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I型马立克氏病毒38kD磷蛋白与Ⅱ和Ⅲ型病毒间的交叉免疫反应

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微生物学报 1994年第5期34卷 393-397页

作者：秦爱建崔治中段玉友江苏农学院畜牧兽医系扬州225001

由致病性Ⅰ型马立克氏病病毒(MDV)特异性的单克隆抗体H_(19)制备亲和层析柱,从感染重组杆状病毒BP38Ⅱ的昆虫细胞系Sf9细胞中提纯MDV的pp38基因表达产物,以此免疫小鼠制备抗血清,测定其与不同型MDV毒株感染的鸡胚成纤维细胞免疫反应性,... 详细信息

由致病性Ⅰ型马立克氏病病毒(MDV)特异性的单克隆抗体H_(19)制备亲和层析柱,从感染重组杆状病毒BP38Ⅱ的昆虫细胞系Sf9细胞中提纯MDV的pp38基因表达产物,以此免疫小鼠制备抗血清,测定其与不同型MDV毒株感染的鸡胚成纤维细胞免疫反应性,同时也用不同型MDV毒株(HVT,Z4)制备的抗血清和自然感染发病鸡血清分别与感染重组病毒的Sf9细胞进行免疫交叉反应.试验结果表明,完整的Ⅰ型MDV来源的pp38基因产物与所试Ⅱ型Z4株和Ⅲ型HVT Fc126毒株在抗原性上有显著交叉反应.这一结果表明,在Ⅱ型和Ⅲ型MDV毒株中可能存在着pp38的类似物.

关键词：马立克氏病病毒磷蛋白交叉免疫

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聚合酶链式反应技术

扬州大学学报(农业与生命科学版) 1993年第3期 24-24页

作者：段玉友崔治中江苏农学院牧医系江苏农学院牧医系扬州 225001

聚合酶链式反应(Polymcrase ChainRcaction,PCR)是用于扩增位于两端已知序列之间的DNA片段,其实质是经过反复循环,使末端被5′端限定的特异性片段呈指数形式累积。由于每次循环中合成的引物延伸产物可作为下一轮循环中的模板,因此,每次... 详细信息

聚合酶链式反应(Polymcrase ChainRcaction,PCR)是用于扩增位于两端已知序列之间的DNA片段,其实质是经过反复循环,使末端被5′端限定的特异性片段呈指数形式累积。由于每次循环中合成的引物延伸产物可作为下一轮循环中的模板,因此,每次循环中靶DNA的拷贝数

关键词： PCR 产物已知序列引物 DNA 特异性序列分析

马立克病病毒糖蛋白B抗原基因克隆的酶切分析

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同方期刊数据库

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江苏农学院学报 1992年第2期13卷 1-5页

作者：崔治中段玉友

用狄可辛标记的马立克病病毒(MDV)基因组DNA的BamHⅠ-K_3片断为探针,从建于pUC18质粒中的GA株MDV感染细胞基因组DNA的基因文库中,筛选到MDV糖蛋白B抗原基因克隆,酶切分析表明,GA株MDV的B抗原基因克隆在EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ及BamHⅠ等... 详细信息

用狄可辛标记的马立克病病毒(MDV)基因组DNA的BamHⅠ-K_3片断为探针,从建于pUC18质粒中的GA株MDV感染细胞基因组DNA的基因文库中,筛选到MDV糖蛋白B抗原基因克隆,酶切分析表明,GA株MDV的B抗原基因克隆在EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ及BamHⅠ等酶切位点的分布上与RBIB株MDV的B抗原基因没有区别。

关键词：基因克隆马立克氏病病毒抗原

用Digoxigenin标记重组质粒DNA探针特异性的改良

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江苏农学院学报 1991年第2期12卷 49-52页

作者：崔治中成国祥段玉友

鸡马立克病病毒基因组DNA的BanHI-K_3片断克隆的重组质粒DNA及从质粒上切下的经电泳和电洗脱提纯的BamHI-K_2DNA片断,在用非放射性Digoxigenin([dig])标记后,分别用作检测马立克病病毒DNA的探针。对两种探针特异性的比较表明,BamHI-K_3... 详细信息

鸡马立克病病毒基因组DNA的BanHI-K_3片断克隆的重组质粒DNA及从质粒上切下的经电泳和电洗脱提纯的BamHI-K_2DNA片断,在用非放射性Digoxigenin([dig])标记后,分别用作检测马立克病病毒DNA的探针。对两种探针特异性的比较表明,BamHI-K_3克隆的全质粒DNA探针对其它质粒来源的NDA仍表现出很强的交叉反应性,而用经电泳电洗脱提纯的BamHI-K_3DNA片断制备的探针,则仅对含同源DNA片断的质粒提取物或菌苔裂解物产生明显呈色反应,但对不含同源DNA的其它质粒DNA提取物几乎完全不呈现交叉反应。

关键词： DNA片断 DNA探针 Digoxigcnin

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兔出血症病毒形态学的研究

江苏农学院学报 1993年第3期14卷 17-23页

作者：段玉友王永坤崔治中江苏农学院牧医系扬州225001

用氯仿抽提、PEG沉淀、Scpharosc 4B柱层析、超离及蔗糖密度梯度离心等方法纯化了兔出血症病毒。电镜下观察到兔出血症病毒粒子为无囊膜,大小为32～34nm。外观呈现独特的结构。正二十面体对称,髓蕊直径15～17nm,衣壳厚8～9nm。由内、外... 详细信息

用氯仿抽提、PEG沉淀、Scpharosc 4B柱层析、超离及蔗糖密度梯度离心等方法纯化了兔出血症病毒。电镜下观察到兔出血症病毒粒子为无囊膜,大小为32～34nm。外观呈现独特的结构。正二十面体对称,髓蕊直径15～17nm,衣壳厚8～9nm。由内、外衣壳组成。外衣壳上按T=3排列着32个壳粒,壳粒呈中空的管状,长5～6nm,直径约4～5nm。中心孔径约2nm。有一环状呈不连续的内衣壳,厚2～3nm,内环上不连续每段约4nm,与壳粒相连。在5、3和2次轴对称时,病毒表面有大的、3个以上特征性的表面凹陷(Surfacc dcpression),这种表面凹陷呈一定的分布。呈五次轴对称时,病毒表周有10个向外管状突起。病毒表周不规则,表面含丰富的突起和大、小的凹陷(dcpression and small indentation)是兔出血症病毒形态学特点之一,其大小和形态,在动物病毒中比较类似于嵌杯样病毒。

关键词：兔病出血症病毒形态学

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兔瘟病毒结构蛋白的研究

江苏农学院学报 1993年第1期14卷 35-39页

作者：段玉友王永坤崔治中

本文用氯仿处理,PEG沉淀;超离,Sepharose 4B柱层析及蔗糖密度梯度离心等方法纯化了兔瘟病毒(RPeV)。电镜下观察到RPeV为无囊膜,大小为32～34nm。纯化了的RPeV通过SDS-聚丙烯酰胺连续梯度凝胶电泳进行多肽分析。发现RPeV多肽只有1条63～6... 详细信息

本文用氯仿处理,PEG沉淀;超离,Sepharose 4B柱层析及蔗糖密度梯度离心等方法纯化了兔瘟病毒(RPeV)。电镜下观察到RPeV为无囊膜,大小为32～34nm。纯化了的RPeV通过SDS-聚丙烯酰胺连续梯度凝胶电泳进行多肽分析。发现RPeV多肽只有1条63～64kd主要结构蛋白组成。用SPF兔肝粉吸收后的抗RPeV抗体作免疫转印。证明这条多肽是RPeV所特有的。

关键词：兔病兔瘟病毒结构蛋白免疫

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鹅细小病毒核酸探针的制备及应用

中国畜禽传染病 1993年第5期15卷 37-39页

作者：段玉友崔治中王永坤江苏农学院牧医系病原微生物教研室

由纯化的鹅细小病毒(即小鹅瘟病毒,GPV)提取病毒核酸,经琼脂糖凝胶电泳,在以 Lambda DNA-HindⅢ消化物作为标记时,病毒核酸条带位于4.3～6.5kb 之同。约5.0kb.由制备性凝胶电泳纯化的病毒核酸在非变性条件下同非放射性 digoxigenin 进... 详细信息

由纯化的鹅细小病毒(即小鹅瘟病毒,GPV)提取病毒核酸,经琼脂糖凝胶电泳,在以 Lambda DNA-HindⅢ消化物作为标记时,病毒核酸条带位于4.3～6.5kb 之同。约5.0kb.由制备性凝胶电泳纯化的病毒核酸在非变性条件下同非放射性 digoxigenin 进行标记而制备 DNA探针.在特异性检测中.该探针仅与小鹅瘟病毒核酸发生阳性反应,而不与正常鹅胚组织、鹅胚尿囊液、鹅肝组织、鹅肠组织及其他病毒核酸抽提物发生反应.该探针能有效地检出通过 Southern blot 和 dot blot 固定到硝酸纤维素膜上的同源 DNA(能检出0.1pg).对送检的疑患小鹅瘟的病鹅肝脏、肠及其内容物抽提的核酸检测的结果与临床诊断和荧光抗体检测的结果完成一致.整个检测过程快速、准确和方便。

关键词：鹅病细小病毒核酸探针制备

禽脑脊髓炎病毒琼扩抗原的制备及其在评价鸡群抗体水平中的应用

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中国兽医科技 1994年第7期24卷 5-7页

作者：秦爱建崔治中周阳生段玉友江苏农学院

以标准的禽脑脊髓炎（ＡＥ）病毒ＶＲ毒株和分离的野毒株分别感染ＳＰＦ鸡胚，取其病料组织制成琼脂扩散抗原。在含２０％ＮａＣｌ和０．５％苯酚的０．８％琼脂凝胶中，用这种抗原以琼脂扩散试验检测ＡＥ抗体，结果稳定，特异性强，方... 详细信息

以标准的禽脑脊髓炎（ＡＥ）病毒ＶＲ毒株和分离的野毒株分别感染ＳＰＦ鸡胚，取其病料组织制成琼脂扩散抗原。在含２０％ＮａＣｌ和０．５％苯酚的０．８％琼脂凝胶中，用这种抗原以琼脂扩散试验检测ＡＥ抗体，结果稳定，特异性强，方法简便迅速。

关键词：禽脑脊髓炎琼脂扩散试验鸡病

猪MHCⅠ类基因区基因组DNA的RFLP初步分析

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江苏农学院学报 1993年第4期14卷 39-42页

作者：段玉友王林云崔治中江苏农学院畜牧兽医系扬州225001

用4种限制性内切酶EeoRI、BamHI、HindⅢ和PstI对纯种二花脸猪和梅山猪白细胞基因组DNA进行内切酶消化和电泳,经Southcrn blot将DNA转移到NC膜上。将来源于猪MHC的Ⅰ类基因猪移植抗原(SLA)基因片段克隆PD1-A DNA(4.3kb)用digoxigcnin标... 详细信息

用4种限制性内切酶EeoRI、BamHI、HindⅢ和PstI对纯种二花脸猪和梅山猪白细胞基因组DNA进行内切酶消化和电泳,经Southcrn blot将DNA转移到NC膜上。将来源于猪MHC的Ⅰ类基因猪移植抗原(SLA)基因片段克隆PD1-A DNA(4.3kb)用digoxigcnin标记作为DNA探针,进行分子杂交反应。比较了不同品系和个体间的限制性酶切片段长度多态性(RFLP),结果表明:(1)经各种单酶消化后分子杂交反应中。产生1～5条大小不等的片段。长度范围介于9.0～1.0kb之间;(2)在使用4种酶单独消化时。1头二花脸公猪不仅与2头梅山母猪显示不同的RFLP带型,而且与2头二花脸母猪也显示完全不同的带型;(3)在使用4种酶单独消化时,2头梅山母猪表现完全相同的RFLP带型;(4)在使用 EcoRI、BamHI、Pstl 3种酶单独消化时。2头二花脸母猪呈现完全相同的RFLP带型,但在用HindⅢ酶消化时,虽然都有一条共同带,但其中1头多一条带。(5)如果比较2头梅山母猪及2头二花脸母猪,它们的基因组DNA的EcoRI和BamHI消化的带型完全一致;但它们的HindⅢ和PstI消化的带型不同,显然有一条共同的带。用SLA基因克隆PDI-A作为探针,结果表明。不仅二花脸猪的RFLP表现与梅山猪有所区别,而且似乎二花脸猪更易表现个体间差异。

关键词：猪基因组 DNA 基因多态性