ链基因和重链Fd段基因 ,分别构建κ链库和重链库 ,组合为Fab段噬菌体抗体库 ,用两种黑素瘤细胞系对抗体库进行筛选和鉴定。结果 :所构建的噬菌体抗体库的库容量达 1.2× 10 8,用两种黑素瘤细胞系进行亲和吸附筛选 ,获得针对其中 1种黑素瘤细胞系的特异性抗体。结论 :采用噬菌体抗体库技术 ,成功地从 1例长期存活的黑素瘤患者体内克隆到特异性抗黑素瘤细胞的抗体。

关键词：黑素瘤细胞噬菌体抗体库患者长期存活重链筛选 PBMC 库容量总RNA PCR扩增

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瘙痒发生与治疗的研究进展

中华皮肤科杂志 2003年第7期36卷 415-417页

作者：沈柱刘玉峰第四军医大学西京医院皮肤科全军皮肤性病中心西安710032

瘙痒是大部分皮肤疾患的主要症状，也是影响患者生活质量的重要因素。一项慢性荨麻疹对患者生活质量影响的研究显示：该类患者生活受疾病影响的研究显示：该类患者生活受疾病影响的程度与患缺铁性心脏病患者相当。

关键词：瘙痒常规治疗心脏病患者生活质量主要症状皮肤疾患缺铁性重要因素人类显示

以T细胞介导为主的自身免疫性疾病的干预策略

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第B3期21卷 71-73页

作者：沈柱刘玉峰王刚第四军医大学西京医院皮肤科陕西西安710032

以T细胞介导为主的自身免疫性疾病包括寻常型银屑病、白塞病、自身免疫性甲状腺病、类风湿性关节炎、Ⅰ型糖尿病和多发性硬化症等.针对这类疾病发病机理, 人们不断调整治疗策略, 从传统的系统免疫抑制到近期的病理性T细胞生物靶向治疗,... 详细信息

以T细胞介导为主的自身免疫性疾病包括寻常型银屑病、白塞病、自身免疫性甲状腺病、类风湿性关节炎、Ⅰ型糖尿病和多发性硬化症等.针对这类疾病发病机理, 人们不断调整治疗策略, 从传统的系统免疫抑制到近期的病理性T细胞生物靶向治疗, 以期达到最高疗效、最小副作用的目的, 最大程度地降低对人体的损伤.

关键词： T细胞自身免疫性疾病表位 APL 凋亡

角蛋白17对银屑病患者T细胞增殖和分泌干扰素γ的影响

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中华皮肤科杂志 2004年第11期37卷 659-661页

作者：沈柱王刚李巍刘玉峰第四军医大学西京医院皮肤科西安710032

目的检测人角蛋白17对银屑病患者T细胞增殖和细胞因子分泌的影响。方法从银屑病皮损中提取总RNA,反转录成cDNA,通过PCR方法扩增人角蛋白17基因,利用GST融合表达载体pGEX-4T-1表达相应融合蛋白;梯度离心和绵羊红细胞花环沉淀法分离纯化T... 详细信息

目的检测人角蛋白17对银屑病患者T细胞增殖和细胞因子分泌的影响。方法从银屑病皮损中提取总RNA,反转录成cDNA,通过PCR方法扩增人角蛋白17基因,利用GST融合表达载体pGEX-4T-1表达相应融合蛋白;梯度离心和绵羊红细胞花环沉淀法分离纯化T细胞;直接活细胞计数和MTT法检测T细胞增殖程度,ELISA检测培养上清液中干扰素γ浓度。结果和正常人对照相比,角蛋白17可以显著促进银屑病患者T细胞的增殖,并且促进其分泌干扰素γ(P值均<0.001)。结论角蛋白17对银屑病患者T细胞功能的促进作用提示其可能是引发银屑病的重要自身抗原之一。

关键词：角蛋白17 银屑病患者干扰素γ T细胞增殖分泌 T细胞功能活细胞反转录融合表达载体

人角蛋白17的HLA-DR限制性T细胞表位区的确定

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第10期24卷 769-772页

作者：沈柱王刚樊建勇李巍刘玉峰第四军医大学西京医院皮肤科西安710032

目的　对银屑病自身抗原———角蛋白 17的HLA DR限制性T细胞表位区进行确定。方法　借助相关软件和互联网服务器进行角蛋白 17的辅助性T细胞抗原表位区预测 ;从银屑病患者皮损组织中扩增出人角蛋白 17全长基因 ;根据预测结果 ,融合表... 详细信息

目的　对银屑病自身抗原———角蛋白 17的HLA DR限制性T细胞表位区进行确定。方法　借助相关软件和互联网服务器进行角蛋白 17的辅助性T细胞抗原表位区预测 ;从银屑病患者皮损组织中扩增出人角蛋白 17全长基因 ;根据预测结果 ,融合表达、纯化相应的表位区 ;分离纯化外周血T淋巴细胞 ,将各表位区肽段分别与正常人和银屑病患者的T淋巴细胞体外作用 ,检测T细胞增殖程度和培养上清中IFN γ水平变化 ,从而筛选出特异性强反应性表位区。结果　角蛋白 17的 6 5～12 0肽段、30 5～ 374肽段能够显著促进银屑病患者T淋巴细胞增殖和IFN γ分泌 ,与正常对照组比较差异有非常显著性 (均为P <0 .0 0 1)。结论　人角蛋白 17的 6 5～ 12 0肽段和 30 5～ 374肽段是银屑病特异性强反应性HLA DR限制性T细胞表位区。本研究为以后研究银屑病的免疫发病机制和治疗打下了一定基础。

关键词：角蛋白17 银屑病 T细胞表位患者 HLA-DR HLA—DR 治疗融合表达分离纯化限制性

白介素-1β及NOD样受体蛋白3在痤疮炎性反应中的作用

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中南大学学报（医学版） 2019年第4期44卷 413-418页

作者：李晓娟林新瑜沈柱邓秋刘颖程石四川省医学科学院.四川省人民医院皮肤科成都610072

目的:探讨痤疮的发病机制,为痤疮的非抗生素治疗提供新思路。方法:分别使用感染复数(multiplicity ofinfection,MOI)为0,10,20,30的痤疮丙酸杆菌菌悬液刺激正常人表皮角质形成细胞(normalhumanepidermal keratinocyte,NHEK)12,24,36h后,使用ELISA,real-timePCR检测NHEK中IL-1β的蛋白及mRNA的表达。另设3组:空白对照组,未进行任何预处理的NHEK;阳性对照组,仅使用MOI为30的痤疮丙酸杆菌菌悬液刺激NHEK;siRNA组,使用特异性小干扰RNA(siRNA)预处理以后再使用MOI为30的痤疮丙酸杆菌菌悬液刺激NHEK,使用蛋白质印迹法检测3组中NOD样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor containing pyrin domain 3,NLRP3)炎性小体的表达情况,使用ELISA,real-time PCR检测3组NHEK中IL-1β蛋白及mRNA的表达。结果:不同浓度痤疮丙酸杆菌菌悬液刺激NHEK后,IL-1β表达量较空白对照组均有不同程度的升高,升高程度呈时间及剂量相关性(P<0.05)。siRNA预处理NHEK后,NLRP3炎性小体以及IL-1β的表达量明显降低,但仍高于空白对照组(P<0.05)。结论:痤疮丙酸杆菌刺激NHEK分泌IL-1β可能需要NLRP3炎性小体的参与;可通过抑制NLRP3炎性小体的活性来抑制由痤疮丙酸杆菌导致的炎性反应,从而减少抗生素的使用。

关键词：痤疮丙酸杆菌白介素-1β NOD样受体蛋白3

HPV16型E6蛋白诱导PHK多倍体的形成与消除细胞纺锤体检查点无关

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中国肿瘤临床 2009年第1期36卷 38-41页

作者：陈凌沈柱伍津津第三军医大学大坪医院野战外科研究所皮肤科重庆市400042 第三军医大学西南医院皮肤科

目的：人乳头瘤病毒16型（human papillomavirus，HPV 16）与包括宫颈癌在内的多种肿瘤的发生明确相关。诱导宿主基因组不稳定性可能是HPV16致瘤的重要机制之一。本研究对HPV16型E6蛋白诱导人原代角质形成细胞（primary human keratinoc... 详细信息

目的：人乳头瘤病毒16型（human papillomavirus，HPV 16）与包括宫颈癌在内的多种肿瘤的发生明确相关。诱导宿主基因组不稳定性可能是HPV16致瘤的重要机制之一。本研究对HPV16型E6蛋白诱导人原代角质形成细胞（primary human keratinocytes，PHK）形成多倍体以及对PHK有丝分裂纺锤体检查点的影响进行初步的探索。方法：取正常人包皮组织，分离表皮，常规方法培养PHK。脂质体介导法将pBabe-16E6质粒转染逆转录病毒包装细胞PA317。挑选G418抗性克隆，检测病毒滴度，将表达HPV16型E6蛋白的高滴度逆转录病毒感染PHK。通过逆转录PCR法和免疫印迹法证实HPV16E6成功感染PHK。PHK经Nocodazole处理后，利用流式细胞仪分析多倍体形成，于不同时间点收集细胞、固定，进行抗磷酸化组蛋白染色，利用流式细胞仪分析细胞有丝分裂指数差异。结果：HPV16型E6成功感染PHK，并呈功能性表达。HPV16型E6可诱导PHK形成多倍体，表达E6蛋白的PHK和对照细胞以相似的动力学进入和退出有丝分裂。结论：HPV16型E6对PHK有丝分裂过程中的纺锤体检查点无直接影响，鉴于有丝分裂后期检查点在细胞有丝分裂过程中较持久和严格的作用，本研究结果提示，对有丝分裂后期检查点的作用可能是HPV16型E6蛋白诱导宿主细胞多倍体形成的重要机制。为进一步探讨HPV相关肿瘤的分子发生机制奠定了一定基础。

关键词：人乳头瘤病毒 E6蛋白原代角质形成细胞细胞周期检查点多倍体