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日本血吸虫抗独特型抗体NP30重链6×CDR3/IL-2融合基因构建及表达

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南京医科大学学报（自然科学版） 2003年第4期23卷 299-301页

作者：徐玮冯振卿朱进仇镇宁李芸茜江汕管晓虹南京医科大学病理学与病理生理学系江苏南京210029 南京军区军事医学研究所江苏南京210002 南京医科大学医学分子生物学研究所江苏南京210029

目的:构建日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30重链可变区6×CDR3基因/IL-2融合基因,以观察其对动物的抗血吸虫感染保护作用。方法:通过PCR方法体外扩增NP30 6×V_HCDR3和IL-2基因,经测序后先后重组入原核表达质粒pET-28a(+)相应的位点上... 详细信息

目的:构建日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30重链可变区6×CDR3基因/IL-2融合基因,以观察其对动物的抗血吸虫感染保护作用。方法:通过PCR方法体外扩增NP30 6×V_HCDR3和IL-2基因,经测序后先后重组入原核表达质粒pET-28a(+)相应的位点上,将构建正确的6×V_HCDR3/IL-2-pET-28a(+)表达质粒转化*** BL21,IPTG诱导表达。结果:构建的6×V_HCDR3/IL-2融合基因中,6×V_HCDR3和IL-2序列均正确,融合基因经IPTG诱导表达重组蛋白,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析分子质量约为30ku,表达量约占菌体总蛋白的20％。结论:成功构建并原核表达了NP30 6×V_HCDR3/IL-2融合基因。

关键词：日本血吸虫融合基因抗体抗独特型白细胞介素-2

神经植入对大段组织工程骨成骨影响的早期实验研究

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中华骨科杂志 2008年第3期28卷 234-239页

作者：姚旺祥裴国献刘勇张洪涛江汕赵培冉梁双武南方医科大学南方医院创伤骨科广州510515

目的研究在组织工程骨内植入神经束对大段组织工程骨成骨的影响以及初步探讨促进成骨的机制。方法48只新西兰大白兔，随机分为4组：A组，单纯组织工程骨组；B组，组织工程骨＋运动神经束植入组（股神经肌支）；C组，组织工程骨＋感觉神... 详细信息

目的研究在组织工程骨内植入神经束对大段组织工程骨成骨的影响以及初步探讨促进成骨的机制。方法48只新西兰大白兔，随机分为4组：A组，单纯组织工程骨组；B组，组织工程骨＋运动神经束植入组（股神经肌支）；C组，组织工程骨＋感觉神经束植入组（隐神经）；D组，组织工程骨＋感觉、运动神经束联合植入组。每只动物均在右侧股骨制备长1．5cm的节段性骨与骨膜缺损．钢板固定后在骨缺损处分别植入四种方法制备的组织工程骨。术后4、8、12周行大体观察、X线观察、新生骨组织定量观察成骨效果，降钙素基因相关肽（CGRP）及S-100蛋白的免疫组化染色观察其在组织工程骨内的分布，并行半定量分析。结果在组织工程骨内植入感觉神经后，比单纯组织工程骨和运动神经束植入的修复效果均有明显提高，而在组织工程骨中植入运动神经与单纯组织工程骨修复效果无明显差异．感觉神经植入与感觉、运动联合植入的成骨效果无明显差异。免疫组化染色显示神经肽类物质CGRP、S-100在C组与D组中的表达高于A组与B组，差异有统计学意义。结论在组织工程骨内植入感觉神经在早期可促进成骨，而植入运动神经未见促进作用，其机制可能是植入的感觉神经在组织工程骨内分泌神经肽所致。

关键词：组织工程骨创伤和损伤神经移位降钙素基因相关肽

磁共振灌注成像监测组织工程骨血管化的实验研究

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南方医科大学学报 2006年第7期26卷 931-935页

作者：王学明裴国献金丹魏宽海江汕唐光辉南方医科大学南方医院创伤骨科广东广州510515

目的探讨磁共振灌注成像在组织工程骨血管化监测中的应用价值。方法在13只恒河猴的25个胫骨上制备20mm的骨膜与骨缺损,依据填充的材料不同随机分为五组,A组:β-磷酸三钙(β-TCP)+骨髓基质干细胞(BMSCs)+血管束;B组:β-TCP+血管束;C组:β... 详细信息

目的探讨磁共振灌注成像在组织工程骨血管化监测中的应用价值。方法在13只恒河猴的25个胫骨上制备20mm的骨膜与骨缺损,依据填充的材料不同随机分为五组,A组:β-磷酸三钙(β-TCP)+骨髓基质干细胞(BMSCs)+血管束;B组:β-TCP+血管束;C组:β-TCP+BMSCs;D组:β-TCP;E组:空白对照。术后4、8、12周行磁共振灌注成像检查并计算信号强度-时间(SI-T)曲线的最大线性斜率(SSmax)和基线值(SIbaseline),拍摄恒河猴胫骨X线片并计算其透光度,同时行放射性核素骨显像检查。结果术后4、8、12周A组的SSmax值最高,术后8周与4周相比SSmax有较大幅度的提高(P=0.003)。术后8周A组5个样本的同位素计数比值与磁共振灌注成像检查的SSmax呈正相关关系(rs=0.899,P=0.038),术后12周A组5个样本的SSmax与X线片透光度呈负相关(rs=-0.892,P=0.042)。结论SI-T曲线的SSmax能够准确地反映组织工程骨的血管化情况,磁共振灌注成像检查具有无创、无辐射、高灵敏度和可定量分析的优点。

关键词：磁共振灌注成像组织工程骨血管化

白细胞介-素12基因invivo疫苗治疗恶性淋巴瘤的实验研究

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解放军医学杂志 2002年第5期27卷 413-415页

作者：江千里达万明江汕孙秉中裴雪涛刘源第四军医大学西京医院解放军总医院南京医科大学病理教研室军事医学科学院

作者制备了IL 12基因的invivo包装细胞疫苗 ,对T细胞淋巴瘤 (EL4 )的小鼠肿瘤模型进行治疗。将C5 7BL/ 6小鼠分为4组 ,除阴性对照组外 ,其余 3组小鼠先于左侧背部皮下接种野生性EL4细胞 1× 10 6/只 ,此后第 1、7、14、2 1天分别于接种... 详细信息

作者制备了IL 12基因的invivo包装细胞疫苗 ,对T细胞淋巴瘤 (EL4 )的小鼠肿瘤模型进行治疗。将C5 7BL/ 6小鼠分为4组 ,除阴性对照组外 ,其余 3组小鼠先于左侧背部皮下接种野生性EL4细胞 1× 10 6/只 ,此后第 1、7、14、2 1天分别于接种肿瘤的部位皮下注射经60 Co照射的invivo疫苗PA317/ 12、60 Co照射的NeoR空载体对照细胞PA317/N(各 1× 10 7细胞 /只)或PBS。结果显示 ,①invi vo疫苗组最终 5只(5 0 % )小鼠长期无瘤生存 ,其中 3只曾触及一过性的肿瘤结节 ,而阳性对照和NeoR空载体组的小鼠在 1个月内全部成瘤死亡 ;②部分 (3/ 5 )长期生存的invivo疫苗组小鼠能耐受野生肿瘤细胞的再次攻击 ;③invivo疫苗组形成肿瘤小鼠也有成瘤时间延迟、存活时间延长和肿瘤体积短暂减小的现象等 ,显示了疫苗治疗的疗效 ;④病理检查发现invivo疫苗组小鼠形成的肿瘤具有较完整的包膜 ,内部有大量的淋巴细胞浸润 ,血供较差等。长期生存小鼠体内未发现残留肿瘤细胞 ,而长期生存小鼠的脾细胞杀肿瘤活性明显增强。这些结果提示 ,IL 12的invivo包装疫苗可以有效治疗EL4小鼠的淋巴瘤模型 ,为IL

关键词：淋巴瘤白细胞介素12 疫苗基因疗法恶性淋巴瘤动物实验

筋膜瓣包裹组织工程骨修复兔大段骨缺损的动态变化

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第24期12卷 4672-4676页

作者：刘勇裴国献江汕梁双武赵培冉解放军第八十九医院全军骨科研究所山东省潍坊市261021 南方医科大学南方医院创伤骨科广东省广州市510515

背景:组织工程骨的血管化是构建过程中的关键环节。目的:动态观察带蒂筋膜瓣包裹组织工程骨的血管化过程,以及其修复大段骨缺损的一般规律。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-10/2006-04在南方医科大学南方医院创伤骨科实验室... 详细信息

背景:组织工程骨的血管化是构建过程中的关键环节。目的:动态观察带蒂筋膜瓣包裹组织工程骨的血管化过程,以及其修复大段骨缺损的一般规律。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-10/2006-04在南方医科大学南方医院创伤骨科实验室完成。材料:6月龄健康新西兰大白兔12只双侧髂骨抽取骨髓分离骨髓基质干细胞诱导分化成骨细胞。圆柱状(3×15)mm多孔β-磷酸三钙为法国贝奥路公司产品。方法:将成骨细胞与β-磷酸三钙复合培养7d后细胞量达到1×109L-1为组织工程骨,实验组兔左侧前肢内侧剥离带蒂筋膜瓣(2×1.5)cm包裹圆柱状组织工程骨植入1.5cm桡骨缺损处,对照组于同一只兔右侧桡骨1.5cm骨缺损处植入未包裹组织工程骨。主要观察指标:植入后2,4,6,8,12周进行大体观察、组织学、放射学、骨密度和放射性核素骨显像检测。结果:①从第4周以后各时间点实验组修复效果均优于对照组,X射线相对阻射值定量分析实验组的评分高于对照组(P<0.05),骨密度值高于对照组(P<0.05),放射性强度高于对照组(P<0.05)。②从第4周以后各个观察点实验组在血管化程度、新骨形成量、材料降解速度、骨缺损修复时间、骨修复改建质量都优于对照组。结论:采用蒂筋膜瓣包裹组织工程骨修复骨缺损,4周后,在血管化程度、新骨形成量、材料降解速度及骨缺损修复时间方面均优于无筋膜包裹的组织工程骨,提示早期的快速血管化直接影响到骨缺损修复的全过程。

关键词：组织工程骨血管化组织构建

prk基因非融合表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

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南京医科大学学报（自然科学版） 2003年第4期23卷 341-343页

作者：江汕冯振卿江千里李玉华徐玮管晓虹南京医科大学病理学教研室江苏南京210029 上海长海医院血液科上海200433 南京医科大学医学分子生物学研究所江苏南京210029

目的:构建prk基因的非融合表达载体,并诱导表达。方法:PCR扩增并回收prk基因片段,将其与亚克隆载体pMD18-T重组,通过蓝/白斑筛选、酶谱分析和序列测定鉴定出重组质粒,然后从该重组质粒上切下prk基因片段,再克隆至非融合表达载体pBV220中... 详细信息

目的:构建prk基因的非融合表达载体,并诱导表达。方法:PCR扩增并回收prk基因片段,将其与亚克隆载体pMD18-T重组,通过蓝/白斑筛选、酶谱分析和序列测定鉴定出重组质粒,然后从该重组质粒上切下prk基因片段,再克隆至非融合表达载体pBV220中,酶谱分析鉴定出正向重组质粒,诱导含有正向重组质粒的宿主菌表达蛋白,提取全菌总蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析。结果:成功构建并筛选出pBV220正向重组质粒,经热诱导表达,得到一可溶性的相对分子质量为65ku的重组蛋白。结论:pBV220-prk表达载体的成功构建和表达,说明扩增所得的基因具有正确的阅读框架,使获得天然Prk蛋白成为可能,为进一步研究prk基因的生物学功能奠定了基础。

关键词： prk基因激酶基因表达非融合蛋白

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融合蛋白诱导机体免疫的现状与思考

国外医学（寄生虫病分册） 2001年第6期28卷 256-260页

作者：江汕冯振卿管晓虹南京医科大学病理学系

融合蛋白是利用基因工程技术构建的人工蛋白,可以优化蛋白性能,甚至产生新功能。在抗肿瘤和抗寄生虫病免疫等方面具有巨大的应用前景。面对众多研究策略,本文试图从如何有效激发机体免疫,尤其是从细胞免疫角度,探讨融合蛋白的研究现状... 详细信息

融合蛋白是利用基因工程技术构建的人工蛋白,可以优化蛋白性能,甚至产生新功能。在抗肿瘤和抗寄生虫病免疫等方面具有巨大的应用前景。面对众多研究策略,本文试图从如何有效激发机体免疫,尤其是从细胞免疫角度,探讨融合蛋白的研究现状、作用机制、存在问题和可能的发展方向。

关键词：融合蛋白细胞因子抗原递呈寄生虫热休克蛋白

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组织工程骨神经化构建的组织学研究

中国矫形外科杂志 2009年第16期17卷 1246-1249页

作者：刘勇裴国献江汕姚旺祥任高宏孙新君解放军第89医院全军创伤骨科研究所山东潍坊261021 南方医科大学南方医院创伤骨科广州510515

[目的]通过观察不同神经束植入组织工程骨后组织学的变化,探讨组织工程骨神经化构建的效果。[方法]将新西兰大白兔的骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)进行诱导分化为成骨细胞,与β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β... 详细信息

[目的]通过观察不同神经束植入组织工程骨后组织学的变化,探讨组织工程骨神经化构建的效果。[方法]将新西兰大白兔的骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)进行诱导分化为成骨细胞,与β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)复合制作组织工程骨,分别将不同类型神经束植入组织工程骨,进行以下分组:A组,组织工程骨组;B组,感觉神经束植入组;C组,运动神经束植入组;D组,血管束(含有自主神经)植入组;E组,感觉、运动神经束联合植入组。分别用于修复兔股骨1.5cm大段骨缺损;各组分别在12周进行组织学的Masson染色,降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)的免疫组织化学检测,并进行统计学分析,以比较骨缺损修复情况。[结果]在观察期内,有感觉神经植入的组别和血管束植入的组别在组织学上具有明显骨化作用,而运动神经束植入却没有明显的促进作用。[结论]感觉神经束和血管束具有明显的促组织工程骨成骨作用,可以作为组织工程骨神经化构建的一种方法。

关键词：组织工程骨神经化骨缺损

骨性材料复合绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞研究体系的建立与应用

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第8期13卷 1419-1422页

作者：江汕江千里裴国献赵培冉易正山南方医科大学南方医院创伤骨科广东省广州市510515 南方医科大学南方医院血液科广东省广州市510515

背景:由于骨性生物材料和骨组织本身坚硬致密的物理特性,限制了对生长在其中的靶细胞的示踪研究。目的:针对骨性材料含钙、透光性差的特性,拟建立骨性材料复合绿色荧光蛋白基因标记的骨髓间充质干细胞的研究体系。设计、时间及地点:体... 详细信息

背景:由于骨性生物材料和骨组织本身坚硬致密的物理特性,限制了对生长在其中的靶细胞的示踪研究。目的:针对骨性材料含钙、透光性差的特性,拟建立骨性材料复合绿色荧光蛋白基因标记的骨髓间充质干细胞的研究体系。设计、时间及地点:体外观察实验,于2008-06/2009-01在南方医科大学南方医院骨与软骨再生医学重点实验室完成。材料:β-磷酸三钙多孔骨性生物支架材料(1cm×1cm×0.8cm)购自上海贝奥路生物材料有限公司。3月龄新西兰大白兔用于获取并培养骨髓间充质干细胞。方法:①骨髓间充质干细胞以携带绿色荧光蛋白的慢病毒载体标记后,接种于β-磷酸三钙骨性生物支架材料内部。②以荧光倒置显微镜观测材料中细胞的生长情况,并通过荧光定量聚合酶链反应等检测材料内部细胞的增殖情况。③以自创的半固体脱钙体系对复合细胞的材料脱钙后,制备连续冰冻切片观察;同时,采用不脱钙塑料包埋、扫描电镜等方法观察。主要观察指标:骨性材料中绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞的分布、形态及增殖情况。结果:①荧光显微镜下观察到绿色荧光细胞在材料内部生长、增殖。②普通聚合酶链反应可对材料内的绿色荧光细胞进行定性分析,荧光定量聚合酶链反应检测的Ct值和接种的绿色荧光细胞数量呈指数相关,故可以对材料中的绿色荧光细胞进行定量分析。③半固体脱钙可使骨性材料内部坚硬的钙质成分消失,而细胞所在的位置、形态和荧光不变;不脱钙塑料包埋可以原位保留细胞形态和荧光,但仅适用于小块组织;而扫描电镜观察范围有限,细胞无法保留荧光。结论:建立了可在骨性材料内部方便、直观地追踪绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞的体系,具有广泛的应用前景。关键词:骨组织工程;绿色荧光蛋白;半固体脱钙;荧光定量聚合酶链反应;

关键词：骨组织工程绿色荧光蛋白半固体脱钙荧光定量聚合酶链反应塑料包埋