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PCDH-His-LprA-FLAG慢病毒载体在293T细胞中的过表达分析

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药物生物技术 2019年第6期26卷 481-484页

作者：沈凌筠李翔陆霓虹昆明市第三人民医院结核三科云南昆明650041 昆明市第三人民医院医学影像科云南昆明650041 昆明市第三人民医院内一科云南昆明650041

构建PCDH-His-LprA-FLAG慢病毒表达载体,同时分析其在293T细胞中的过表达。将结核分枝杆菌标准菌株H37Rv的DNA当成分析模板,对结核分枝杆菌脂蛋白A(LprA)基因实施扩展处理。通过连接慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro的T4酶,塑造pCDH-Lpr... 详细信息

构建PCDH-His-LprA-FLAG慢病毒表达载体,同时分析其在293T细胞中的过表达。将结核分枝杆菌标准菌株H37Rv的DNA当成分析模板,对结核分枝杆菌脂蛋白A(LprA)基因实施扩展处理。通过连接慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro的T4酶,塑造pCDH-LprA。采用PCR测序完成阳性克隆载体的检测;采用重组质粒以及协同质粒融合转染293T细胞包装病毒,获取慢病毒颗粒上清液,通过梯度稀释法完成病毒滴度的检测,采用Western blot对病毒在293T细胞基因的表达实施检测。成功塑造PCDH-His-LprA-FLAG慢病毒表达载体。病毒侵染的293T细胞内PVRL-2的表达量提升了100倍,PPARa的表达量提升4. 5倍。蛋白结构预测说明Necitn-2是包含信号肽的跨膜蛋白。PPARa表达量提升导致结核分枝杆菌相关基因的活化,提升机体免疫力,信号肽和跨膜结构说明LprA蛋白会同膜中蛋白受体融合,驱动下游脂代谢的信号通路。Mtb细菌的LprA脂蛋白能够控制巨噬细胞、促进细胞增长和吞噬能力。通常情况下,慢性病毒可以进行细胞侵染的种类较多,且慢病毒可以将表达载体整合到宿主细胞的基因组上,实现在宿主细胞上连续的目的基因表达。慢性病毒具有的这种特点被广泛应用于细胞体外实验中。因此将含有毒性的Mtb因子当成治疗结核病的疫苗,为结核病的治疗提供了可靠的分析依据,将LprA当成预防以及治疗结核病的药物靶点。

关键词： PCDH-His-LprA-FLAG 慢病毒表达载体构件 293T细胞过表达

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肺结核纵隔淋巴结钙化致支气管结石一例

中国防痨杂志 2024年第9期46卷 1115-1118页

作者：李翔付旭文杞敏许艳玲沈凌筠昆明市第三人民医院/云南省传染性疾病临床医学中心医学影像科昆明650041 昆明市第三人民医院/云南省传染性疾病临床医学中心结核三科昆明650041

支气管结石是支气管树内存在的钙化或骨化物质,因其内85%~90%的磷酸钙成分与10%~15%的碳酸钙成分与结石相近而得名。通常是由结核分枝杆菌或真菌感染等引起纵隔和肺门淋巴结钙化,临床非常罕见,目前尚不清楚钙化物进入支气管树的具体机制... 详细信息

支气管结石是支气管树内存在的钙化或骨化物质,因其内85%~90%的磷酸钙成分与10%~15%的碳酸钙成分与结石相近而得名。通常是由结核分枝杆菌或真菌感染等引起纵隔和肺门淋巴结钙化,临床非常罕见,目前尚不清楚钙化物进入支气管树的具体机制^([1])。由于其多表现为咳嗽、咯血,或无明显症状^([2]),常导致临床漏诊和误诊。现报道1例肺结核患者钙化的纵隔淋巴结侵蚀穿透右侧支气管壁,进入支气管内引起阻塞性肺炎的诊治过程及影像学表现,以提高临床对该类疾病可能出现的演进及转归的认识。

关键词：结核,肺结核,淋巴结钙化合物结石支气管瘘

87例耐多药肺结核并伪膜性肠炎患者的临床特征

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昆明医科大学学报 2020年第2期41卷 100-103页

作者：沈凌筠朱惠琼昆明市第三人民医院结核三科云南昆明650041

目的总结耐多药肺结核并发伪膜性肠炎(pseudomembranous colitis,PMC)患者的临床特征,为疾病的诊治提供参考依据。方法回顾分析昆明市第三人民医院2014年1月至2018年1月间收治的耐多药肺结核伴PMC患者87例临床资料,统计并对比分析相关... 详细信息

目的总结耐多药肺结核并发伪膜性肠炎(pseudomembranous colitis,PMC)患者的临床特征,为疾病的诊治提供参考依据。方法回顾分析昆明市第三人民医院2014年1月至2018年1月间收治的耐多药肺结核伴PMC患者87例临床资料,统计并对比分析相关临床资料。结果87例患者均使用2种及以上抗生素。全部患者均有腹痛、腹泻症状,发热46例(52.87%)。血白细胞及中性粒细胞升高78例(89.66%),粪便难辨梭状杆菌毒素A检测阳性26例(29.89%)。直肠、乙状结肠均受累72例(82.76%)。治疗后,死亡3例,死亡率3.45%,其余84例中19例显效,63例有效,无效2例,总有效率97.62%。初治耐药患者腹泻前抗生素使用时间明显长于复治耐药患者(P=0.002,且内镜下病变严重程度轻于复治耐药患者(P=0.045)。结论耐多药肺结核患者联合使用抗生素应规范合理,对并发PMC应早期及时发现、积极干预,严格控制病情进展。

关键词：耐多药肺结核伪膜性肠炎抗生素联合用药

基质金属蛋白酶类水平与抗结核药物性导致肝损伤的相关性分析

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中国防痨杂志 2022年第2期44卷 164-168页

作者：陆霓虹沈凌筠刘洪璐陈杨君杜映荣昆明市第三人民医院呼吸与危重症医学科昆明650041 昆明市第三人民医院结核科昆明650041 昆明市第三人民医院传染病临床研究中心昆明650041

目的:分析抗结核药物导致的肝损伤(anti-tuberculosis drug-induced liver injury,ATB-DILI)患者基质金属蛋白酶类(matrix metalloproteinases,MMP)水平及其相关性。方法:采用回顾性研究方法,收集2019年6月至2020年6月昆明市第三人民医院收治的肺结核患者中发生ATB-DILI的98例患者作为病例组;选取同期门诊健康体检者30名作为对照组。采集研究对象晨起空腹静脉血6 ml,采用双抗体夹心法检测其MMP-1、MMP-2、MMP-7、MMP-9、MMP-13、MMP-14浓度。病例组研究对象根据ATB-DILI临床分型分为肝细胞损伤型(A组)、胆汁淤积型(B组)、肝血管损伤型(C组)、混合型(D组);根据ATB-DILI严重程度分为0级(无肝损伤)、1级(轻度肝损伤)、2级(中度肝损伤)、3级(重度肝损伤)、4级(急性肝功能衰竭)、5级(致命)。比较不同临床分型组及对照组研究对象MMP水平;分析MMP水平与ATB-DILI严重程度分级相关性。结果:按照ATB-DILI临床分型,病例组中A组有51例,B组有12例,C组有15例,D组有20例;根据ATB-DILI严重程度分级,病例组中1级有33例,2级有27例,3级有22例,4级有14例,5级有2例。A、B、C、D组及对照组MMP-1浓度分别为:(89.1±11.2)ng/ml、(32.3±6.3)ng/ml、(47.5±9.1)ng/ml、(55.2±11.1)ng/ml、(27.5±8.2)ng/ml;MMP-2浓度分别为:(8.2±2.1)ng/ml、(6.2±2.3)ng/ml、(15.5±1.8)ng/ml、(7.2±1.6)ng/ml、(3.2±1.3)ng/ml;MMP-9浓度分别为:36.1(25.9,47.3)ng/ml、11.3(5.1,20.6)ng/ml、14.1(6.1,21.3)ng/ml、15.3(3.8,28.1)ng/ml、6.4(2.8,8.6)ng/ml;MMP-14浓度分别为:5.2(2.8,7.5)ng/ml、6.0(3.6,8.9)ng/ml、11.2(5.2,17.4)ng/ml、4.0(1.8,6.2)ng/ml、2.8(1.4,4.3)ng/ml。A组MMP-1和MMP-9浓度明显升高,C组MMP-2和MMP-14浓度明显升高,差异均有统计学意义(F=7.983,P=0.031;H=9.979,P=0.041;F=9.381,P=0.010;H=10.555,P=0.032)。ATB-DILI严重程度1、2、3、4、5级患者MMP-9浓度分别为:16.2(13.2,19.3)ng/ml、21.5(18.4,23.6)ng/ml、24.3(20.6,27.1)ng/ml、30.3(25.1,35.3)ng/ml、38.5(33.9,43.1)ng/ml,与严重程度分级呈正相关(r=0.882,P=0.000)。结论:不同临床分型ATB-DILI患者MMP-1、MMP-2、MMP-9、MMP-14浓度有不同程度升高;MMP-9浓度与ATB-DILI严重程度呈正相关;MMP水平可能为ATB-DILI发生的影响因素。

关键词：基质金属蛋白酶类药物性肝损伤抗结核药回归分析

早期分泌抗原靶6及免疫和炎症指标对抗结核药物性肝损伤的诊断价值

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中国防痨杂志 2022年第7期44卷 654-659页

作者：陆霓虹沈凌筠刘洪璐陈杨君杨艳杜映荣昆明市第三人民医院/云南省传染性疾病临床医学中心昆明650041

目的:分析相关免疫及炎症指标对抗结核药物性肝损伤的诊断价值。方法:选择2019年1月至2021年1月昆明市第三人民医院收治的符合入组标准的肺结核患者325例[包括发生抗结核药物性肝损伤的患者115例(A组)和未发生肝损伤的患者210例(B组)]... 详细信息

目的:分析相关免疫及炎症指标对抗结核药物性肝损伤的诊断价值。方法:选择2019年1月至2021年1月昆明市第三人民医院收治的符合入组标准的肺结核患者325例[包括发生抗结核药物性肝损伤的患者115例(A组)和未发生肝损伤的患者210例(B组)]和同期的门诊健康体检者98名(C组)作为研究对象。采用多因素logistic回归模型分析3组研究对象中免疫细胞、炎症指标、血清早期分泌抗原靶6(ESAT-6)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)和MMP-14与发生抗结核药物性肝损伤的相关性。结果:A组患者年龄中位数(四分位数)[51.2(18.9,77.2)岁]高于B组[39.1(19.7,63.3)岁]和C组[36.3(20.1,61.3)岁],差异均有统计学意义(H=27.695、29.982,P值均=0.000);A组患者CD4^(+)T淋巴细胞计数[295.0(155.0,449.0)个/μl]低于B组[571.0(397.0,642.0)个/μl]和C组[775.0(710.0,993.0)个/μl],差异均有统计学意义(H=27.225、40.117,P值均=0.000);A组血浆降钙素原(PCT)[4.3(0.9,11.5)ng/ml]、D-二聚体[4.5(0.7,8.4)μg/ml]、ESAT-6[59.3(27.1,66.5)pg/ml]、MMP-9[29.1(18.6,39.6)ng/ml]表达水平均高于B组[分别为2.8(0.5,8.6)ng/ml、2.3(0.5,5.1)μg/ml、32.5(25.8,59.2)pg/ml、17.2(12.7,21.3)ng/ml],差异均有统计学意义(H=28.991、29.879、32.045、31.122,P值均=0.000);A组和B组MMP-14表达量[分别为54.7(41.4,66.7)ng/ml和60.2(45.2,65.1)ng/ml]均高于C组[5.5(2.8,6.3)ng/ml],差异均有统计学意义(H=49.209、53.436,P值均=0.000)。多因素logistic回归分析显示,高龄(>65岁)、ESAT-6升高(>30.5 pg/ml)是抗结核药物性肝损伤发生的独立危险因素[OR(95%CI)=11.289(4.355~24.361),P=0.000;OR(95%CI)=9.479(3.340~21.653),P=0.000]。结论:针对高龄和ESAT-6高表达肺结核患者及早使用保肝药物,可能会降低抗结核药物性肝损伤发生的风险。对CD4+T淋巴细胞计数较低,降钙素原、D-二聚体和MMP-9高表达的肺结核患者也应提高警惕。

关键词：抗结核药药物性肝损伤免疫因子类回归分析

肝爽颗粒对抗初治肺结核引起药物性肝损伤的影响

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中成药 2023年第9期45卷 3158-3161页

作者：刘立赵雁红薛淋淋常丽仙李秉翰刘春云沈凌筠高建鹏昆明市第三人民医院云南省传染性疾病临床医学中心云南昆明650041 大理大学公共卫生学院云南大理650000

目的考察肝爽颗粒对抗初治肺结核引起药物性肝损伤的影响。方法回顾性收集180例患者,对照组(83例)给予2HRZE/4HR,观察组(97例)在对照组基础上加用肝爽颗粒。采用Kaplan-Meier法比较2组药物性肝损伤累积发生率,COX比例风险分析考察其发... 详细信息

目的考察肝爽颗粒对抗初治肺结核引起药物性肝损伤的影响。方法回顾性收集180例患者,对照组(83例)给予2HRZE/4HR,观察组(97例)在对照组基础上加用肝爽颗粒。采用Kaplan-Meier法比较2组药物性肝损伤累积发生率,COX比例风险分析考察其发生风险及影响因素,并检测不良反应发生率。结果观察组药物性肝损伤累积发生率低于对照组(P=0.001),相对危险度为3.873(95%CI:1.732,8.661)。调整年龄、性别、白蛋白、肝肾功能等项目后,HBsAg阳性、肺外结核、肝爽颗粒治疗是独立影响因素(P0.05)。结论肝爽颗粒可安全有效地降低初治肺结核患者药物性肝损伤发生率,保障疗程完成,提高治愈率。

关键词：肝爽颗粒 2HRZE/4HR 药物性肝损伤初治肺结核回顾性分析 Kaplan-Meier法 COX比例风险分析

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67例肺结核死亡原因临床分析

中外医学研究 2015年第7期13卷 124-125页

作者：黄红丽施承宏沈凌筠昆明市第三人民医院云南昆明650041

目的：对肺结核死亡原因进行分析,采取及时、有效的诊断治疗措施。方法：通过死亡患者资料的查阅,对肺结核诊治情况、直接死因、并发症等进行综合分析。结果：67例死亡患者中,男性占74.6%,60岁以上老年患者占43.28%,退休人员及农民占47.... 详细信息

目的：对肺结核死亡原因进行分析,采取及时、有效的诊断治疗措施。方法：通过死亡患者资料的查阅,对肺结核诊治情况、直接死因、并发症等进行综合分析。结果：67例死亡患者中,男性占74.6%,60岁以上老年患者占43.28%,退休人员及农民占47.76%,初治者占64.2%,痰检阳性占44.8%,病变波及双肺占88.1%,初次发病至死亡时间在1个月-1年占64.18%,初次服药至死亡时间在1个月-1年占40.30%;直接死亡原因以多脏器功能衰竭、重症肺炎、呼吸衰竭、咯血较多见;两种以上合并症者占95.52%。结论：肺结核死亡患者大部分年老、体质差、并发症多,易至死亡;切实加强肺结核患者的规范诊治,积极控制合并症,是减少肺结核死亡的根本措施。

关键词：肺结核死亡临床分析

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肺结核合并高血压抗痨药物副作用分析

影像研究与医学应用 2017年第13期1卷 187-188页

作者：沈凌筠刘才万荣朱惠琼昆明市第三人民医院云南昆明650041

目的:研究肺结核病合并高血压病抗结核药物的不良反应。方法:选择我院2014年1月—2017年1月在我科住院的肺结核初治合并高血压患者73例患者作为研究对象,即观察组,另选取在我科住院的肺结核初治且无高血压80例患者作为对照组。收集所有... 详细信息

目的:研究肺结核病合并高血压病抗结核药物的不良反应。方法:选择我院2014年1月—2017年1月在我科住院的肺结核初治合并高血压患者73例患者作为研究对象,即观察组,另选取在我科住院的肺结核初治且无高血压80例患者作为对照组。收集所有患者的临床资料,比较分析患者服用抗结核药物的不良反应以及血压变化情况。结果:观察组不良反应发生率与对照组对比,差异无统计学意义(P>0.05);观察组血压水平治疗前后收缩压、舒张压均有升高,差异有统计学意义(P0.01差异无统计学意义;不良反应中胃肠道反应为首位,但随着用药时间延长,反应有逐渐减少。结论:肺结核抗痨中,均应密切关注不良反应发生,最终实现减低患者用药治疗过程中不良反应发生率;对于合并高血压患者注意监测血压,及时调整药物用量及种类,让患者顺利完成化疗。

关键词：肺结核高血压抗结核药物耐受性

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56例附睾结核CT影像表现分析

中国防痨杂志 2022年第10期44卷 1100-1103页

作者：李翔马仲序付旭文杞敏许艳玲沈凌筠昆明市第三人民医院/云南省传染性疾病临床医学中心医学影像科昆明650041 昆明市第三人民医院/云南省传染性疾病临床医学中心综合内科昆明650041 昆明市第三人民医院/云南省传染性疾病临床医学中心结核三科昆明650041

为了解附睾结核的CT影像学特征,笔者收集了2020年9月1日至2021年10月31日昆明市第三人民医院收治的经病理组织学、细菌学或实验性抗结核治疗有效的56例附睾结核患者资料进行分析。结果发现,56例附睾结核患者的中位年龄为42岁,有阴囊肿... 详细信息

为了解附睾结核的CT影像学特征,笔者收集了2020年9月1日至2021年10月31日昆明市第三人民医院收治的经病理组织学、细菌学或实验性抗结核治疗有效的56例附睾结核患者资料进行分析。结果发现,56例附睾结核患者的中位年龄为42岁,有阴囊肿痛症状者37例(66.1%),其中合并阴囊皮肤窦道形成者9例(16.1%);合并肺结核、肾结核、鞘膜积液、睾丸受累者分别为29例(51.8%)、26例(46.4%)、24例(42.9%)、15例(26.8%)。CT表现为附睾增粗56例(100.0%)、病灶多发34例(60.7%)、单侧附睾受累32例(57.1%)、附睾钙化8例(14.3%);CT增强扫描门静脉期附睾病变仅结节状强化、仅环状强化及同时有二者表现分别为23例(41.1%)、19例(33.9%)、14例(25.0%)。认为附睾结核患者多有阴囊肿痛,可合并肺结核及肾结核,CT扫描多为单侧附睾受累、病灶多发,增强扫描呈结节状或环状强化,具有一定CT影像学特征。

关键词：结核,男性生殖器放射影像解释,计算机辅助诊断显像