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溶酶体相关4次跨膜蛋白质β基因在前列腺癌组织的表达及临床意义

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中华实验外科杂志 2015年第12期32卷 2964-2966页

作者：郭佳刘修恒王敏汪志顺武汉大学人民医院泌尿外科 430060

目的探讨溶酶体相关4次跨膜蛋白质B（LAPTM4B）基因在良恶性前列腺组织中的表达差异及异常表达的LAPTM4B与前列腺癌的关系。方法采用已知微阵列（Microarray）数据分析LAPTM4B在良恶性前列腺组织中的表达差异。利用免疫组织化学技术对10... 详细信息

目的探讨溶酶体相关4次跨膜蛋白质B（LAPTM4B）基因在良恶性前列腺组织中的表达差异及异常表达的LAPTM4B与前列腺癌的关系。方法采用已知微阵列（Microarray）数据分析LAPTM4B在良恶性前列腺组织中的表达差异。利用免疫组织化学技术对100例前列腺癌和80例良性前列腺标本中LAPTM4B的蛋白表达水平进行分析。结果LAPTM4B的DNA水平在良恶性前列腺组织中差异有统计学意义（P〈0．01）；转移性前列腺中LAPTM4B的DNA水平明显高于原发前列腺癌（P〈0．01）。LAPTM4B的mRNA水平在高Gleason评分患者中明显增高（P〈0．05）。LAPTM4B的蛋白表达在良恶性前列腺组织中差异有统计学意义（P〈0．01）。在不同水平前列腺特异抗原（PSA）前列腺癌患者中LAPTM4B蛋白表达差异有统计学意义（P〈0．01）；在不同Gleason评分的前列腺癌患者间LAPTM4B蛋白表达差异有统计学意义（P〈0．01）；LAPTM4B蛋白表达在PSA生化复发的前列腺癌患者中明显增高（P〈0．05）。结论在前列腺癌组织中LAPTM4B基因的表达异常，上调的LAPTM4B与前列腺癌具有相关性，可能为潜在的前列腺癌标志物。

关键词：溶酶体相关4次跨膜蛋白质β 前列腺癌免疫组织化学

溶酶体相关4次跨膜蛋白质β基因对前列腺癌细胞增殖和转移的影响

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武汉大学学报（医学版） 2018年第3期39卷 389-393页

作者：郭佳刘修恒王潇王敏汪志顺武汉大学人民医院泌尿外科

目的:研究溶酶体相关4次跨膜蛋白质β(LAPTM4B)基因在前列腺癌细胞中的表达水平和生物功能。方法:采用实时荧光定量PCR技术比较LAPTM4B在前列腺癌细胞中的表达差异。合成shRNA LAPTM4B质粒,用lipofectamine 2000介导转染前列腺癌细胞。... 详细信息

目的:研究溶酶体相关4次跨膜蛋白质β(LAPTM4B)基因在前列腺癌细胞中的表达水平和生物功能。方法:采用实时荧光定量PCR技术比较LAPTM4B在前列腺癌细胞中的表达差异。合成shRNA LAPTM4B质粒,用lipofectamine 2000介导转染前列腺癌细胞。RNA干扰技术下调LAPTM4B表达后,通过软琼脂细胞克隆形成实验、前列腺癌细胞侵袭和迁移实验研究前列腺癌细胞生物功能的改变。结果:LNCaP、DU145和PC-3细胞中LAPTM4BmRNA水平较RWPE-1明显增高,且差异具有统计学意义(P=0.001 2)。成功建立稳定转染shRNA LAPTM4B质粒和空白对照质粒的前列腺癌细胞株。LNCaP和PC-3细胞中LAPTM4BshRNA转染组细胞的体外克隆形成能力明显低于未转染组和空载体转染组,差异有统计学意义(P<0.000 1)。LAPTM4BshRNA转染组PC-3和LNCaP细胞到达对侧的迁移细胞数明显低于未转染组和空载体转染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:LAPTM4B在前列腺癌细胞中表达上调,下调LAPTM4B在前列腺癌细胞中表达可以抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。

关键词： LAPTM4B 前列腺癌转染

芹黄素联合缺血后处理对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响及机制探讨

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山东医药 2017年第14期57卷 37-41页

作者：刘洋刘修恒王磊陈志远郭佳翁小东杜洋汪志顺王敏武汉大学人民医院

目的探讨芹黄素联合缺血后处理(IPO)对大鼠肾缺血再灌注(I/R)损伤的影响及其机制。方法选择SD大鼠50只,分为假手术组(Sham组)、I/R组、I/R+芹黄素组、IPO组、芹黄素+IPO组各10只。I/R组、I/R+芹黄素组、IPO组、芹黄素+IPO组均制备肾I/R... 详细信息

目的探讨芹黄素联合缺血后处理(IPO)对大鼠肾缺血再灌注(I/R)损伤的影响及其机制。方法选择SD大鼠50只,分为假手术组(Sham组)、I/R组、I/R+芹黄素组、IPO组、芹黄素+IPO组各10只。I/R组、I/R+芹黄素组、IPO组、芹黄素+IPO组均制备肾I/R模型。其中,I/R+芹黄素组在制备I/R模型前经腹腔注射芹黄素10 mg/kg预处理;IPO组在阻断左肾动脉血流45 min后,给予反复3次的恢复血流10 s、阻断血流10 s的IPO处理,再完全恢复肾脏血流供应;芹黄素+IPO组在制备I/R模型前先予腹腔注射芹黄素10 mg/kg预处理,再给予IPO处理。Sham组仅分离肾包膜及肾动静脉而不阻断血流。各组干预24 h后,均经心脏取血测定血清BUN及Cr水平;取各组大鼠左肾组织,观察肾组织病理学变化;采用Real time PCR法检测肾组织高迁移率族蛋白1(HMGB1)、NF-κB、TNF-α和细胞间黏附分子1(ICAM-1)mRNA表达;采用Western blot法检测肾组织HMGB1蛋白表达。结果 I/R+芹黄素组、IPO组、芹黄素+IPO组血清BUN及Cr水平均低于I/R组(P均<0.05);芹黄素+IPO组血清BUN及Cr水平均低于I/R+芹黄素组及IPO组(P均<0.05)。病理检查示,Sham组未见明显的形态学改变;I/R组肾小管上皮细胞肿胀,部分细胞明显变性坏死;芹黄素+IPO组、I/R+芹黄素组和IPO组肾小管损伤程度明显减轻。I/R+芹黄素组、IPO组、芹黄素+IPO组HMGB1、NF-κB、TNF-α和ICAM-1 mRNA及蛋白表达均低于I/R组(P均<0.05);芹黄素+IPO组HMGB1、NF-κB、TNF-α和ICAM-1 mRNA及蛋白表达均低于I/R+芹黄素组及IPO组(P均<0.05)。结论芹黄素预处理联合IPO能够明显减轻肾脏I/R损伤,且其效果优于单一采用芹黄素预处理或IPO,其机制可能与抑制肾组织炎症反应有关。

关键词：缺血再灌注芹黄素缺血后处理炎症肾脏

CD_(300)分子对人树突状细胞功能的调节作用研究进展

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医学综述 2016年第3期22卷 420-423页

作者：汪志顺刘修恒武汉大学人民医院泌尿外科

树突状细胞(DC)是白细胞的异源群体细胞,它在启动和调节免疫反应中发挥着重要作用。人类CD_(300)分子家族调节着白细胞的分化、活性、细胞因子、趋化因子以及白细胞的吞噬作用和趋化性。DC表达CD_(300)家族的所有成员,且CD_(300)分子能... 详细信息

树突状细胞(DC)是白细胞的异源群体细胞,它在启动和调节免疫反应中发挥着重要作用。人类CD_(300)分子家族调节着白细胞的分化、活性、细胞因子、趋化因子以及白细胞的吞噬作用和趋化性。DC表达CD_(300)家族的所有成员,且CD_(300)分子能在体内外调节DC的功能,还能通过自分泌的方式来调节CD_(300)分子的表达。因而阐明CD_(300)分子家族的生理机制,将有利于利用CD_(300)分子这个有效靶点,在很多炎症性疾病或肿瘤中发挥治疗作用。

关键词： CD300 树突状细胞免疫调节

抗原加工相关转运体1在前列腺癌组织中的表达差异

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中华实验外科杂志 2015年第12期32卷 2961-2963页

作者：邱涛刘修恒周江桥祝恒成陈志远汪志顺武汉大学人民医院器官移植科 430060 武汉大学人民医院泌尿外科 430060

目的观察不同临床分期前列腺癌的抗原提呈路径的表达差异，探讨抗原加工相关转运体1（TAPl）与肿瘤发生及恶性程度相关性。方法收集前列腺癌、正常前列腺组织以及前列腺增生症（BPH）标本，进行Westernblot和免疫组织化学染色，并根据... 详细信息

目的观察不同临床分期前列腺癌的抗原提呈路径的表达差异，探讨抗原加工相关转运体1（TAPl）与肿瘤发生及恶性程度相关性。方法收集前列腺癌、正常前列腺组织以及前列腺增生症（BPH）标本，进行Westernblot和免疫组织化学染色，并根据蛋白条带的灰度值和免疫组织化学结果进行定量评分。结果Westernblot显示前列腺癌标本中TAP1表达灰度为0．210±0．093，比较正常前列腺组（0．310±0．021）和BPH组（0．250±0．067），差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫组织化学显示前列腺癌中TAP1阳性染色评分为（1．200±0．316）分，比较正常前列腺组的（2．600±0．244）分和BPH组的（2．000±0．235）分，差异有统计学意义（P〈0．05），且TAP1表达与前列腺痛的分期和Gleason评分相关。结论检测TAPl的表达有助于判断前列腺癌的预后。

关键词：前列腺癌抗原加工相关转运体1

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TAP1基因慢病毒载体的构建

武汉大学学报（医学版） 2016年第2期37卷 273-276页

作者：邱涛刘修恒周江桥张龙陈忠宝陈志远汪志顺武汉大学人民医院器官移植科湖北武汉430060 武汉大学人民医院泌尿外科湖北武汉430060

目的:构建TAP1基因慢病毒过表达载体及检测其过表达效率,为制备前列腺癌的免疫细胞疫苗提供基础。方法:将pDONR223-TAP1质粒和pLenti6.3-IRES-EGFP构建形成pLenti6.3-TAP1-IRES-EGFP表达质粒,采用慢病毒包装试剂盒包装产生慢病毒;感染2... 详细信息

目的:构建TAP1基因慢病毒过表达载体及检测其过表达效率,为制备前列腺癌的免疫细胞疫苗提供基础。方法:将pDONR223-TAP1质粒和pLenti6.3-IRES-EGFP构建形成pLenti6.3-TAP1-IRES-EGFP表达质粒,采用慢病毒包装试剂盒包装产生慢病毒;感染293T细胞后RT-PCR检测目的基因TAP1的表达;采用荧光FACS计算病毒活性滴度。RT-PCR检测转染PC-3细胞后TAP1表达。结果:PCR和测序证实pLenti6.3-TAP1-IRES-EGFP慢病毒质粒构建成功;包装纯化后收集的病毒液滴度经流式细胞仪检测滴度为2.87×107 TU/ml;转染后的PC-3后,TAP1转染组TAP1的表达量显著高于对照组。结论:成功构建人TAP1基因慢病毒过表达载体,可以上调PC-3细胞TAP1的表达。

关键词：前列腺癌 TAP1 慢病毒载体

微粒体环氧化物水解酶(EPHX1)基因多态性与泌尿系恶性肿瘤易感性的Meta分析

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实用癌症杂志 2015年第11期30卷 1621-1624页

作者：何立陈志远王敏蒋冠军汪志顺刘修恒武汉大学人民医院 430060

目的探讨微粒体环氧化物水解酶（EPHX1）编码基因多态性与泌尿系恶性肿瘤的遗传易感性的关系。方法按照制定的检索策略,检索相关数据库中的文献,获取有关EPHX1基因多态性与泌尿系恶性肿瘤易感性的病例-对照研究,提取相关数据进行Meta分... 详细信息

目的探讨微粒体环氧化物水解酶（EPHX1）编码基因多态性与泌尿系恶性肿瘤的遗传易感性的关系。方法按照制定的检索策略,检索相关数据库中的文献,获取有关EPHX1基因多态性与泌尿系恶性肿瘤易感性的病例-对照研究,提取相关数据进行Meta分析。以病例组和对照组基因型分布的比值比（OR）及其95%可信区间（CI）作为效应指标。结果共纳入EPHX1 Y113H多态位点的6篇文献,累计病例806例,对照1 156例。纳入的结果使用Meta分析显示EPHX1 Y113H基因多态性与泌尿系恶性肿瘤易感性无相关性[（CC vs TT：OR=1.33,95%CI：0.87~2.05,P〉0.05）;（CT vs TT：OR=1.11,95%CI：0.93~1.33,P〉0.05）;（CC/CT vs TT：OR=1.11,95%CI：0.95~1.30,P〉0.05）;（CC vs CT/TT：OR=1.24,95%CI：0.86~1.78,P〉0.05）]。EPHX1 H139R多态位点共4篇文献,累计病例491例,对照760例。Meta分析显示EPHX1 H139R基因多态性与泌尿系恶性肿瘤易感性无相关性[（GG vs AA：OR=0.74,95%CI：0.40~1.08,P〉0.05）;（AG vs AA：OR=1.04,95%CI：0.83~1.32,P〉0.05）;（GG/AG vs AA：OR=1.00,95%CI：0.79~1.27,P〉0.05）;（GG vs AG/AA：OR=0.72,95%CI：0.41~1.27,P〉0.05）]。结论 EPHX1 Y113H或H139R基因多态性与泌尿系恶性肿瘤易感性无明显相关性。

关键词：微粒体环氧化物水解酶 EPHX1 泌尿系恶性肿瘤基因多态性肿瘤易感性

热休克蛋白70在前列腺癌中作用机制的研究进展

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国际泌尿系统杂志 2017年第3期37卷 435-438页

作者：刘洋王磊陈志远翁小东汪志顺杜涛刘修恒武汉大学人民医院泌尿外科湖北武汉430060

热休克蛋白（heat shock protein,HSP）是存在于动物体内的一类高度保守应激蛋白.HSP70是热休克蛋白家族中含量最丰富的一种,它可以影响蛋白质的折叠和稳定,并且积极参与蛋白质运输和转录调控过程.在肿瘤细胞中,HSP70常表现为高表达.HS... 详细信息

热休克蛋白（heat shock protein,HSP）是存在于动物体内的一类高度保守应激蛋白.HSP70是热休克蛋白家族中含量最丰富的一种,它可以影响蛋白质的折叠和稳定,并且积极参与蛋白质运输和转录调控过程.在肿瘤细胞中,HSP70常表现为高表达.HSP70的细胞保护作用,是肿瘤细胞赖以生存的基础.通过抑制HSP70基因的表达,前列腺癌细胞的生长发育会受到明显的遏制.目前,HSP70可以作为临床上治疗前列腺癌的一个新的靶点.本文探讨HSPs及HSP70的结构和生物学作用,并总结HSP70在前列腺癌发展中所扮演的角色和主要作用机制.

关键词：前列腺肿瘤 HSC70热休克蛋白质类

胡黄连苷Ⅱ对大鼠肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

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武汉大学学报（医学版） 2017年第3期38卷 381-386页

作者：刘洋刘修恒王磊陈志远翁小东汪志顺杜洋包贤涛杨瑞武汉大学人民医院泌尿外科湖北武汉430060

目的:研究胡黄连提取物对缺氧/复氧后肾小管上皮细胞氧化应激的保护作用和机制。方法:采用小鼠肾小管上皮细胞建立缺氧/复氧损伤模型,分别用不同梯度浓度胡黄连苷Ⅱ(1,10,100,1 000μg/ml)进行药物干预。MTT法检测细胞活性,BCA蛋白质分... 详细信息

目的:研究胡黄连提取物对缺氧/复氧后肾小管上皮细胞氧化应激的保护作用和机制。方法:采用小鼠肾小管上皮细胞建立缺氧/复氧损伤模型,分别用不同梯度浓度胡黄连苷Ⅱ(1,10,100,1 000μg/ml)进行药物干预。MTT法检测细胞活性,BCA蛋白质分析试剂盒检测细胞培养液中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,免疫组化检测Bax蛋白的表达,Western Blot法检测高迁移率族蛋白(HMGB1)的表达,Realtime PCR检测Bax和Bcl-2mRNA表达。结果:与正常组相比,各缺氧/复氧组细胞内氧化应激水平增高,凋亡细胞或死亡细胞数量明显增加。与单纯缺氧/复氧组比较,不同浓度梯度的胡黄连苷Ⅱ可抑制细胞内的氧化损伤。胡黄连苷Ⅱ使肾小管上皮细胞增殖活性增强,细胞凋亡数量减少,培养液中MDA含量下降、SOD活性增强,Bax蛋白和HMGB1蛋白表达下调,Bax mRNA水平下调,Bcl-2mRNA水平上调。结论:缺氧/复氧导致肾小管上皮细胞内氧化应激增强,胡黄连苷Ⅱ能通过抑制肾小管细胞内氧化应激来改善缺氧/复氧后的细胞凋亡和坏死。

关键词：胡黄连苷Ⅱ 肾小管上皮细胞缺氧/复氧氧化应激