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人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体胞外区基因原核系统的表达与纯化

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中华实验外科杂志 2011年第7期28卷 1047-1047页

作者：郝林刘转转贺厚光范涛尤红娟汤仁仙韩从辉徐州市中心医院泌尿外科江苏221009 徐州医学院病原生物与免疫学教研室

肿瘤坏死因子相关凋产诱导配体（TRAIL）属于肿瘤坏死因子（TNF）超家族成员之一，能够诱导前列腺癌、膀胱癌、肺癌等多种肿瘤细胞凋产，但不影响正常细胞。本研究旨存观察重组TRAIL融合蛋白（GST—rTRAIL）的表达，探讨其包涵体蛋白的... 详细信息

肿瘤坏死因子相关凋产诱导配体（TRAIL）属于肿瘤坏死因子（TNF）超家族成员之一，能够诱导前列腺癌、膀胱癌、肺癌等多种肿瘤细胞凋产，但不影响正常细胞。本研究旨存观察重组TRAIL融合蛋白（GST—rTRAIL）的表达，探讨其包涵体蛋白的复性和纯化方法。

关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体纯化方法胞外区基因原核系统 TRAIL 包涵体蛋白家族成员前列腺癌

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酵母双杂交文库筛选HBX相互作用蛋白

交通医学 2018年第5期32卷 409-414页

作者：颜晓庆刘庆亚杨红宁汤仁仙寇艳波徐州医科大学急救与救援医学系急诊医学实验室江苏221004 徐州医科大学江苏省免疫与代谢重点实验室江苏221004

目的:筛选鉴定新的乙肝病毒X蛋白(hepatitis B viral X protein,HBX)相互作用蛋白。方法:以HBX为诱饵蛋白,将其与酿酒酵母转录因子GAL4 DBD(DNA binding domain)融合表达,将人肝脏cDNA文库编码的蛋白与GAL4的AD区(activation domain)融... 详细信息

目的:筛选鉴定新的乙肝病毒X蛋白(hepatitis B viral X protein,HBX)相互作用蛋白。方法:以HBX为诱饵蛋白,将其与酿酒酵母转录因子GAL4 DBD(DNA binding domain)融合表达,将人肝脏cDNA文库编码的蛋白与GAL4的AD区(activation domain)融合表达。通过酵母双杂交筛选鉴定肝脏中与HBX相互作用的蛋白。筛选得到的阳性酵母转化子,经质粒提取和测序后,分析其所包含的序列编码的蛋白,通过再次验证,初步确定该蛋白是否与HBX具有相互作用。结果:筛选得到5个潜在的能与HBX相互作用的蛋白。结论:通过酵母双杂交c DNA文库筛选,得到多个潜在的HBX相互作用蛋白,进一步的验证及功能研究将对揭示HBX促进肝癌发生的机制起到重要的推动作用。

关键词：乙肝病毒X蛋白酵母双杂交肝癌

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医学留学生人体寄生虫学教学体会与思考

考试周刊 2015年第82期 161-162页

作者：刘相叶付琳琳尤红娟潘智华汤仁仙郑葵阳徐州医学院病原生物学与免疫学教研室

留学生教育是我国高等教育的重要组成部分,人体寄生虫学是留学生临床医学课程体系中一门重要的基础课和必修课。作者就担任留学生寄生虫课程中的教学经验和教学体会进行总结,以期进一步提高教学水平,获得更好的教学效果。

关键词：人体寄生虫学留学生教学体会

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小鼠抗GBM肾炎模型的复制与鉴定

徐州医学院学报 2011年第8期31卷 527-530页

作者：李向阳孔凡运张海清汤仁仙郑葵阳徐州医学院病原生物与免疫学教研室江苏徐州221002

目的为研究人类新月体性肾炎的发病机制,建立小鼠抗肾小球基底膜（GBM）肾炎的动物模型.方法 60只健康昆明小鼠随机分为肾炎模型组和正常对照组.肾炎模型组小鼠一次性尾静脉注射兔抗小鼠GBM血清（16 ml/kg）,正常对照组注射等量正常兔... 详细信息

目的为研究人类新月体性肾炎的发病机制,建立小鼠抗肾小球基底膜（GBM）肾炎的动物模型.方法 60只健康昆明小鼠随机分为肾炎模型组和正常对照组.肾炎模型组小鼠一次性尾静脉注射兔抗小鼠GBM血清（16 ml/kg）,正常对照组注射等量正常兔血清.肾炎模型组小鼠尾静脉注射兔抗小鼠GBM血清前1周,背部皮内注射正常兔血清进行预免疫.于兔抗小鼠GBM血清注射后第7、14、21、28天取尿液、血清、肾组织标本,检测尿蛋白、血肌酐、血尿素氮含量,观察肾组织病理变化.结果肾炎模型组小鼠注射兔抗小鼠GBM血清后,第2天蛋白尿、血肌酐和血尿素氮含量均明显升高,于第14天尿蛋白浓度达到高峰,而血肌酐和血尿素氮含量仍持续上升.肾炎模型组肾组织病理表现为：第7天大量炎症细胞浸润;第21天 GBM增宽增厚,足突融合,大量免疫复合物沉积,内皮细胞及系膜细胞显著增生,新月体形成.结论成功建立了小鼠抗GBM肾炎模型.

关键词：抗GBM肾炎模型制备小鼠

甘西鼠尾草总酚酸提取物对嘌呤霉素氨基核苷大鼠足细胞损伤的保护作用

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肾脏病与透析肾移植杂志 2015年第6期24卷 534-539页

作者：戴德淑刘翔杨阳周璇骆晓梅袁飞蔡青赵勇王增慧李向阳颜超汤仁仙任红旗徐州医学院附属淮海医院肾脏内科徐州221004 徐州医学院附属淮海医院药剂科徐州221004 徐州医学院附属淮海医院检验科徐州221004 徐州医学院附属淮海医院感染与免疫实验室徐州221004

目的:研究甘西鼠尾草总酚酸提取物(SPE)对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)大鼠足细胞损伤的保护作用。方法:建立PAN肾病大鼠动物模型,给予他克莫司和SPE干预治疗,分别在第5、10、15、21天留取血尿标本,同时采用肾组织病理观察大鼠肾小球组织形态... 详细信息

目的:研究甘西鼠尾草总酚酸提取物(SPE)对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)大鼠足细胞损伤的保护作用。方法:建立PAN肾病大鼠动物模型,给予他克莫司和SPE干预治疗,分别在第5、10、15、21天留取血尿标本,同时采用肾组织病理观察大鼠肾小球组织形态学改变,透射电镜观察肾小球足细胞超微结构改变,并分别从mRNA和蛋白水平分析足细胞裂孔膜蛋白的表达水平。结果:(1)除正常组外,各组大鼠尿蛋白定量第5天时已明显升高,第10天上升至高峰,而后开始下降,第15天时仍明显高于正常。给予药物干预后,可降低大鼠的尿蛋白排泄量,且阳性对照组与SPE高剂量组降低尿蛋白的程度较为接近。(2)光镜下未见肾小球形态异常。电镜结果显示第5天时已出现肾小球足细胞足突融合,第10天时足突融合最明显,随后开始恢复,第21天基本恢复正常;SPE高剂量组和阳性对照组的足突融合程度较轻。(3)阳性对照组和SPE组大鼠的nephrin、podocin蛋白表达水平高于模型对照组。第5天时各组大鼠蛋白表达低于正常,第10天时下降更为明显,第15天蛋白表达已开始回升,至第21天时恢复至正常水平。阳性对照组和SPE高剂量组大鼠蛋白表达均明显高于其余三组。(4)大鼠nephrin、podocin的mRNA表达量在第5天时已下降,至第10天明显下降至最低水平,而后开始上升,直至第21天恢复至正常水平。阳性对照组和SPE高剂量组的表达水平明显高于其他各组(P<0.05)。结论:SPE对PAN大鼠肾小球足细胞损伤有一定的保护作用,可降低PAN大鼠蛋白尿。

关键词：嘌呤霉素氨基核苷足细胞蛋白尿甘西鼠尾草总酚酸提取物

健康人APOBEC3G基因的克隆及真核表达载体的构建与鉴定

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徐州医学院学报 2010年第4期30卷 219-222页

作者：甘宜敏孔凡运史震汤仁仙郑葵阳徐州医学院病原生物学教研室江苏徐州221002

目的克隆人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3G(apolipoprotein B mRNA editing enzyme,catalyticpolypeptide 3G,APOBEC3G)基因cDNA,构建APOBEC3G基因的真核表达载体,并在体外进行表达和鉴定。方法采用RT-PCR技术从健康人外周血单个核细胞中克隆APOBEC3G基因,将该基因插入pcDNA3.1真核表达载体,构建pcDNA3.1-A3G真核表达质粒,并利用脂质体将重组质粒pcDNA3.1-A3G转染HepG2和HL7702细胞,经免疫细胞化学、Western blot等方法检测APOBEC3G真核表达情况。结果双酶切鉴定和测序结果表明,APOBEC3G真核表达载体构建成功。免疫细胞化学和Western blot结果均显示,转染pcDNA3.1-A3G的HepG2和HL7702细胞APOBEC3G蛋白均高表达,转染空质粒pcDNA3.1和未转染的HepG2和HL7702细胞APOBEC3G蛋白低表达或不表达。结论成功构建了人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3G真核表达载体pcDNA3.1-A3G,为进一步研究APOBEC3G抗HBV作用奠定实验基础。

关键词： APOBEC3G 克隆真核表达载体

CBL结合LBL教学法在医学微生物学与免疫学教学中的实践

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中国高等医学教育 2017年第3期 114-115页

作者：汤仁仙尤红娟刘晓梅李小翠孙伟李秀珍刘莹郑葵阳徐州医科大学基础医学院徐州医科大学教务处徐州医科大学国际合作与交流处江苏徐州221004

为培养新型医学人才,以提高医学微生物学与免疫学的教学效果为切入点,通过不断改进和完善CBL与LBL相结合的教学法,促进学生的学习参与,加强学生的创新思维能力、自主学习能力、沟通能力、团队协作能力,达到了提高教学效果及培养学生的... 详细信息

为培养新型医学人才,以提高医学微生物学与免疫学的教学效果为切入点,通过不断改进和完善CBL与LBL相结合的教学法,促进学生的学习参与,加强学生的创新思维能力、自主学习能力、沟通能力、团队协作能力,达到了提高教学效果及培养学生的自主能动性和创造性的目的。

关键词：医学微生物学与免疫学 CBL教学法 LBL教学法

蛋白激酶B激活对脑缺血再灌注海马CA3区神经元的保护作用

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中华行为医学与脑科学杂志 2014年第12期23卷 1065-1067页

作者：李小翠王晓天尤红娟张清秀周峰汤仁仙郑葵阳刘晓梅徐州医学院基础学院徐州221004 徐州医学院第二附属医院神经科徐州221004

目的探讨丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶B（Protein kinase B,Akt）对脑缺血再灌注损伤后海马CA3区神经元的保护作用.方法采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血模型,再灌注0 min、30 min、3h、6h、12h、1d和3d各时间点,运用免疫印迹技术检测海马... 详细信息

目的探讨丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶B（Protein kinase B,Akt）对脑缺血再灌注损伤后海马CA3区神经元的保护作用.方法采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血模型,再灌注0 min、30 min、3h、6h、12h、1d和3d各时间点,运用免疫印迹技术检测海马CA3区Akt1的磷酸化水平,采用免疫组化和焦油紫染色分别检测LY294002（PI3K/Akt特异性抑制剂）对缺血再灌注后磷酸化Akt1（p-Akt1）的表达及神经元存活的影响.结果缺血再灌注后30 min,与假手术（sham）组相比,海马CA3区p-Akt1的表达显著升高（P＜0.05）,再灌后3h至峰值,一直持续至3d仍维持在较高水平（P＜0.05）;与相应的再灌注组相比,给予LY294002后,p-Akt1的蛋白表达明显降低[R6 h组和LY294002＋ R6 h组的阳性细胞数（个/mm^2）分别为（134.6±7.8）和（54.8±5.1）],海马CA3区的神经元大量死亡[R5 d组和LY294002 ＋R5 d组神经元数量（个/mm^2）分别为（152.0±17.4）和（62.7±5.1）]（P＜0.05）.结论脑缺血再灌注后蛋白激酶Akt的持续激活,是海马CA3区神经元存活的重要因素.

关键词：脑缺血再灌注蛋白激酶B 海马CA3区

2种方法检测抗角质蛋白抗体对类风湿性关节炎诊断价值比较

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徐州医学院学报 2010年第12期30卷 851-853页

作者：汤仁仙秦苏萍李向阳杜文平郑葵阳徐州医学院病原生物与免疫学教研室江苏徐州221002

目的比较免疫金银染色法和免疫荧光法检测抗角质蛋白抗体(anti-keratin antibody,AKA)对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的诊断价值。方法收集临床上确诊为RA患者血清样本50份,同时收集系统性红斑狼疮(systemic lupus erythema... 详细信息

目的比较免疫金银染色法和免疫荧光法检测抗角质蛋白抗体(anti-keratin antibody,AKA)对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的诊断价值。方法收集临床上确诊为RA患者血清样本50份,同时收集系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者、强直性脊柱炎患者、健康者血清样本各20份作为对照,采用免疫金银染色法和间接免疫荧光法检测AKA,比较分析对RA诊断的敏感性、特异性、正确率、阳性预测值、阴性预测值等指标。结果免疫金银法和免疫荧光法检测AKA阳性率:RA组分别为72%和52%,SLE组分别为0和0,强直性脊柱炎组分别为0和10,健康组分别为0和0。2种方法检测AKA对RA诊断的特异性均很高,无统计学差异。而免疫金银染色法检测AKA对RA诊断的敏感性、正确率及Youden指数均较免疫荧光法高,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论免疫金银法检测AKA诊断RA具有高度的敏感性和特异性,临床检测采用免疫金银法检测AKA对RA的辅助诊断更有价值。

关键词：免疫金银染色法免疫荧光法抗角质蛋白抗体类风湿性关节炎