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斑节对虾泛素基因PmUb的克隆及表达分析

斑节对虾泛素基因PmUb的克隆及表达分析

斑节对虾人工选育群体不同家系微卫星遗传分析

2014年中国水产学会学术年会

作者：吴松唐蕾傅明骏黄建华江世贵中国水产科学研究院南海水产研究所上海海洋大学水产与生命学院

在实验室已有的斑节对虾（Penaeus monodon）肝胰腺转录组数据中筛选出泛素基因（ubiquitin,Pm Ub）片段,通过RACE-PCR获得了Pm Ub基因的c DNA序列全长,利用生物信息学方法分析了Pm Ub的结构;利用实时定量PCR检验了Pm Ub分别在斑节对虾... 详细信息

在实验室已有的斑节对虾（Penaeus monodon）肝胰腺转录组数据中筛选出泛素基因（ubiquitin,Pm Ub）片段,通过RACE-PCR获得了Pm Ub基因的c DNA序列全长,利用生物信息学方法分析了Pm Ub的结构;利用实时定量PCR检验了Pm Ub分别在斑节对虾各组织及卵巢发育Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ期的表达情况。结果显示,Pm Ub c DNA序列全长分别390bp,编码129个氨基酸,分子量约14.7k Da,等电点9.76;它第1-72个氨基酸为高度保守的泛素结构域,存在4个磷酸化位点;预测的Pm Ub二级结构由1个α螺旋6个β折叠构成。经BLAST同源性分析表明,该基因编码蛋白与凡纳滨对虾（Solenopsis invicta）、中华绒螯蟹（Megachile rotundata）等多种节肢动物Ub有很高的同源性。实时定量PCR结果表明,Pm Ub在卵巢Ⅱ期表达量最高,在各组织表达中,在脑神经、胸神经、心脏、肝胰腺、肠、肌肉、血淋巴和卵巢中均有表达,其中肝胰腺表达量最高,肌肉、卵巢表达次之。结果表明Pm Ub在斑节对虾卵巢发育过程中可能具有重要的作用。

关键词：斑节对虾卵巢发育泛素基因克隆

来源： cnki会议评论

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斑节对虾人工选育群体不同家系微卫星遗传分析

第五届广东、湖南、江西、湖北四省动物学学术研讨会

作者：苏天凤江世贵熊小飞夏军红中国水产科学研究院水产种质资源与养殖技术重点开放实验室南海水产研究所

在南海水产研究所海南三亚通过控制交尾获得7个斑节对虾全同胞家系,每个家系取父母本以及18尾子一代共140个样品,利用微卫星标记进行家系的遗传分析和家系识别研究。从95对微卫星引物中筛选出了16对有效引物进行扩增,16对引物共检测出7... 详细信息

在南海水产研究所海南三亚通过控制交尾获得7个斑节对虾全同胞家系,每个家系取父母本以及18尾子一代共140个样品,利用微卫星标记进行家系的遗传分析和家系识别研究。从95对微卫星引物中筛选出了16对有效引物进行扩增,16对引物共检测出79条等位基因,每个位点的等位基因数为2～17个。分析比较发现DTLPM104标记可以鉴别1#和4#家系,DTLPM103标记可以鉴别3#家系,DTLPM402标记可以鉴别5#家系和6#家系,DTLPM218标记可以鉴别2#家系和7#家系,因此可以用4对微卫星标记对7个家系进行鉴别。运用TFPGA软件遗传参数分析表明各家系在每个位点的观察杂合度在0.00到1.00之间,7个家系在一些微卫星位点显著或极显著偏离Hardy—Weinberg平衡。根据微卫星数据计算各家系之间的遗传距离,构建UPGMA图表明4#和7#家系之间的遗传距离最小,相似性最高,聚合在一起。2#和6#家系之间的遗传距离最大。1#、2#、3#、4#、5#和7#家系聚合在一起,6#家系单独聚成一枝,最后再与1#、2#、3#、4#、5#和7#家系相聚。本研究表明,利用筛选得到的微卫星引物产生的DNA指纹图谱,能够有效地区分中国对虾7个家系。得到的遗传分析结果与各家系来源情况一致,进一步证明了微卫星技术在进行家系间的遗传分析中的可行性,可以利用它们进行斑节对虾的亲缘关系鉴定。

关键词：微卫星标记斑节对虾人工选育

来源： cnki会议评论

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芽孢杆菌对斑节对虾饲料表观消化率的影响

中国水产科学 2007年第6期14卷 919-925页

作者：於叶兵江世贵林黑着黄建华温为庚周发林上海200090 上海水产大学生命科学与技术学院中国水产科学研究院南海水产研究所中国水产科学研究院南海水产研究所广东广州510300

研究了斑节对虾(Penaeus monodon)饲料中添加不同剂量的芽孢杆菌制剂(Bacillus sp.,109CFU/g)对饲料干物质、粗蛋白、脂肪、磷、氨基酸和脂肪酸的表观消化率的影响。饲料1(对照组)、饲料2、饲料3、饲料4、饲料5和饲料6中芽孢杆菌制剂的... 详细信息

研究了斑节对虾(Penaeus monodon)饲料中添加不同剂量的芽孢杆菌制剂(Bacillus sp.,109CFU/g)对饲料干物质、粗蛋白、脂肪、磷、氨基酸和脂肪酸的表观消化率的影响。饲料1(对照组)、饲料2、饲料3、饲料4、饲料5和饲料6中芽孢杆菌制剂的添加量分别为0、1.0 g/kg、2.0 g/kg、3.0 g/kg、4.0 g/kg和5.0 g/kg饲料。养殖实验在室外水泥池进行,每池养虾40尾,每组实验设3个重复。以Y2O3为指示剂,添加量为0.01%,连续收集粪便20 d。6个实验组中,对饲料中各营养素的表观消化率分别为:干物质,74.35%~77.89%;粗蛋白,87.29%~89.01%;脂肪,86.46%~89.67%;磷,35.83%~44.17%;必需氨基酸,93.01%~94.04%;非必需氨基酸,91.05%~92.42%;饱和脂肪酸,86.88%~89.95%;单不饱和脂肪酸,90.39%~93.40%;多不饱和脂肪酸+高不饱和脂肪酸,87.97%~91.32%。对照组的脂肪表观消化率高于饲料2、饲料5和饲料6组,但低于饲料3和饲料4组。饲料3组的脂肪和部分脂肪酸的表观消化率最高。对照组的干物质、粗蛋白、氨基酸和磷的表观消化率最低,芽孢杆菌添加量在1.0~3.0 g/kg饲料范围内,随着芽孢杆菌添加量的增加,表观消化率逐渐上升,饲料4组的表观消化率最高,与其他组相比差异显著(P<0.05),添加量超过3.0 g/kg的各组,随着芽孢杆菌添加量的增加,表观消化率又逐渐下降。实验结果表明,在饲料中添加适量的芽孢杆菌可以显著的提高干物质、粗蛋白、氨基酸和磷的表观消化率。

关键词：芽孢杆菌斑节对虾营养素表观消化率

野生斑节对虾卵巢发育过程中不同组织的氨基酸组成

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南方水产科学 2013年第5期9卷 32-36页

作者：温为庚林黑着牛津黄建华杨其彬江世贵中国水产科学研究院南海水产研究所农业部南海渔业资源开发利用重点实验室广东广州510300

测定了海南岛南部海域野生斑节对虾(Penaeus monodon)亲虾在卵巢发育不同阶段的全虾、肝胰腺和卵巢的氨基酸组成。结果表明,在卵巢发育初级阶段(含Ⅰ期和Ⅵ期)、中级阶段(含Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期)和高级阶段(Ⅴ期)斑节对虾全虾样品中,牛磺酸... 详细信息

测定了海南岛南部海域野生斑节对虾(Penaeus monodon)亲虾在卵巢发育不同阶段的全虾、肝胰腺和卵巢的氨基酸组成。结果表明,在卵巢发育初级阶段(含Ⅰ期和Ⅵ期)、中级阶段(含Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期)和高级阶段(Ⅴ期)斑节对虾全虾样品中,牛磺酸(Tau)质量分数差异显著(P高级阶段>初级阶段;而其他的氨基酸质量分数、氨基酸总量和必需氨基酸总量略有变化,但差异不显著(P>0.05)。肝胰腺和卵巢氨基酸总量随着性腺发育逐渐上升,临产时(Ⅴ期)下降,但差异不显著(P>0.05)。中级阶段卵巢中的天门冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、脯氨酸(Pro)、酪氨酸(Tyr)和赖氨酸(Lys)等5种氨基酸质量分数处于峰值。

关键词：斑节对虾卵巢肝胰腺氨基酸组成

斑节对虾细胞周期蛋白B慢病毒载体的构建及对Hela细胞增殖影响

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南方水产科学 2014年第4期10卷 16-21页

作者：周发林黄建华邱丽华杨其彬江世贵中国水产科学研究院南海水产研究所农业部南海渔业资源开发利用重点实验室广东广州510300

细胞周期蛋白B(Cyclin B)是影响卵母细胞发育成熟的重要基因。文章构建了PmCyB慢病毒表达载体,并和慢病毒包装复合物在293T细胞中包装成慢病毒颗粒。利用包装好的慢病毒颗粒,感染干扰了Cyclin B1基因的Hela细胞,研究了PmCyB对Hela细胞... 详细信息

细胞周期蛋白B(Cyclin B)是影响卵母细胞发育成熟的重要基因。文章构建了PmCyB慢病毒表达载体,并和慢病毒包装复合物在293T细胞中包装成慢病毒颗粒。利用包装好的慢病毒颗粒,感染干扰了Cyclin B1基因的Hela细胞,研究了PmCyB对Hela细胞增殖的影响。结果表明,通过siRNA干扰细胞自身的Cyclin B1后,转染对照组病毒液的Hela细胞增殖减缓;同时,干扰后转入含有PmCyB重组慢病毒表达载体,Hela细胞增殖速度明显要高于转染对照组病毒液的Hela细胞的增殖速度。这一结果表明,PmCyB基因的过表达能补偿Cyclin B1缺失导致的细胞增殖减缓的现象,说明PmCyB基因具有细胞周期调控功能,是细胞增殖与分化的重要调控基因,且功能可能与人类的Cyclin B1相似。人类的Cyclin B1是卵母细胞发育成熟的重要基因。由此可以推断,PmCyB基因可能对斑节对虾(Penaeus monodon)卵巢发育成熟起着重要作用。

关键词：斑节对虾细胞周期蛋白B 慢病毒载体细胞增殖

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复方三氯异氰尿酸对斑节对虾幼体的毒性试验

海洋水产研究 2008年第5期29卷 54-58页

作者：温为庚杨其彬王雨黄建华江世贵中国水产科学研究院南海水产研究所热带水产研究开发中心三亚572000 中国水产科学研究院南海水产研究所广州510300

用静水试验法研究了复方三氯异氰尿酸对斑节对虾幼体的急性毒性。试验设8个浓度组和1个对照组:0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5和4.0(×10-6)每组3个平行。结果表明,24hLC50、48hLC50和安全浓度(×10-6)分别是无节幼体:1.58、1.35... 详细信息

用静水试验法研究了复方三氯异氰尿酸对斑节对虾幼体的急性毒性。试验设8个浓度组和1个对照组:0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5和4.0(×10-6)每组3个平行。结果表明,24hLC50、48hLC50和安全浓度(×10-6)分别是无节幼体:1.58、1.35和0.29;蚤状幼体:1.71、1.24和0.2;糠虾幼体:2.2、1.46和0.24;仔虾:3.23、2.62和0.53。幼体对试验药物的忍受力由大到小分别是仔虾、无节幼体、糠虾幼体和蚤状幼体。试验结果可为斑节对虾育苗安全用药提供参考。

关键词：斑节对虾幼体半致死浓度安全浓度

斑节对虾泛素融合蛋白UbS27基因克隆与表达分析

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南方水产科学 2016年第1期12卷 77-84页

作者：吴松唐蕾傅明骏杨丽诗黄建华周发林江世贵中国水产科学研究院南海水产研究所农业部南海渔业资源开发利用重点实验室广东广州510300 上海海洋大学水产与生命学院上海201306 华南农业大学动物科学学院广东广州510640

从构建的斑节对虾（Penaeus monodon）肝胰腺转录组数据中筛选出泛素核糖体融合蛋白Ub S27基因（ubiquitin/ribosomal S27 fusion protein,Pm Ub S27）片段,利用SMART-RACE技术克隆出Pm Ub S27基因c DNA全长,并利用软件对其结构进行分析... 详细信息

从构建的斑节对虾（Penaeus monodon）肝胰腺转录组数据中筛选出泛素核糖体融合蛋白Ub S27基因（ubiquitin/ribosomal S27 fusion protein,Pm Ub S27）片段,利用SMART-RACE技术克隆出Pm Ub S27基因c DNA全长,并利用软件对其结构进行分析;利用实时荧光定量技术检测Pm Ub S27基因在斑节对虾不同组织及卵巢不同发育期的表达情况。结果显示,Pm Ub S27基因c DNA全长为514 bp,开放阅读框465 bp,编码154个氨基酸,含有泛素（1~72 aa）和核糖体蛋白（101~147 aa）2个结构域。以DNA为模板克隆得到的基因序列由3个内含子和4个外显子组成。实时荧光定量结果显示,Pm Ub S27基因在斑节对虾各组织中均有表达,但是在卵巢中表达量最高,其次为肝胰腺、血淋巴和精巢。Pm Ub S27在卵巢发育前期（Ⅱ期）和成熟期（Ⅴ期）的表达量显著高于其他各期（P〈0.05）。结果表明,Pm Ub S27参与斑节对虾卵巢发育的过程并可能在卵巢发育进程中起到重要的调控作用。

关键词：斑节对虾卵巢发育泛素融合蛋白实时定量PCR

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卵形鲳鲹尾部骨骼胚后发育研究

南方水产科学 2014年第5期10卷 45-50页

作者：郑攀龙马振华郭华阳李有宁张殿昌江世贵中国水产科学研究院南海水产研究所农业部南海渔业资源开发利用重点实验室广东广州510300 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

文章采用阿利新蓝-茜素红双染色法对孵化后第1～第18天卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）仔稚鱼尾骨骨骼发育进行了系统研究。研究表明,孵化后第18天卵形鲳鲹尾部骨骼分化为尾下骨（Hy）、尾上骨（Ep）、尾下骨旁骨（Phy）及尾神经骨（Ur... 详细信息

文章采用阿利新蓝-茜素红双染色法对孵化后第1～第18天卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）仔稚鱼尾骨骨骼发育进行了系统研究。研究表明,孵化后第18天卵形鲳鲹尾部骨骼分化为尾下骨（Hy）、尾上骨（Ep）、尾下骨旁骨（Phy）及尾神经骨（Urn）。孵化后第7天,仔鱼尾部出现第1片尾下骨（Hy1）。孵化后第9天,Hy1与Hy2及Phy在尾部同时出现。孵化后第9～第15天,伴随着Hy3和Hy4的出现,脊索矿化接近尾区,同时脉棘（Mhs）和髓棘（Mns）相继出现。孵化后第15天,3片Ep已经完全分化出来。孵化后第15～第18天,Hy5在尾部分化出来,且各骨片轮廓变清晰。文章探索了卵形鲳鲹胚后发育过程中尾部骨骼发育的特征,为卵形鲳鲹骨骼发育研究奠定了基础。

关键词：卵形鲳鲹仔稚鱼尾骨发育骨骼染色

合浦珠母贝C-型凝集素基因的序列特征和功能分析

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水产学报 2011年第9期35卷 1327-1336页

作者：胡钰婷张殿昌崔淑歌郭华阳陈明强江世贵上海海洋大学水产与生命学院中国水产科学研究院南海水产研究所暨南大学生命科学技术学院

通过EST筛选结合重测序法获得合浦珠母贝一种C-型凝集素cDNA的全长序列(命名为PoLEC1)。PoLEC1全长988 bp,5’-UTR为33 bp,3’-UTR为101 bp,开放阅读框为864 bp,编码287个氨基酸,分子量为31.68 ku,理论等电点约5.83。预测的氨基酸序列... 详细信息

通过EST筛选结合重测序法获得合浦珠母贝一种C-型凝集素cDNA的全长序列(命名为PoLEC1)。PoLEC1全长988 bp,5’-UTR为33 bp,3’-UTR为101 bp,开放阅读框为864 bp,编码287个氨基酸,分子量为31.68 ku,理论等电点约5.83。预测的氨基酸序列中含有信号肽(Met1-Ser19)和糖结合位点。同源性分析结果表明,PoLEC1与其它物种C-型凝集素的的糖识别结构域序列的同源性在18.8%～28.6%,相似性在28.9%～50.0%之间。进化树分析结果表明,PoLEC1与栉孔扇贝聚为一支。组织表达分析表明,PoLEC1 mRNA在消化腺、外套膜、性腺、闭壳肌、肠、鳃和血淋巴组织均有表达,在消化腺中的表达分析表明,经溶藻弧菌刺激后2 h表达显著下调,而在4和24 h后表达显著上调。利用PoLEC1成熟肽构建原核表达载体,在大肠杆菌中进行重组表达。制备包涵体后,用IDA HisBind树脂纯化得到单一的重组蛋白,凝菌试验表明该蛋白对大肠杆菌有明显的凝集作用。

关键词：合浦珠母贝 C-型凝集素基因 RT-PCR 原核表达