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桑粒肩天牛纤维素酶的性质研究

林业科学 1996年第5期32卷 454-459页

作者：殷幼平程惊秋蒋书楠西南农业大学植保系

桑粒肩天牛（ＡｐｒｉｏｎａｇｅｒｍａｒｉＨｏｐｅ）幼虫肠道内有完整的纤维素酶系，其中以内切－β－１，４－葡聚糖酶（Ｃｘ酶）活性最强、β－１，４－葡萄糖苷酶次之，外切－β－１，４－葡聚糖酶（Ｃ１酶）最弱、测定了Ｃｘ酶和... 详细信息

桑粒肩天牛（ＡｐｒｉｏｎａｇｅｒｍａｒｉＨｏｐｅ）幼虫肠道内有完整的纤维素酶系，其中以内切－β－１，４－葡聚糖酶（Ｃｘ酶）活性最强、β－１，４－葡萄糖苷酶次之，外切－β－１，４－葡聚糖酶（Ｃ１酶）最弱、测定了Ｃｘ酶和β－１，４－葡萄糖苷酶的动力学特性以及金属离子对酶活性的影响。二者的最适作用ＰＨ值分别为４．４和５．６；最适作用温区分别为３０℃—４５℃和４５℃—５０℃；Ｃｘ酶经５０℃处理２ｈ酶活性仅下降１８．８％，而β－葡萄糖苷酶活性完全丧失。９种金属离子对纤维素酶都无明显激活作用，相反，除Ｈｇ＋＋和Ｐｂ＋＋对酶活性有强烈抑制作用外，Ｍｎ＋＋和Ｃｕ＋＋即使在０．００５ｍｏｌ／Ｌ低浓度下，对酶活性也有明显的抑制作用，这对今后开发酶抑制剂用于防治天牛等蛀干害虫，具有重要意义。

关键词：纤维素酶桑粒肩天牛动力学特性害虫

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芫菁体内斑蟊素的合成、转移和生物学功能

昆虫学报 2010年第11期53卷 1305-1313页

作者：殷幼平靳贵晓重庆大学生物工程学院重庆基因功能与调控重点实验室重庆市杀虫真菌生物农药工程技术中心重庆400030

斑蟊素是芫菁科昆虫合成的一种防御物质,已经被证实对多种癌症和其他疾病有着特殊的疗效。芫菁体内存在不同结合态的斑蟊素或斑蟊素衍生物,包括斑蟊素酸镁、斑蟊素酸钙、羟基斑蟊素、甲基斑蟊胺和脱甲斑蟊素等。不同芫菁种类、不同发育... 详细信息

斑蟊素是芫菁科昆虫合成的一种防御物质,已经被证实对多种癌症和其他疾病有着特殊的疗效。芫菁体内存在不同结合态的斑蟊素或斑蟊素衍生物,包括斑蟊素酸镁、斑蟊素酸钙、羟基斑蟊素、甲基斑蟊胺和脱甲斑蟊素等。不同芫菁种类、不同发育阶段其斑蝥素合成量有显著的差异,并且有着典型的性二型现象,性成熟的雄成虫斑蝥素含量最高可达10%。关于斑蝥素的生物合成途径以及斑蝥素在虫体内的分布,尽管有一些研究,但仍然没有定论。本文从斑蟊素在芫菁体内的含量、分布、生物合成、代谢及生物学功能等方面对国内外的研究进行概括,以期为充分发掘芫菁科昆虫资源、指导芫菁的人工养殖、合理的利用资源以及人工合成斑蟊素提供参考。

关键词：芫菁科芫菁斑蟊素分布生物合成体内转移生物学功能

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几种天牛纤维素酶的来源

林业科学 1996年第5期32卷 441-446页

作者：蒋书楠殷幼平王中康西南农业大学植保系

测定３种常见天牛：桑粒肩天牛（ＡｐｒｉｏｎａｇｅｒｍａｒｉＨｏｐｅ）、星天牛（ＡｎｏｐｌｏｐｈｏｒａｃｈｉｎｅｎｓｉｓＦｏｒｓｔｅｒ）和桔褐天牛（ＮｅｄｅｚｈｄｉｅｌｌａｃａｎｔｏｒｉＨｏｐｅ）消化道纤维素酶活性，发... 详细信息

测定３种常见天牛：桑粒肩天牛（ＡｐｒｉｏｎａｇｅｒｍａｒｉＨｏｐｅ）、星天牛（ＡｎｏｐｌｏｐｈｏｒａｃｈｉｎｅｎｓｉｓＦｏｒｓｔｅｒ）和桔褐天牛（ＮｅｄｅｚｈｄｉｅｌｌａｃａｎｔｏｒｉＨｏｐｅ）消化道纤维素酶活性，发现几种天牛幼虫均有完整的纤维素酶体系，即Ｃ１酶、Ｃｘ酶和β－葡萄糖苷酶，能真正消化利用食物中的纤维素成分；以微晶纤维素（ＭＣ）和羧甲基纤维素钠（ＣＭＣ－Ｎａ）为碳源的选择性培养基培养几种天牛肠液，未发现纤维分解真菌及能分解ＭＣ的细菌；肠道解剖及肠组织切片未发现特殊的共生菌囊及含菌细胞；比较天牛的纤维素酶与常见真菌纤维素酶的性质相差甚远。因而认为所研究的几种天牛其纤维素酶均为其自身分泌的内源性酶而不是来源于其它生物。

关键词：纤维素酶天牛

基于EMA-qPCR的茄科青枯菌活体检测技术的建立

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微生物学通报 2013年第9期40卷 1723-1732页

作者：熊书殷幼平王芳王中康 f重庆大学生命科学学院重庆市杀虫真菌生物农药工程技术中心重庆市基因功能与调控重点实验室重庆400030

【目的】利用特异性核酸染料叠氮溴乙锭(Ethidium monoazide bromide,EMA)与实时荧光定量PCR技术相结合,建立一种能有效区分青枯菌死活细胞的检测方法。【方法】样品DNA制备前经EMA渗透预处理,再进行实时荧光定量PCR特异扩增菌体DNA。... 详细信息

【目的】利用特异性核酸染料叠氮溴乙锭(Ethidium monoazide bromide,EMA)与实时荧光定量PCR技术相结合,建立一种能有效区分青枯菌死活细胞的检测方法。【方法】样品DNA制备前经EMA渗透预处理,再进行实时荧光定量PCR特异扩增菌体DNA。【结果】终浓度为2.0 mg/L的EMA能有效排除1.0×107CFU/mL灭活青枯菌细胞DNA的扩增,对活细胞和不可培养状态(Viable but non-culturable,VBNC)活菌的DNA扩增均没有影响。当每个定量PCR反应体系中的活细胞在5.0×100 5.0×104CFU范围内时,扩增Ct值与定量PCR反应体系中活细胞CFU对数值呈良好的负相关性(R2=0.992 5)。比较EMA-qPCR法和平板计数法对经过不同温度短期保存的青枯菌检测结果发现,待检样品可在24°C与4°C冷藏条件下短期保存。【结论】本研究建立的EMA-qPCR方法能有效检测青枯菌VBNC细胞和有效区分死活菌,避免或减少青枯菌PCR检测的假阳性和假阴性。

关键词：茄科青枯菌叠氮溴乙锭活的非可培养状态活体检测实时荧光定量PCR

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茎瘤芥PR4基因的克隆与表达分析

应用与环境生物学报 2013年第6期19卷 974-979页

作者：裴晓兔王中康罗远莉殷幼平重庆大学生命科学学院重庆400030

病程相关蛋白(PRs)在植物抗病过程中起着重要作用,PR4是PRs家族中参与植物系统获得抗性的重要效应因子.利用RACE技术从受十字花科根肿菌Plasmodiophora brassicae侵染的茎瘤芥中克隆到一个PR4基因,命名为BjPR4(GenBank登录号为JX467703)... 详细信息

病程相关蛋白(PRs)在植物抗病过程中起着重要作用,PR4是PRs家族中参与植物系统获得抗性的重要效应因子.利用RACE技术从受十字花科根肿菌Plasmodiophora brassicae侵染的茎瘤芥中克隆到一个PR4基因,命名为BjPR4(GenBank登录号为JX467703),BjPR4基因核苷酸序列全长584 bp,编码140个氨基酸;BjPR4蛋白具有高度保守的Barwin结构,与其它植物的PR4蛋白具有较高的相似性,系统进化分析表明该蛋白基因在不同物种之间具有保守性.BjPR4序列中没有几丁质结合域结构,所以这个基因属于Ⅱ类***-PCR检测分析显示,十字花科根肿菌处理后,BjPR4在病程初期表达量较低,病程后期表达量急剧上升;水杨酸处理后,BjPR4在短期内上调表达,12 h表达量最高,随后降低至较低水平;而茉莉酸甲酯、乙烯、脱落酸处理后该基因表达水平均下降.研究结果表明BjPR4在茎瘤芥根部的表达受到不同植物信号分子的调控,BjPR4在根肿病病程中的表达特征表明BjPR4与茎瘤芥对根肿菌的抗性有关.

关键词：芸薹根肿菌茎瘤芥病程相关蛋白4 表达分析

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蜚蠊聚集信息素的研究进展

中国媒介生物学及控制杂志 2002年第5期13卷 392-394页

作者：钟伟殷幼平西南农业大学植保系重庆北碚400716

蜚蠊是一类'准社会性'的世界性卫生害虫,与人类的关系密切.虽然人们很早就观察到了蜚蠊的聚集现象,但直到1945年Ledoux首次报道蜚蠊的聚集缘于个体间的相互吸引作用之后,才发现其聚集信息素.

关键词：蜚蠊聚集信息素研究进展合成作用机理

莱氏野村菌CQNr01微菌核的人工诱导培养

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中国农业科学 2012年第23期45卷 4801-4807页

作者：殷幼平黄姗宋章永王中康重庆大学生物工程学院/重庆市杀虫真菌农药工程技术研究中心

【目的】诱导莱氏野村菌的微菌核形成,为该菌靶标害虫的生物防治提供新的制剂类型和生产工艺。【方法】采用包含特定盐离子成分的液体培养基进行诱导培养,并对培养基中的碳﹑氮源浓度及碳氮比例进行优化;将微菌核干燥保存后复水测定菌... 详细信息

【目的】诱导莱氏野村菌的微菌核形成,为该菌靶标害虫的生物防治提供新的制剂类型和生产工艺。【方法】采用包含特定盐离子成分的液体培养基进行诱导培养,并对培养基中的碳﹑氮源浓度及碳氮比例进行优化;将微菌核干燥保存后复水测定菌核萌发率及对斜纹夜蛾幼虫的致病力。【结果】优化筛选出莱氏野村菌CQNr01微菌核诱导培养基,成功诱导莱氏野村菌菌株CQNr01产生细胞结构分化、色素沉着的微菌核结构;微菌核的产生数量受培养基中碳和氮素含量和相对比例的影响,在一定范围内,同样碳氮比情况下,低碳培养液有利于微菌核的产生。微菌核耐干燥保存,掺加硅藻土制备的微菌核制剂经干燥处理并贮存6个月吸水后仍能萌发产孢。微菌核制剂对斜纹夜蛾幼虫具有侵染活性,接种14 d后,供试昆虫的校正死亡率可达78.56%,供试浓度下,LT50约为7 d。【结论】莱氏野村菌的微菌核受特定培养基成分的诱导,获得的微菌核耐干燥且对寄主害虫具有很高的致死率,可以作为该菌生防制剂开发应用。

关键词：微菌核莱氏野村菌生防制剂斜纹夜蛾

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3种高发致病菌多重PCR快速检测方法建立

中国公共卫生 2011年第10期27卷 1335-1336页

作者：段刚吴亚玲殷幼平重庆市疾病预防控制中心微生物检测所 400042 西南药业股份有限公司重庆大学

聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）是目前最常用的病原菌分子生物学检测方法。近年来在PCR的基础上发展了多重PCR（multiplex PCR,MPCR）技术,能在同一反应体系中同时对多个目的基因片段进行检测,进一步缩短了检测时间... 详细信息

聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）是目前最常用的病原菌分子生物学检测方法。近年来在PCR的基础上发展了多重PCR（multiplex PCR,MPCR）技术,能在同一反应体系中同时对多个目的基因片段进行检测,进一步缩短了检测时间并提高了检测效率。针对重庆市病原微生物的分布情况，建立一种快速、灵敏、特异的多重PCR检测方法，对突发疫情的可疑样品，病人标本同时进行副溶血弧菌、

关键词：多重PCR 沙门菌霍乱弧菌副溶血弧菌

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斑蝥素间接竞争性ELISA检测方法的建立

免疫学杂志 2012年第6期28卷 527-529,533页

作者：钟威王中康王宇殷幼平重庆大学生物工程学院重庆杀虫真菌生物农药工程技术中心重庆市基因功能与调控重点实验室 400030

目的通过获得的斑蝥抗血清,建立快速、简便、有效的斑蝥素间接竞争ELISA检测方法。方法以合成的斑蝥素完全抗原免疫家兔,获得高效价的抗血清,通过优化条件,建立斑蝥素间接竞争ELISA检测方法的标准曲线,并设定浓度梯度,测定检测灵敏度、... 详细信息

目的通过获得的斑蝥抗血清,建立快速、简便、有效的斑蝥素间接竞争ELISA检测方法。方法以合成的斑蝥素完全抗原免疫家兔,获得高效价的抗血清,通过优化条件,建立斑蝥素间接竞争ELISA检测方法的标准曲线,并设定浓度梯度,测定检测灵敏度、检测稳定性和可靠性。结果建立的标准曲线方程为y=-13.421x+102.45,R2=0.988,检测范围为:0.1～24μg/ml。其最低检测下限为0.01μg/ml,批内和批间变异系数分别为4.27%和4.56%。结论本方法具有良好的灵敏性和可重复性,可为进一步开发斑蝥素检测试剂盒提供基础。

关键词：斑蝥素检测灵敏度检测稳定性