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作者：殷复建南京农业大学

学位级别：硕士

类固醇激素对动物的生长发育、各种生理机能的调节等各个方面均具有十分重要的作用。随着我国老龄化人群的不断增加,对衰老机制及其调节的研究也逐渐引起人们的关注;在畜牧生产中,因衰老而引起各种生理机能的改变,最终会导致动物的生产... 详细信息

类固醇激素对动物的生长发育、各种生理机能的调节等各个方面均具有十分重要的作用。随着我国老龄化人群的不断增加,对衰老机制及其调节的研究也逐渐引起人们的关注;在畜牧生产中,因衰老而引起各种生理机能的改变,最终会导致动物的生产性能大幅度下降。因此,对动物衰老问题的研究也变得越来越重要。机体因脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone, DHEA)含量的降低而导致类固醇激素水平的下降是机体自然衰老的重要因素之一。脱氢表雄酮被称为多向性的“激素缓冲剂”,在调节脂肪代谢、提高机体抗氧化和免疫能力、促进动物健康等方面均具有重要的生物学作用。染料木素(Genistein, GS)是来源于豆类植物的一种异黄酮类化合物,其生物学活性多种多样,不但与人类健康有关,且在畜牧生产中可促进动物的生长发育、提高生产性能。近年来对染料木素的抗氧化、抗肿瘤、降血脂、促进生产性等生物学机制的研究表明,染料木素发挥其生物学作用均与其具有雌激素样活性和抗雌激素样活性的双重效应有关。DHEA和GS在欧美已广泛应用于人体保健,但已有的体内、体外对DHEA和GS生物学功能的研究主要集中在成年动物上,对老年动物生理机能影响的研究甚少。因此,本试验在建立自然衰老大鼠模型基础之上,通过分析老年大鼠血清中内分泌激素含量、抗氧化酶活性、脂代谢相关生化指标及与抗氧化和脂代谢相关因子／酶基因表达的变化,揭示灌胃DHEA或GS对老年大鼠的抗氧化及脂代谢的影响,以期为促进动物的健康养殖和人类相关疾病的防控提供理论依据。 1自然衰老大鼠生理生化指标的检测本试验选用12只3月龄清洁级雄性SD大鼠为研究对象,自然条件下饲养1周后将6只大鼠进行宰杀作为阴性对照组,其余6只SD大鼠自然条件下饲喂至17个月作为阳性对照组。试验结束后,收集血清、肝脏、心脏、大脑、睾丸、肾脏等样品待测。试剂盒法检测血清、肝脏、心脏、大脑组织中的超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)活性和丙二醛(MDA)含量;放射免疫分析法检测血清中雌二醇、睾酮、胰岛素和胰高血糖素含量。荧光定量PCR法检测谷氧还蛋白(Grx)、血红素加氧酶-1(HO-1)、诱导型一氧化氮合酶(NOS2)的mRNA表达。试验结果表明,阳性对照组大鼠的肝脏、大脑、肾上腺、睾丸、附睾、胸腺的相对重量均极显著低于阴性对照组,且各主要组织器官均表现出了不同程度的生理性萎缩。血清内分泌激素结果显示,阳性对照组血清睾酮含量显著降低,胰高血糖素的含量则显著升高,但雌二醇、胰岛素的含量与阴性对照组相比则无统计学上的显著性差异。与阴性对照组相比,阳性对照组血清、肝脏、大脑、心肌组织中SOD的活性均表现出了明显的降低趋势,且肝脏、大脑组织中T-AOC活性显著降低,MDA的含量显著升高;心肌组织中HO-1mRNA相对表达量显著升高,NOS2mRNA的相对表达量显著降低,Grx mRNA的表达量有升高的趋势。该试验结果分别从组织器官的形态、神经内分泌激素含量和机体抗氧化能力等方面证实,试验所用的阳性对照组大鼠已处于衰老状态。 2脱氢表雄酮与染料木素对老年大鼠的抗氧化调节作用试验选用24只3月龄清洁级雄性SD大鼠,适应1周饲养环境后将其中6只大鼠进行宰杀作为阴性对照组(NC组),其余18只大鼠饲养至15月龄后随机分成阳性对照组(PC组)、脱氢表雄酮处理组(DHEA组)和染料木素处理组(GS组)。DHEA组、GS组分别灌胃20mg/Kg·BW和10mg/Kg·BW的DHEA和GS,PC组灌胃等体积的DMSO,试验为期8周。试验结束后采集样品,待测。试验结果显示,DHEA和GS均有延缓雄性自然衰老的大鼠体重降低的效应,且均可提高雄性大鼠的饲料利用率。组织形态学结果显示,DHEA和GS处理可部分逆转雄性大鼠部分主要脏器的生理性萎缩。与PC组相比,DHEA和GS处理组可显著提高老年大鼠血清中睾酮和雌二醇的含量;DHEA和GS处理可提高老年大鼠肝脏、心肌和大脑组织中T-AOC活性,降低心肌组织中MDA含量,但对各组织器官中SOD活性并无显著影响;DHEA处理可显著提高心肌组织中NOS2mRNA的相对表达量,但对Grx和HO-1mRNA相对表达量则无显著性影响;GS处理可显著增加心肌组织中Grx和NOS2mRNA的相对表达量,但对HO-1mRNA的相对表达量则无显著性影响。以上结果提示,DHEA和GS处理可通过调节内分泌激素的含量、抗氧化相关因子含量/活性的变化及调节衰老相关基因的表达而延缓老年大鼠自然衰老的进程。 3脱氢表雄酮与染料木素对老年大鼠的脂代谢的调节作用试验设计同上。试验结束后,收集血清、肝脏等样品,待测。试剂盒法检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),肝脏中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)的含量以及肝脏中

关键词：衰老大鼠脱氢表雄酮染料木素抗氧化脂代谢

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DHEA调节自然衰老大鼠脂代谢中的研究

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畜牧与兽医 2012年第S1期44卷 212-213页

作者：殷复建刘琳丁逍周英俏沈学怀马海田南京农业大学农业部动物生理生化重点实验室江苏南京210095

许多研究表明,DHEA有促进脂肪代谢、抗氧化等的作用。正常机体不同生理时期的DHEA的含量有所不同,DHEA在出生期含量较低,随后逐渐增加至青年期含量最高,而老年时体内DHEA的含量大约只有青年期的十分之一。为研究DHEA在自然衰老大鼠体内... 详细信息

许多研究表明,DHEA有促进脂肪代谢、抗氧化等的作用。正常机体不同生理时期的DHEA的含量有所不同,DHEA在出生期含量较低,随后逐渐增加至青年期含量最高,而老年时体内DHEA的含量大约只有青年期的十分之一。为研究DHEA在自然衰老大鼠体内脂代谢方面的作用,选用18只SD大鼠分3组进行试验,12只SD大鼠自然条件下饲喂15个月后。

关键词： DHEA 大鼠脂代谢生理时期青年期脂肪代谢胰高血糖素 AMPK 一氧化氮合酶内分泌激素

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C57BL/6小鼠感染猪链球菌2型后脾脏消减cDNA文库的构建及差异基因分析

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江苏农业科学 2012年第4期40卷 19-26页

作者：谢正露沈学怀殷复建刘琳马海田范红结南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

探讨C57BL/6品系小鼠体内猪链球菌2型感染后的差异表达基因,以期为进一步研究猪链球菌的致病机制和抗病性研究提供重要的参考依据。利用抑制性消减杂交技术构建了8周龄C57BL/6小鼠感染猪链球菌2型后的脾脏消减cDNA文库。对获得的237个... 详细信息

探讨C57BL/6品系小鼠体内猪链球菌2型感染后的差异表达基因,以期为进一步研究猪链球菌的致病机制和抗病性研究提供重要的参考依据。利用抑制性消减杂交技术构建了8周龄C57BL/6小鼠感染猪链球菌2型后的脾脏消减cDNA文库。对获得的237个阳性克隆进行测序,利用GenBank BLAST分析核酸和蛋白质同源性,共获得159条差异表达序列标签(ESTs)。试验结果证实,正向文库有34个、反向文库有30个不同的基因与ESTs具有高度的同源性,它们分别是免疫性能、细胞组分、细胞信号分子、转录因子等的重要功能基因产物。经抑制消减杂交筛选出的差异表达基因主要有免疫球蛋白IgM重链-6、胸腺素4-beta、磷酸酶张力结合蛋白、转磷酸胆碱酶、肽酰-脯氨酰-顺反式异构酶、磷脂酰丝氨酸脱羧酶、胰岛素样生长因子结合蛋白-3等基因。筛选到较多EST与抗病性相关的重要基因具有很高的同源性,且这些基因在猪链球菌2型感染后的表达具有显著差异,提示这些基因在猪链球菌2型感染过程中发挥着重要功能。

关键词： C57BL/6小鼠猪链球菌2型抑制性消减杂交差异表达基因消减cDNA文库

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脱氢表雄酮对自然衰老大鼠脂类代谢的影响

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江苏农业学报 2014年第2期30卷 355-362页

作者：周英俏殷复建丁逍马海田南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

为探讨脱氢表雄酮(DHEA)对自然衰老大鼠脂类代谢效应的机制,将18只13周龄清洁级雄性SD大鼠饲养7 d后,将其中6只大鼠宰杀作为青年组,其余12只大鼠饲养至64周龄后,随机分为衰老组和DHEA处理组。DHEA处理组灌胃20 mg/kg的DHEA溶液,衰老组... 详细信息

为探讨脱氢表雄酮(DHEA)对自然衰老大鼠脂类代谢效应的机制,将18只13周龄清洁级雄性SD大鼠饲养7 d后,将其中6只大鼠宰杀作为青年组,其余12只大鼠饲养至64周龄后,随机分为衰老组和DHEA处理组。DHEA处理组灌胃20 mg/kg的DHEA溶液,衰老组灌胃等体积的二甲基亚砜(DMSO)。试验结果显示,与青年组大鼠相比,衰老组大鼠睾丸的相对质量、血清睾酮含量均显著降低(P0.05)。表明DHEA可以降低大鼠的日均采食量,从而控制其能量的摄入;DHEA通过调节脂类代谢相关酶的活性、血清中激素含量及与肝脏脂肪酸转运和氧化相关基因的表达,从而促进脂肪的分解,减少雄性大鼠自然衰老过程中体内脂肪的沉积。

关键词：脱氢表雄酮自然衰老大鼠脂代谢

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DHEA对TM-3细胞周期的影响

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畜牧与兽医 2012年第S1期44卷 215-216页

作者：沈学怀谢正露殷复建刘琳丁逍周英俏马海田南京农业大学农业部动物生理生化重点实验室江苏南京210095

类固醇激素对于动物的生长发育有十分重要的作用。胆固醇在相关组织器官特殊酶系的作用下转化为雄激素、雌激素、孕激素等类固醇激素的过程中,脱氢表雄酮(Dehydroepiandrosterone,DHEA)作为最重要的代谢中间产物有独特的作用,因而被称... 详细信息

类固醇激素对于动物的生长发育有十分重要的作用。胆固醇在相关组织器官特殊酶系的作用下转化为雄激素、雌激素、孕激素等类固醇激素的过程中,脱氢表雄酮(Dehydroepiandrosterone,DHEA)作为最重要的代谢中间产物有独特的作用,因而被称为具有多向性的"激素缓冲剂"。有试验表明,外源性DHEA可显著提高机体血清雄激素水平。

关键词： DHEA TM-3 类固醇激素雄激素水平代谢中间产物细胞周期睾丸间质细胞脱氢表雄酮细胞生长多向性

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C57BL/6和A/J两品系小鼠脾脏消减cDNA文库的构建及差异基因分析

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中国农业科学 2012年第7期45卷 1406-1417页

作者：谢正露沈学怀刘琳殷复建马海田范红结南京农业大学动物医学院/农业部动物生理生化重点开放实验室南京农业大学动物医学院/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

【目的】检测健康C57BL/6和A/J小鼠常规免疫指标,构建脾脏消减cDNA文库并筛选差异表达基因,以探讨两品系小鼠对猪链球菌抗病性差异的分子机制。【方法】利用ELISA法检测血清常规免疫指标,抑制性消减杂交(suppression subtraction hybrid... 详细信息

【目的】检测健康C57BL/6和A/J小鼠常规免疫指标,构建脾脏消减cDNA文库并筛选差异表达基因,以探讨两品系小鼠对猪链球菌抗病性差异的分子机制。【方法】利用ELISA法检测血清常规免疫指标,抑制性消减杂交(suppression subtraction hybridization,SSH)技术构建8周龄小鼠脾脏差异表达基因的cDNA文库。【结果】试验结果表明,A/J品系小鼠血清中IgA水平明显高于C57BL/6品系小鼠(P<0.05),而血清IgG和IFN水平在两品系小鼠间均无显著差异。对筛选的149个阳性克隆进行测序,去除冗余的cDNA序列载体并聚类拼接后获得56条差异表达序列标签(ESTs)。利用Genebank的BLAST分析核酸和蛋白质同源性比较,26个不同的基因或ESTs具有高度的同源性,2条ESTs未找到同源序列。【结论】筛选到很多EST与信号转导、细胞凋亡及免疫等重要功能基因高度同源,为研究猪链球菌的致病机理和防治提供了实验依据。

关键词： C57BL/6小鼠 A/J小鼠抑制性消减杂交差异表达基因消减cDNA文库

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A/J小鼠感染猪链球菌2型后脾脏消减cDNA文库的构建及相关差异基因表达分析

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南京农业大学学报 2012年第3期35卷 94-100页

作者：谢正露沈学怀殷复建刘琳马海田范红结南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

为了分离与猪链球菌2型感染密切相关的基因,利用抑制性消减杂交(SSH)技术构建了8周龄A/J小鼠感染猪链球菌2型后的脾脏消减cDNA文库,并对其中169个阳性克隆进行测序,去除冗余的cDNA序列载体并聚类拼接后共获得110条差异表达序列标签(EST... 详细信息

为了分离与猪链球菌2型感染密切相关的基因,利用抑制性消减杂交(SSH)技术构建了8周龄A/J小鼠感染猪链球菌2型后的脾脏消减cDNA文库,并对其中169个阳性克隆进行测序,去除冗余的cDNA序列载体并聚类拼接后共获得110条差异表达序列标签(EST)。利用GenBank的BLAST软件分析比较核酸和蛋白质同源性,发现共有36个基因与这些EST具有高度的同源性,它们分别参与细胞成分、免疫、信号转导、凋亡、转录等重要功能。这些差异表达基因主要有ATP/GTP结合蛋白1(Agtpbp1)、天冬氨酸-谷氨酸-丙氨酸-天冬氨酸盒多肽5、核蛋白p68、ATP-依赖RNA解旋酶、真核生物转录因子2亚基(Eif2s2)、Na+/K+-ATP酶转运β3多肽、溶菌酶1、溶菌酶2等基因。结论:这些差异表达基因在猪链球菌2型感染过程中可能发挥重要功能。

关键词： A/J小鼠抑制性消减杂交差异表达基因消减cDNA文库

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