检索结果-南通市图书馆

今日畜牧兽医 2012年第9期28卷 17-21页

作者：汤细彪华中农业大学动物传染病诊断中心武汉科前动物生物制品有限责任公司湖北武汉430070

1高热病的突出临床问题1．1高热病的突出问题莫名发热（40℃～41℃），全身皮肤发红，食欲废绝，尖端效应或全身败血。多系统衰竭（淋巴结、肺、心肌），传播速度快、成活率低（50％～85％）。

关键词：高热病防控猪群尖端效应传播速度淋巴结成活率突出

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猪源多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定

中国兽医科学 2015年第9期45卷 943-951页

作者：彭忠王庚吴广敬王豪男郭龙汤细彪吴斌陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070

2014年3月至2015年2月从来源于全国15个省份的180份临床猪肺组织样品中共分离到71株多杀性巴氏杆菌,分离率为39.4%。利用PCR技术对所分离的多杀性巴氏杆菌进行荚膜血清型鉴定,其中A型菌株41株（占57.8%）,D型菌株27株（占38.0%）,F型菌... 详细信息

2014年3月至2015年2月从来源于全国15个省份的180份临床猪肺组织样品中共分离到71株多杀性巴氏杆菌,分离率为39.4%。利用PCR技术对所分离的多杀性巴氏杆菌进行荚膜血清型鉴定,其中A型菌株41株（占57.8%）,D型菌株27株（占38.0%）,F型菌株3株（占4.2%）,71株多杀性巴氏杆菌中包括1株D型产毒素多杀性巴氏杆菌（占1.4%）,说明当前在我国猪群中流行的多杀性巴氏杆菌主要为A型和D型菌株。应用PCR检测多杀性巴氏杆菌23种毒力基因,结果显示：多杀性巴氏杆菌毒力基因的数量大多分布在15～19之间,平均携带个数为17.5个;23种毒力基因中,ptfA,fimA,hsf-2,sodA,sodC,ompA,ompH,oma87,plpB,exbB,tonB,Fur,hgbB的检出率在90%以上,而toxA基因的检出率极低（1.4%）,并且在猪源多杀性巴氏杆菌中未检测到t bpA的存在;分析毒力基因在不同血清型菌株中的携带及分布情况发现,A型的平均毒力基因携带数为18.2个,D型为16.4个;不同毒力基因在不同血清型的多杀性巴氏杆菌中的分布也存在一定的差异,其中唾液酸代谢酶基因nanB、透明质酸酶基因pmHAS及黏附基因tadD和pfhA在A型多杀性巴氏杆菌中的检出率高于其在D型多杀性巴氏杆菌中的检出率（P〈0.01）;而黏附基因hsf-1在D型多杀性巴氏杆菌的检出率显著高于其在A型多杀性巴氏杆菌中的检出率（P〈0.01）。对所分离菌株的16SrRNA基因进行测序,并与NCBI上公布的10株多杀性巴氏杆菌16S rRNA基因进行进化树分析,结果显示：71株多杀性巴氏杆菌主要分为2个亚群,亚群Ⅰ和HB03及3480的亲缘关系较近,而亚群Ⅱ则与HN06、Pm70、36950等菌株的亲缘关系较近;遗传进化的结果说明,多杀性巴氏杆菌的亲缘关系与其来源、血清型及其导致的疾病种类并没有表现出特定的亲缘关系。

关键词：多杀性巴氏杆菌分离鉴定荚膜血清型毒力基因 16SrRNA基因

重组产毒多杀性巴氏杆菌毒素PMT的N-端和C-端蛋白的生物学活性及免疫原性

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微生物学报 2008年第2期48卷 213-219页

作者：汤细彪吴斌赵战勤邓永何华何启盖陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 中国兽医药品监察所北京100081

将5个toxA基因片段N1518、C2345、N3172、N3388和C2115分别克隆到合适的原核表达载体pET-28a(b,c)系统,其中pET28a-N1518和pET28b-C2115在大肠杆菌成功表达,获得大小分别为57kDa和78kDa的融合蛋白rPMT-N和rPMT-C,Western blot检测证实两种表达产物均具有反应原性。分别以200μg rPMT-N和rPMT-C对小白鼠进行体内生物学活性试验,结果两种表达蛋白均不能致死小白鼠;体外细胞毒性试验证实896ng/mL的rPMT-N能使Vero细胞发生病变,而rPMT-C对Vero细胞无明显毒性作用。将rPMT-N和rPMT-C制成亚单位疫苗,同时设天然PMT及无菌PBS对照组,间隔2周分2次皮下免疫小白鼠。二免后2周用8.2×10~5 CFU的HN-13株T^+Pm进行腹腔攻毒,结果rPMT-N组保护率为90.0%(9/10),rPMT-C组保护率为50.0%(5/10),天然PMT组保护率为80.0%(8/10)。综上试验表明,rPMT-N具有良好的生物学活性和免疫原性,可作为PAR疫苗添加成分,显示了良好的应用前景。

关键词：产毒多杀性巴氏杆菌 PMT 亚克隆生物学活性免疫原性

肠外致病性大肠埃希菌多重耐药性及氨基糖苷类耐药基因分析

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中国抗生素杂志 2009年第8期34卷 498-504页

作者：张璇汤细彪吴斌陈石夏欣满晓营陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

目的检测临床分离猪、鸡源肠外致病性大肠埃希菌的耐药性,分析其携带的氨基糖苷类耐药基因,以指导临床用药,探究细菌对氨基糖苷类抗生素的抗性机制。方法应用K-B法测定分离株对19种常用抗生素的耐药情况。用双纸片法检测产ESBLs菌株并... 详细信息

目的检测临床分离猪、鸡源肠外致病性大肠埃希菌的耐药性,分析其携带的氨基糖苷类耐药基因,以指导临床用药,探究细菌对氨基糖苷类抗生素的抗性机制。方法应用K-B法测定分离株对19种常用抗生素的耐药情况。用双纸片法检测产ESBLs菌株并进行基因分型。用PCR和测序方法检测氨基糖苷类抗性基因aadA1,aadA2,strA-strB,aadB,aacC2,aac(3)-IV,aph(3′)-Ia,aph(3′)-IIa。结果临床分离株表现多重耐药性,对头孢菌素类药物和阿米卡星的敏感性最高(63%～97%),93%的菌株耐药谱值≥10。共检测到两株产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株,基因型属TEM-1+CTX-M-14。耐药菌株与相应的氨基糖苷类耐药基因符合率高(≥74%)且序列保守。结论猪、鸡源肠外致病性大肠埃希菌呈多重耐药性,其对氨基糖苷类抗生素的抗性机制以产生针对该类抗生素的修饰酶为主。

关键词：肠外致病性大肠埃希菌耐药性氨基糖苷类抗生素耐药基因型

猪链球菌谷氨酰胺tRNA合成酶的原核表达产物的小鼠免疫试验

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微生物学报 2010年第3期50卷 418-422页

作者：胡睿铭赵战勤李伦勇李增强汤细彪段龙川吴斌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

【目的】猪链球菌谷氨酰tRNA合成酶(Glutamyl tRNA Synthetase,GtS)是一种催化谷氨酰胺与对应的tRNA发生酯化反应形成谷氨酰tRNA的蛋白酶。本研究通过小鼠免疫保护力实验来评价Gts的免疫原性。【方法与结果】使用clustalX对GenBank中链... 详细信息

【目的】猪链球菌谷氨酰tRNA合成酶(Glutamyl tRNA Synthetase,GtS)是一种催化谷氨酰胺与对应的tRNA发生酯化反应形成谷氨酰tRNA的蛋白酶。本研究通过小鼠免疫保护力实验来评价Gts的免疫原性。【方法与结果】使用clustalX对GenBank中链球菌属的GtS进行同源性分析,结果显示GtS的氨基酸序列在链球菌属内同源性达到95%以上。利用原核表达系统在大肠杆菌BL21中表达(His)6-GtS融合蛋白。SDS-PAGE和Western blot结果表明该融合蛋白在BL21菌株中高效表达,并且具有良好的免疫原性。融合蛋白经过组氨酸标签纯化试剂盒(Novagen)纯化后获得纯度为93.3%、浓度为433μg/mL的重组蛋白rGtS。在小鼠免疫保护试验中,使用rGtS混合弗氏佐剂免疫Balb/c小鼠。免疫过后用4倍LD50剂量的SC19菌株(1.2×109CFU)攻毒,rGtS免疫组小鼠的存活率达50%(4/8),高于空载体对照(1/8)。【结论】本研究证实rGtS融合蛋白具有良好免疫原性,能够提供部分的保护,是一种非常有潜力的亚单位疫苗候选蛋白。

关键词：猪链球菌谷氨酰胺tRNA合成酶免疫原性

猪源支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

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中国农业科学 2008年第12期41卷 4209-4217页

作者：赵战勤裴洁薛云汤细彪吴斌何华周学利程相朝何启盖陈焕春华中农业大学动物医学院/农业微生物学国家重点实验室河南科技大学动物科技学院

【目的】探讨2003～2006年间支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)在中国湖北等十余省市猪群中的流行病学分布和协同感染特性并对部分菌株进行生物学特性研究。【方法】采用病原菌的形态学观察、生化鉴定和PCR鉴定,从2 05... 详细信息

【目的】探讨2003～2006年间支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)在中国湖北等十余省市猪群中的流行病学分布和协同感染特性并对部分菌株进行生物学特性研究。【方法】采用病原菌的形态学观察、生化鉴定和PCR鉴定,从2 057份有肺炎或萎缩性鼻炎症状猪的肺脏等病料组织中分离出190株Bb和不同数量的其它共感染菌。经生化鉴定,药敏试验、血凝试验及动物试验等方法进行检测和分析。【结果】在中国湖北等十余省市的猪群中,不同省份Bb的总分离率介于7.3%～14.1%之间;不同年份Bb的总分离率介于7.3%～11.8%之间;2003～2006年间的Bb总分离率为9.2%;Bb的分离率与猪日龄有一定的关系。Bb最常见的共感染菌依次是链球菌(55.9%)、副猪嗜血杆菌(50.0%)、大肠杆菌(43.1%)、巴氏杆菌(25.5%)、绿脓杆菌(17.6%)和沙门氏菌(11.8%)。在43份有典型萎缩性鼻炎症状猪的病料中,分离出22株Bb、7株产毒素巴氏杆菌和6株绿脓杆菌;在分离出产毒素巴氏杆菌的7份病料中均同时分离出了Bb,而其中6份又同时分离出了绿脓杆菌。对2003年分离的31株Bb进行药敏试验、红细胞凝集试验和乳鼠皮肤坏死试验。结果表明:各菌株对15种药物的耐药谱不同,但对卡那霉素、庆大霉素、多粘菌素B、环丙沙星和舒普深高度敏感;各菌株均可凝集猪和羊的红细胞且能不同程度导致乳鼠皮肤坏死。【结论】在中国湖北等十余省市的猪群中,Bb与其它病原菌的共感染情况非常严重,且在萎缩性鼻炎的病猪中检出率最高。

关键词：支气管败血波氏杆菌流行病学协同感染毒力因子

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商品猪群呼吸道疾病常见病原分析与防控技术

中国猪业 2017年第2期12卷 75-78页

作者：吴成龙王滇汤细彪武汉科前生物股份有限公司

猪呼吸道疾病已成为当今养猪生产过程中最为常见的问题之一,为多种因素引起的呼吸道疾病综合征(PRDC)。该病常年流行,无明显季节性,以保育猪和生长育肥猪多发,病原复杂,难以根治,严重影响猪群的生长性能,导致饲料报酬率大大降低,给猪场... 详细信息

猪呼吸道疾病已成为当今养猪生产过程中最为常见的问题之一,为多种因素引起的呼吸道疾病综合征(PRDC)。该病常年流行,无明显季节性,以保育猪和生长育肥猪多发,病原复杂,难以根治,严重影响猪群的生长性能,导致饲料报酬率大大降低,给猪场带来了严重的经济损失。本文通过对商品猪群呼吸道疾病发生特点、感染模式、常见病原、临床表现等方面进行分析,提出商品猪群呼吸道疾病综合防控方案,以供养殖同行借鉴参考。

关键词：商品猪呼吸道疾病病原分析免疫防控

猪胸膜肺炎放线杆菌临床分离株特性分析及疫苗候选菌株筛选

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四川农业大学学报 2024年

作者：陈虹宇朋璐张娇韩未尧汤细彪宋文博黄超金卉周锐黎璐华中农业大学动物医学院/农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室/生猪健康养殖省部共建协同创新中心武汉科前生物股份有限公司北京金诺百特科技有限公司

【目的】分析胸膜肺炎放线杆菌（APP）临床分离株的优势血清型，获得疫苗候选菌株。【方法】从国内疑似分离株中鉴定获得53株APP菌株，鉴定各菌株血清型及评价其生物学特性后，利用大蜡螟和小鼠模型筛选评估有价值的疫苗候选菌株。【结... 详细信息

【目的】分析胸膜肺炎放线杆菌（APP）临床分离株的优势血清型，获得疫苗候选菌株。【方法】从国内疑似分离株中鉴定获得53株APP菌株，鉴定各菌株血清型及评价其生物学特性后，利用大蜡螟和小鼠模型筛选评估有价值的疫苗候选菌株。【结果】53株APP中血清型占比由高到低依次为1、7、15、5型，各菌株在体外生长存活能力强，具有不同程度的溶血活性。MIC结果显示，分离菌株对氟苯尼考敏感度较低，而对头孢类药物高度敏感。用大蜡螟和小鼠模型从每个血清型菌株中各筛选到一株高毒力候选菌株。其中，1型菌株制备的灭活疫苗能够以小于商品化疫苗中1型菌株1/5的剂量，保护100%同血清型攻毒小鼠存活。同时，商品化疫苗中缺乏的15型菌株制备的灭活疫苗对同血清型攻毒小鼠保护率为66.7%，高于商品化疫苗的保护率。【结论】本研究筛选获得高毒力的优势血清型1、5、7、15型菌株各一株，根据免疫剂量和免疫保护率分析，其中的1型菌株和15型菌株有开发为新疫苗候选菌株的潜力。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌临床分离株血清型灭活疫苗猪传染性胸膜肺炎

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我国猪群中多杀性巴氏杆菌的基因型分析

畜牧兽医学报 2019年第5期50卷 1064-1072页

作者：彭忠梁婉艾伟诚王斐华琳汤细彪陈焕春吴斌华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室生猪健康养殖协同创新中心武汉430070 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室武汉430070

本研究旨在了解我国猪群中流行的多杀性巴氏杆菌(Pm)的主要基因型。利用荚膜基因分型、脂多糖(LPS)基因分型、多位点序列分型(MLST)对2013年12月—2017年12月4年间来源于我国各地区规模化猪场患有疑似呼吸系统疾病的病死猪肺、鼻拭子、... 详细信息

本研究旨在了解我国猪群中流行的多杀性巴氏杆菌(Pm)的主要基因型。利用荚膜基因分型、脂多糖(LPS)基因分型、多位点序列分型(MLST)对2013年12月—2017年12月4年间来源于我国各地区规模化猪场患有疑似呼吸系统疾病的病死猪肺、鼻拭子、气管、肝等样品中分离鉴定的Pm进行基因型分析,并对23种主要毒力基因进行检测。结果表明,当前在我国猪群中流行的Pm的荚膜基因型为A(48.85%)、D(42.75%)、F(2.67%),优势基因型为A和D;LPS基因型为L3(25.00%)和L6(75.00%)型,优势基因型为L6;MLST基因型为ST3(21.25%)、ST10(27.50%)、ST11(42.50%)、ST12(2.50%)、ST16(2.50%)、ST74(1.25%)及ST75(2.50%),优势基因型为ST3、ST10和ST11。如果将荚膜基因型、LPS基因型和MLST基因型组合起来看,当前在我国猪群中流行的Pm的主要基因型为荚膜:脂多糖:MLST基因型A:L3:ST3(20.00%)、A:L6:ST10(26.25%)及D:L6:ST11(42.50%)。毒力基因检测的结果发现部分毒力基因的分布表现出一定的"基因型偏好性"。结果提示,D:L6:ST11是我国猪群中流行的多杀性巴氏杆菌的主要基因型,可能与我国猪群中由多杀性巴氏杆菌导致的呼吸道疾病密切相关。

关键词：猪多杀性巴氏杆菌荚膜基因型脂多糖基因型 MLST基因型毒力基因

牛结节性皮肤病病毒抗体竞争ELISA检测方法的建立

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中国兽医学报 2024年第5期44卷 928-934页

作者：柯文婷李杨但汉并余瑞瑶汤细彪董晓辉武汉科前生物股份有限公司湖北武汉430223 宜昌市动物疫病预防控制中心湖北宜昌443000

为建立高效检测牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus, LSDV)的血清学方法,本研究设计优化LSDV RNA聚合酶30亚基(RPO30)蛋白的密码子,构建其原核表达质粒pET-25b-RPO30,并进行诱导表达和阴离子纯化。纯化后的RPO30蛋白可以被LSD... 详细信息

为建立高效检测牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus, LSDV)的血清学方法,本研究设计优化LSDV RNA聚合酶30亚基(RPO30)蛋白的密码子,构建其原核表达质粒pET-25b-RPO30,并进行诱导表达和阴离子纯化。纯化后的RPO30蛋白可以被LSDV的阳性血清识别,具有良好的反应原性。用纯化的RPO30蛋白免疫BALB/c小鼠,并将免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,筛选到能够稳定分泌抗体且具有竞争效果的杂交瘤细胞株1H1。以重组RPO30蛋白为包被抗原,经反应条件的优化,建立了基于RPO30蛋白的竞争ELISA(cELISA)抗体检测方法。本研究建立的cELISA检测方法的最适抗原包被质量浓度为1 mg/L,用含5%牛血清白蛋白(BSA)的PBST作为封闭液37℃孵育2 h,待测血清的最适稀释度为1∶2,1H1抗体稀释度为1∶2 000,兔抗鼠HRP-IgG稀释度为1∶4 000,最佳显色条件是37℃反应15 min。当检测样品的1-S/P≥0.55,判定结果为阳性;当检测样品的1-S/P<0.55,判定结果为阴性。利用该方法检测了LSDV、牛传染性鼻支气管炎病毒(IBRV)、牛支原体(***)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛布鲁杆菌(***)、口蹄疫病毒(FMDV)阳性血清,结果显示除了LSDV检测结果阳性外,其他病原的检测结果都是阴性,说明本方法特异性强。利用本试验建立的cELISA检测有免疫背景的临床血清200份,结果显示,其可用于临床疫苗免疫效果的评估。本研究基于重组RPO30蛋白建立的cELISA方法操作简单、特异性强、敏感性高、重复性好,为LSDV的检测和预防提供了可靠的技术支持。

关键词：牛结节性皮肤病病毒 RPO30基因原核表达竞争ELISA