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甲氧基聚乙二醇修饰几种红细胞稀有血型抗原的初步研究

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军事医学科学院院刊 2004年第2期28卷 140-142页

作者：徐华李立立檀英霞章扬培军事医学科学院野战输血研究所北京100850

目的 :研究用甲氧基聚乙二醇 (methoxypolyethyleneglycol,mPEG)修饰红细胞稀有血型抗原 ,为制备通用型血寻找可能的途径。方法 :用 3种具有不同端基的mPEG修饰红细胞 ,观察其对红细胞表面 4种稀有血型抗原的修饰效果及对红细胞结构、... 详细信息

目的 :研究用甲氧基聚乙二醇 (methoxypolyethyleneglycol,mPEG)修饰红细胞稀有血型抗原 ,为制备通用型血寻找可能的途径。方法 :用 3种具有不同端基的mPEG修饰红细胞 ,观察其对红细胞表面 4种稀有血型抗原的修饰效果及对红细胞结构、功能和存活期的影响。结果 :实验表明 ,在 1.0mmol/L时mPEG BTC(苯并三唑碳酸酯端基PEG)就可以使红细胞表面Jka,Jkb,k和P1抗原性消失 ,而对红细胞形态、渗透脆性、自身溶血、乙酰胆碱酯酶、胆固醇、ATP、2 ,3 DPG含量、变形性以及存活期无影响 ,其他 2种mPEG对红细胞修饰效果不好。结论 :mPEG BTC可有效遮蔽红细胞表面的稀有血型抗原 ,对其结构、功能及存活期无影响。

关键词：甲氧基聚乙二醇修饰稀有血型抗原红细胞

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血型转变工艺研究

中国输血杂志 2013年第9期 955-956页

作者：高红伟张雪张印则李素波檀英霞鲍国强季守平宫锋军事医学科学院野战输血研究所血液分子生物学研究室深圳市血液中心输血医学研究所

目的研究血型转变的最佳工艺包括工具酶(a-N-乙酰半乳糖胺酶和a-半乳糖苷酶)的剂量、酶解缓冲液、酶解时的红细胞压积、酶解时间、酶解温度、洗涤缓冲液及洗涤次数等参数,制备结构功能正常的通用型红细胞。方法采用对每一参数分别进行... 详细信息

目的研究血型转变的最佳工艺包括工具酶(a-N-乙酰半乳糖胺酶和a-半乳糖苷酶)的剂量、酶解缓冲液、酶解时的红细胞压积、酶解时间、酶解温度、洗涤缓冲液及洗涤次数等参数,制备结构功能正常的通用型红细胞。方法采用对每一参数分别进行优化的策略,酶解结束后通过血型鉴定和交叉配血检测酶解效果并通过检测红细胞的结构功能进行

关键词：血型转变剂量通用型红细胞用药量酶解温度半乳糖苷酶乙酰半乳糖胺

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新型糖苷酶应用于血型转变的研究

中国输血杂志 2012年第S1期25卷 67-68页

作者：高红伟李素波鲍国强张雪檀英霞王颖丽季守平宫锋军事医学科学院野战输血研究所 100850

目的通过酶解法去除红细胞表面的血型抗原(A抗原或B抗原)是制备通用型红细胞的有效方法。通用型红细胞不仅能够防止因血型不符所造成的输血事故,简化血液配型程序,及时有效的救治伤员,并且增加了缺乏高频抗原的稀有红细胞的利用率。方... 详细信息

目的通过酶解法去除红细胞表面的血型抗原(A抗原或B抗原)是制备通用型红细胞的有效方法。通用型红细胞不仅能够防止因血型不符所造成的输血事故,简化血液配型程序,及时有效的救治伤员,并且增加了缺乏高频抗原的稀有红细胞的利用率。方法通过研究新型α-N-乙酰半乳糖胺酶(A酶)和α-半乳糖苷酶(B酶)的理化性质和与红细胞的结合特性,寻找A酶、B酶均能同时发挥较大酶活性的缓冲液;并在这一缓冲液中酶解A型、B型、AB型红细胞,确定酶解各型红细胞的酶解工艺如红细胞酶解时的压积、孵育时间及温度、洗涤缓冲液及洗涤次数、红细胞保存液等;

关键词：通用型红细胞红细胞保存液糖苷酶乙酰半乳糖胺孵育时间配型缓冲液洗涤次数酶解法酶解工艺

野生型和酶活缺失型人乙酰肝素酶慢病毒表达载体的构建及其验证

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中国药理学与毒理学杂志 2019年第12期33卷 1050-1056页

作者：万禄明李素波贠志敏张雪高红伟宫锋檀英霞军事科学院军事医学研究院卫生勤务与血液研究所北京100850

目的为构建野生型和酶活缺失型人乙酰肝素酶(HPA)的慢病毒表达载体,以探讨HPA的酶活性作用和非酶活性作用。方法根据GV358慢病毒质粒载体序列和HPA基因序列设计用于无缝克隆的引物,HPA的PCR扩增产物与线性化的GV358质粒载体连接,获得重... 详细信息

目的为构建野生型和酶活缺失型人乙酰肝素酶(HPA)的慢病毒表达载体,以探讨HPA的酶活性作用和非酶活性作用。方法根据GV358慢病毒质粒载体序列和HPA基因序列设计用于无缝克隆的引物,HPA的PCR扩增产物与线性化的GV358质粒载体连接,获得重组慢病毒质粒。将经测序验证的重组慢病毒质粒与包装质粒共转染HEK-293T细胞,收取病毒感染液并感染HEL细胞,利用Western印迹法鉴定HPA过表达效果;利用流式细胞术检测细胞表面硫酸乙酰肝素(HS)的表达量;利用ELISA检测多配体蛋白聚糖1(syndecan-1)的释放量,以验证野生型和酶活缺失型HPA慢病毒表达载体的生物学效应。结果重组慢病毒质粒测序结果符合预期;Western印迹法检测结果表明,过表达HPA的HEL细胞有明显的HPA蛋白表达;流式细胞术结果显示,过表达野生型HPA的HEL细胞表面HS表达量的几何平均荧光强度(160.0±8.0)明显低于空载体对照细胞(345.0±15.2)(P<0.01);ELISA结果显示,过表达野生型HPA的HEL细胞培养基中多配体蛋白聚糖1的释放量(59.0±3.8)ng·L-1较空载体对照细胞(32.2±3.9)ng·L-1明显增多(P<0.01);而过表达酶活缺失型HPA的HEL细胞系细胞表面HS的表达量(353.0±14.0)和培养上清中多配体蛋白聚糖1的释放量(30.9±2.9)ng·L-1则与空载体对照细胞相当。结论成功构建了野生型和酶活缺失型的HPA慢病毒表达载体,并利用HEL细胞系对野生型和酶活缺失型HPA的生物学效应进行了验证,为研究HPA在机体病理生理过程中的作用机制提供了新的工具。

关键词：乙酰肝素酶酶活性慢病毒硫酸乙酰肝素多配体蛋白聚糖1

ABO血型和SARS-CoV-2易感性及COVID-19病情严重程度进展

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中国输血杂志 2022年第1期35卷 114-118页

作者：张士坤卓海龙檀英霞宫锋军事科学院军事医学研究院卫生勤务与血液研究所北京100039 解放军总医院第五医学中心

研究显示,ABO血型与严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)的易感性及疾病进展相关,其中大多数研究结果提示O血型人群易感性较低,而A血型人群具有较高的易感性并且症状较严重。ABO血型抗原是位于红细胞和组织细胞表面的寡聚糖,不同AB... 详细信息

研究显示,ABO血型与严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)的易感性及疾病进展相关,其中大多数研究结果提示O血型人群易感性较低,而A血型人群具有较高的易感性并且症状较严重。ABO血型抗原是位于红细胞和组织细胞表面的寡聚糖,不同ABO血型人群对包括SARS-CoV-2在内的多种病原体的易感性不同。关于不同血型人群对SARS-CoV-2易感性差异的机制有几种假说:1)抗-A和/或抗-B抗体(凝集素)可与病毒的相应抗原结合,阻碍靶细胞被侵染,SARS-CoV-2和/或SARS-CoV spike(S)蛋白可被抗-A等凝集素结合,阻断病毒和ACE-2受体之间的相互作用,从而阻止病毒进入肺上皮细胞;2)S蛋白结构域的受体结合区(RBD)能够与表达在呼吸道上皮的A抗原结合,促进其侵染呼吸道上皮细胞。虽然O血型者与非O血型人群相比易感性较低,而A血型人群感染风险较高且病情较重,但其相关机制有待进一步研究。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2 新型冠状病毒肺炎 ABO血型血型抗体易感性

表达人HER2/neu及荧光素酶的小鼠乳腺癌模型的建立

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军事医学 2012年第2期36卷 133-136,140页

作者：吴婷檀英霞王颖丽李素波鲍国强季守平广西医科大学南宁530021 军事医学科学院野战输血研究所北京100850

目的建立表达HER2/neu表皮生长因子受体及萤火虫荧光素酶基因的小鼠乳腺癌细胞模型。方法将重组人HER2/neu原癌基因真核表达载体与荧光素酶报告基因依次转染小鼠乳腺癌4T1细胞系,用G418与潮霉素加压筛选阳性克隆,Western印迹及活体成像... 详细信息

目的建立表达HER2/neu表皮生长因子受体及萤火虫荧光素酶基因的小鼠乳腺癌细胞模型。方法将重组人HER2/neu原癌基因真核表达载体与荧光素酶报告基因依次转染小鼠乳腺癌4T1细胞系,用G418与潮霉素加压筛选阳性克隆,Western印迹及活体成像技术鉴定HER2/neu和荧光素酶在4T1细胞中的表达。在BALB/c小鼠前肢乳腺皮下注射该细胞1.5×106个,活体成像观察肿瘤的生长及转移。结果与结论经过两步转染获得抗G418及潮霉素4T1细胞,Western印迹结果显示,该细胞高表达HER2/neu。流式细胞术检测结果提示几乎所有细胞均有GFP的表达。用该细胞株接种小鼠后具有与野生型4T1细胞相似的成瘤性和转移能力。实验结果提示,我们已建立可表达HER2/neu表皮生长因子受体及荧光素酶基因的小鼠乳腺癌细胞株,为乳腺癌的研究提供一个良好的模型。

关键词：乳腺肿瘤转染 HER2/neu 荧光素酶类,萤火虫荧光素

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体外化学修饰红细胞——通用型血?

生命科学 2004年第1期16卷 35-38页

作者：檀英霞王捷熙章扬培军事医学科学院野战输血研究所北京100850

目前国内外对通用型血的研究主要是改造修饰红细胞表面抗原。研制的方法有两种:体外酶解修饰人A、B抗原制备O型血和使用化学材料甲氧基聚乙二醇(mPEG)共价结合到红细胞表面,遮蔽血型抗原。两种修饰的结果均表明对红细胞的结构、功能无... 详细信息

目前国内外对通用型血的研究主要是改造修饰红细胞表面抗原。研制的方法有两种:体外酶解修饰人A、B抗原制备O型血和使用化学材料甲氧基聚乙二醇(mPEG)共价结合到红细胞表面,遮蔽血型抗原。两种修饰的结果均表明对红细胞的结构、功能无影响。这两种修饰方法为制备通用型血供临床输血开拓了崭新的途径,具有重要意义。

关键词：红细胞 α-半乳糖苷酶 mPEG 化学修饰通用型血

重组人α-半乳糖苷酶A在CHO细胞中的表达及鉴定

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军事医学 2011年第1期35卷 54-57页

作者：让文亮檀英霞王颖丽高红伟李素波季守平北京输血医学研究所北京100850

目的构建重组人α-半乳糖苷酶A(GLA)真核表达载体,并在中华仓鼠卵巢细胞CHO中表达重组的人GLA。方法利用RT-PCR方法从人肝癌细胞中克隆人GLA cDNA,并构建到哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1/myc-His A中。将重组质粒转染CHO细胞并用G418筛... 详细信息

目的构建重组人α-半乳糖苷酶A(GLA)真核表达载体,并在中华仓鼠卵巢细胞CHO中表达重组的人GLA。方法利用RT-PCR方法从人肝癌细胞中克隆人GLA cDNA,并构建到哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1/myc-His A中。将重组质粒转染CHO细胞并用G418筛选。用丁酸钠诱导G418抗性细胞,检测培养上清中的GLA活性,筛选高表达GLA的细胞株。采用HisTrapTMFF纯化培养上清中的GLA蛋白并利用Western印迹进行鉴定。结果成功构建了哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1/myc-His A-GLA,并在中华仓鼠卵巢细胞CHO中表达,得到高表达量的单克隆(蛋白比活为1935 U/mg)。纯化后的培养上清在50×103(Mr)附近出现单一条带,通过Western印迹确定为GLA蛋白。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1/myc-His A-GLA,获得了具有生物活性的重组人GLA,为临床上治疗法布莱病奠定了一定基础。

关键词：人α-半乳糖苷酶法布莱病 CHO细胞

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酶解法清除猪皮α-Gal抗原的研究

军事医学 2015年第12期39卷 938-940页

作者：贠志敏李素波张雪檀英霞季守平高红伟宫锋军事医学科学院野战输血研究所北京100850

目的利用脆弱拟杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶清除猪皮细胞及基质的异种抗原(α-Gal抗原),降低猪皮基质敷料的免疫原性。方法 2月龄健康无皮肤疾患的猪皮皮片,经剖层裁切成不同的规格后,分别经碘酊和75%乙醇溶液浸泡消毒,随后用PBS... 详细信息

目的利用脆弱拟杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶清除猪皮细胞及基质的异种抗原(α-Gal抗原),降低猪皮基质敷料的免疫原性。方法 2月龄健康无皮肤疾患的猪皮皮片,经剖层裁切成不同的规格后,分别经碘酊和75%乙醇溶液浸泡消毒,随后用PBS清洗后进行酶解条件的摸索;采用免疫荧光法检测猪皮的α-Gal抗原,双抗夹心ELISA法检测残留酶,通过对酶解猪皮的残留酶和α-Gal抗原的检测进而优化、改进酶解条件和洗涤条件,以确立最佳酶解工艺。结果建立了有效的酶解方法和洗涤方法,酶解后猪皮的α-Gal抗原清除率>90%,残留酶不能检出(间接ELISA法检测微量α-半乳糖苷酶的下限为1 ng/ml)。结论所建立的酶解工艺和洗涤工艺可有效清除猪皮细胞及基质的α-Gal抗原,建立了制备低免疫原性猪皮敷料的方法。

关键词：猪皮免疫原性 α-半乳糖苷酶 α-Gal抗原残留酶