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HL7702-HBX与HepG2-HBX细胞株的建立及鉴定

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中国热带医学 2010年第7期10卷 800-801,803页

作者：尤红娟裴冬生刘晓梅汤仁仙徐州医学院病原生物学与免疫学教研室江苏徐州221002 徐州医学院肿瘤生物治疗实验室江苏徐州221002

目的建立稳定、高效的HBx蛋白体外表达细胞株,以便进一步研究HBX基因和HBx蛋白的致癌作用及机理。方法建立HBX真核表达载体pcDNA3.1-HBX,通过脂质体介导将pcDNA3.1-HBX转染到人正常肝细胞株HL7702及人肝肿瘤细胞株HepG2中。结果 RT-PCR... 详细信息

目的建立稳定、高效的HBx蛋白体外表达细胞株,以便进一步研究HBX基因和HBx蛋白的致癌作用及机理。方法建立HBX真核表达载体pcDNA3.1-HBX,通过脂质体介导将pcDNA3.1-HBX转染到人正常肝细胞株HL7702及人肝肿瘤细胞株HepG2中。结果 RT-PCR、蛋白质印迹及免疫荧光的实验结果显示,HBX基因在人正常肝细胞株HL7702及人肝肿瘤细胞株HepG2中得到了表达。结论成功构建了表达HBx蛋白的HL7702-HBX与HepG2-HBX细胞株,为进一步研究HBX基因和HBx蛋白的致癌作用及机制奠定了实验基础。

关键词： HBX 细胞株基因表达

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浅谈综合创新实验教学在病原生物学中的应用

现代职业教育 2019年第34期 42-43页

作者：寇艳波刘晓梅付琳琳汤仁仙徐州医科大学病原生物学与免疫学教研室

病原生物学内容多、知识点散乱,给教学带来较大的挑战,同时也为培养学生综合素养和创新能力提供了无限的可能。分享综合创新实验教学改革在病原生物学中应用的几点体会。通过以动物模型为案例引导的病原生物学综合创新实验的开展,锻炼... 详细信息

病原生物学内容多、知识点散乱,给教学带来较大的挑战,同时也为培养学生综合素养和创新能力提供了无限的可能。分享综合创新实验教学改革在病原生物学中应用的几点体会。通过以动物模型为案例引导的病原生物学综合创新实验的开展,锻炼学生的动手能力,巩固对理论知识的理解和记忆,更重要的是可以培养学生的综合分析能力和实践创新能力。

关键词：病原生物学实验教学综合创新

着力提高青年教师医学微生物学与免疫学实验教学能力的体会

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继续医学教育 2017年第3期31卷 66-67页

作者：孔凡运尤红娟刘晓梅汤仁仙徐州医科大学基础医学院病原生物学与免疫学教研室江苏徐州221004

实验教学是医学微生物学与免疫学课程中的重要组成部分。在实验教学过程中,青年教师只有提升自身的实验教学能力,才能提高教学质量,达到满意的教学效果。现将青年教师在承担医学微生物学与免疫学实验教学中做法和思考,结合我校教师教学... 详细信息

实验教学是医学微生物学与免疫学课程中的重要组成部分。在实验教学过程中,青年教师只有提升自身的实验教学能力,才能提高教学质量,达到满意的教学效果。现将青年教师在承担医学微生物学与免疫学实验教学中做法和思考,结合我校教师教学发展中心培训情况,就如何提升青年教师的实验教学能力,让青年教师尽快成长为优秀教师,进行了总结。

关键词：青年教师教学能力医学微生物学与免疫学教学效果

丙酮酸乙酯对类风湿性关节炎大鼠滑膜成纤维细胞增殖的影响

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免疫学杂志 2017年第4期33卷 283-287页

作者：李向阳秦苏萍颜超于倩华慧潘伟孔凡运郑葵阳汤仁仙徐州医科大学病原生物学与免疫学教研室 221004

目的探讨丙酮酸乙酯对滑膜成纤维细胞增殖的影响。方法收集胶原诱导的关节炎大鼠(collagen induced arthritis,CIA)和正常大鼠滑膜组织,培养滑膜成纤维细胞。光镜及免疫荧光法检测Vimentin蛋白鉴定滑膜成纤维细胞;分别用1、2、5、10、20... 详细信息

目的探讨丙酮酸乙酯对滑膜成纤维细胞增殖的影响。方法收集胶原诱导的关节炎大鼠(collagen induced arthritis,CIA)和正常大鼠滑膜组织,培养滑膜成纤维细胞。光镜及免疫荧光法检测Vimentin蛋白鉴定滑膜成纤维细胞;分别用1、2、5、10、20 mmol/L浓度的丙酮酸乙酯作用于滑膜成纤维细胞;流式细胞术及CCK8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果显微镜观察细胞形态特征符合滑膜成纤维细胞,且Vimentin蛋白表达阳性;5种剂量的丙酮酸乙酯均能抑制细胞增殖同时诱导细胞凋亡,但是未见明显剂量依赖效应,以5 mmol/L剂量组作用效果最为明显。结论丙酮酸乙酯能够抑制滑膜成纤维细胞增殖同时促进其凋亡,且以5 mmol/L剂量组作用最为明显。

关键词：丙酮酸乙酯滑膜成纤维细胞细胞增殖细胞凋亡

受鼠年龄对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病发生的影响

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中国实验血液学杂志 2012年第2期20卷 405-411页

作者：张翠平曾令宇潘彬齐昆明李向阳李小翠汤仁仙徐州医学院病原生物学与免疫学教研室江苏徐州221002 徐州医学院移植免疫实验室江苏徐州221002

本研究通过建立2种周龄的小鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型,探讨受鼠年龄对小鼠异基因骨髓移植后aGVHD发生的影响。选用近交系8-10周龄C57BL/6(H-2Kb)小鼠作为供鼠,18-20周龄及8-10周龄的BALB/c(H-2Kd)小鼠作为受鼠;两种周龄的小鼠均... 详细信息

本研究通过建立2种周龄的小鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型,探讨受鼠年龄对小鼠异基因骨髓移植后aGVHD发生的影响。选用近交系8-10周龄C57BL/6(H-2Kb)小鼠作为供鼠,18-20周龄及8-10周龄的BALB/c(H-2Kd)小鼠作为受鼠;两种周龄的小鼠均分为正常对照组、单纯照射组和模型组。单纯照射组及模型组小鼠给予总剂量率为7.5 Gy的60Coγ射线全身照射,其剂量率为0.68 Gy/min。模型组小鼠照射后4 h进行骨髓细胞+脾细胞移植,每只小鼠输入骨髓细胞数5×106个,脾细胞数5×105个。每天观察各组小鼠的一般情况、生存状态。于照射后第5、10、15、20、25、30天计数各组小鼠外周血白细胞数量;采用流式细胞术测定各组小鼠外周血白细胞嵌合率及T淋巴细胞亚群、Th1细胞比例;观察正常对照组、单纯照射组及第5、15和25天模型组小鼠肝脏、小肠和皮肤的组织病理学变化。结果表明:照射后1个月模型组小鼠均发生aGVHD,18-20周龄组小鼠与8-10周龄组相比,移植后aGVHD发生率低(60%vs 100%),临床评分低,生存率比为83%vs 61%,两组间差异显著;18-20周龄组小鼠外周血白细胞在移植后第10天达到清髓,第15天白细胞开始恢复,而8-10周龄组则分别为移植后第5和第10天,两组间差异显著;18-20周龄组小鼠外周血供者来源的白细胞在移植后第20天达到完全嵌合,而8-10周龄组为第10天,两组间差异显著;18-20周龄组小鼠外周血T淋巴细胞亚群中CD8+T细胞及Th1细胞比例均低于8-10周龄组,两组间差异显著。组织病理学变化显示,在相同时间点,18-20周龄组小鼠的肝脏、小肠及皮肤的炎症和坏死程度均较8-10周龄组轻微。结论:18-20周龄受鼠比8-10周龄受鼠aGVHD发生率低,程度轻,生存状况较好,受鼠年龄影响aGVHD的发生和进程。

关键词：受鼠年龄骨髓移植移植物抗宿主病

2种方法检测抗核抗体对系统性红斑狼疮诊断价值的比较

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中国校医 2009年第3期23卷 264-265页

作者：秦苏萍杜文平汤仁仙徐州医学院病原生物学与免疫学教研室江苏徐州221002

目的比较免疫金银法和免疫荧光法检测抗核抗体对系统性红斑狼疮(SLE)的诊断价值。方法对SLE和其余6种自身免疫性疾病患者及健康人血清采用免疫金银染色法和间接免疫荧光法检测抗核抗体,并比较分析两种方法检测抗核抗体对SLE诊断的敏感... 详细信息

目的比较免疫金银法和免疫荧光法检测抗核抗体对系统性红斑狼疮(SLE)的诊断价值。方法对SLE和其余6种自身免疫性疾病患者及健康人血清采用免疫金银染色法和间接免疫荧光法检测抗核抗体,并比较分析两种方法检测抗核抗体对SLE诊断的敏感性、特异性、正确率、阳性预测值、阴性预测值、Youden指数等指标。结果免疫金银法和免疫荧光法检测抗核抗体阳性率为:SLE患者100%和96%、类风湿关节炎患者10%和36%、强直性脊柱炎患者2%和13%、系统性硬皮病患者13%和73%、干燥综合征患者27%和82%、皮肌炎患者12.5%和37.5%、血管炎患者0%和17%、健康人0%和0%。统计分析显示免疫金银染色法检测抗核抗体对SLE诊断的特异性、正确率、阳性预测值及Youden指数较免疫荧光法高,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论免疫金银法检测ANA对SLE具有高度的敏感性和特异性,因此临床上采用免疫金银法检测ANA用于对SLE的辅助诊断更有价值。

关键词：免疫金银法荧光抗体技术抗核抗体免疫组织化学红斑狼疮系统性

Fas/FasL诱导细胞凋亡在大鼠抗GBM肾炎中的作用

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中国现代医学杂志 2010年第14期20卷 2122-2127页

作者：张媛媛苏海燕秦苏萍李小翠曾令宇汤仁仙徐州医学院病原生物学与免疫学教研室江苏徐州221002 徐州空军学院门诊部江苏徐州221000

目的探讨Fas/FasL诱导细胞凋亡在大鼠抗肾小球基底膜(GBM)肾炎中的作用。方法复制大鼠抗GBM肾炎模型,在实验室的2、7、14、21和28d,行以下处理:收集24h尿、血清样本检测大鼠24h尿蛋白、血肌酐及血尿素氮含量;取肾组织经光镜、电镜观察... 详细信息

目的探讨Fas/FasL诱导细胞凋亡在大鼠抗肾小球基底膜(GBM)肾炎中的作用。方法复制大鼠抗GBM肾炎模型,在实验室的2、7、14、21和28d,行以下处理:收集24h尿、血清样本检测大鼠24h尿蛋白、血肌酐及血尿素氮含量;取肾组织经光镜、电镜观察肾组织病理变化;采用RT-PCR法和Western blot法检测肾组织中Fas、FasL和Caspase-3的表达情况;采用分光光度法检测肾组织中Caspase-3活性;采用TUNEL法检测大鼠肾组织细胞凋亡情况。结果与正常对照组大鼠相比,肾炎模型组大鼠24h尿蛋白、血肌酐及血尿素氮含量均明显升高(P<0.01);肾组织中Fas、FasL mRNA及其蛋白和Caspase-3 mRNA及其蛋白活性均明显增加(P<0.01);肾组织中凋亡细胞数明显增多(P<0.01),且与Fas、FasL及Caspase-3表达呈正相关(P<0.01)。结论 Fas/FasL诱导的细胞凋亡在大鼠抗GBM肾炎中发挥重要作用。

关键词： Fas FasL 抗GBM肾炎细胞凋亡

人补体C_(5b～9)复合物对大鼠肾系膜细胞一氧化氮生成的影响

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中国病理生理杂志 2000年第3期16卷 262-265页

作者：王迎伟何球藻秦慧莲汤仁仙高丰光张光毅江苏徐州医学院免疫学教研室江苏徐州221002 上海医科大学免疫学教研室徐州医学院生化教研室

目的 :探讨人补体C5b～ 9复合物对大鼠肾小球系膜细胞 (MC)合成一氧化氮 (NO)的影响。方法 :首先提取人补体C5b～ 9复合物 ,同时培养出大鼠肾小球MC。然后用C5b～ 9复合物刺激MC ,观察刺激后 6h、2 4h、和 48h培养上清液中NO代谢产物 -... 详细信息

目的 :探讨人补体C5b～ 9复合物对大鼠肾小球系膜细胞 (MC)合成一氧化氮 (NO)的影响。方法 :首先提取人补体C5b～ 9复合物 ,同时培养出大鼠肾小球MC。然后用C5b～ 9复合物刺激MC ,观察刺激后 6h、2 4h、和 48h培养上清液中NO代谢产物 -硝酸根 (NO-3 )和亚硝酸根 (NO 2 )量的变化 ,并测定刺激后 2 4h、48h时MC内环鸟苷酸 (cGMP)的水平。结果 :用人C5b～ 9复合物刺激大鼠MC后可致培养上清中NO 3 /NO 2 含量增加 ,细胞内cGMP水平上升。NO合成增多能够被NO合酶 (NOS)抑制剂—─ -NG-硝基 -L -精氨酸甲基酯 (L -NAME)所抑制。结论 :人C5b～ 9复合物能够增加大鼠肾MC的NO合成。

关键词：补体膜攻击复合物肾小球系膜细胞一氧化氮

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山东沂源硬蜱携带无形体的调查及进化分析

动物医学进展 2015年第12期36卷 103-107页

作者：刘相叶武志强刘转转汤仁仙颜超郑葵阳徐州医学院病原生物学与免疫教研室感染与免疫实验室江苏徐州221004 Department of Biology Colorado State University

为了解山东省沂源县境内硬蜱携带无形体的流行及菌株变异情况,于2015年5月~7月从该地区山羊体表共分离到54份126只不同生活史阶段的长角血蜱,分组研磨提取DNA后,利用套式PCR扩增无形体的16SrRNA（ribosomal RNA）基因片段并测序及进行... 详细信息

为了解山东省沂源县境内硬蜱携带无形体的流行及菌株变异情况,于2015年5月~7月从该地区山羊体表共分离到54份126只不同生活史阶段的长角血蜱,分组研磨提取DNA后,利用套式PCR扩增无形体的16SrRNA（ribosomal RNA）基因片段并测序及进行序列的遗传进化分析。结果显示,54份样品PCR阳性扩增率为48.1%;序列分析表明,该地区无形体存在6个变异株,分为4类,其中3类与该地区以往报道的嗜吞噬细胞无形体序列保持密切的遗传关系,还有1类与日本长角血蜱体内检出的牛无形体序列遗传关系较近。由此可见,山东沂源地区长角血蜱存在较高的嗜吞噬细胞无形体感染率,并且变异株较多;应该加强该地区对人粒细胞无形体病的宣传力度,防止该病大规模暴发。

关键词：长角血蜱嗜吞噬细胞无形体流行进化分析