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甲氧基聚乙二醇(mPEG)修饰遮蔽人ABO血型抗原

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中国生物化学与分子生物学报 2004年第5期20卷 653-658页

作者：王捷熙檀英霞李立立白燕章扬培军事医学科学院野战输血研究所北京100850 解放军307医院输血科北京100039

输血是一种非常有效的临床治疗手段 ,但血型不符会造成输血死亡事故 .为了解决输血中存在的血型匹配困难等问题 ,使用甲氧基聚乙二醇 (mPEG)化学修饰法 ,对红细胞表面的血型抗原进行化学修饰 ,从而达到遮蔽红细胞血型抗原的目的 .通过对... 详细信息

输血是一种非常有效的临床治疗手段 ,但血型不符会造成输血死亡事故 .为了解决输血中存在的血型匹配困难等问题 ,使用甲氧基聚乙二醇 (mPEG)化学修饰法 ,对红细胞表面的血型抗原进行化学修饰 ,从而达到遮蔽红细胞血型抗原的目的 .通过对mPEG BTC、mPEG ALD和mPEG 2 NHS三种mPEG衍生物对红细胞A抗原和B抗原修饰效果的比较 ,结果表明mPEG BTC修饰效果最好 ,可以完全遮蔽红细胞的A抗原和B抗原 ,使修饰后的A型、B型和AB型红细胞呈现出与O型红细胞相同的血型血清学特征 ;进一步研究证明 ,mPEG BTC与红细胞结合牢固 ,对红细胞结构、功能、变形能力、常规指标和沉降率等基本没有影响 .初步实现了A→O ,B→O和AB→O的血型改造 ,从而为临床输血治疗遇到的偏型、稀有血型、配型困难等问题的解决 ,提供了新的技术方法与思路 .

关键词：化学修饰甲氧基聚乙二醇(mPEG) 红细胞血型抗原

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肾类器官血管化研究进展

中国药理学与毒理学杂志 2024年第8期38卷 633-640页

作者：刘鹤岳亮吴成君檀英霞大连理工大学医学部生物医学工程学院辽宁大连116000 军事医学研究院北京100850

肾类器官是利用人多能干细胞或组织来源的成体干细胞诱导分化形成主要包含肾小管结构的类器官,由于缺乏血管网络的支持,其组织结构不成熟和生长受限,如何实现肾类器官的血管化是该领域亟待解决的难题。目前,免疫缺陷动物移植、改变诱导... 详细信息

肾类器官是利用人多能干细胞或组织来源的成体干细胞诱导分化形成主要包含肾小管结构的类器官,由于缺乏血管网络的支持,其组织结构不成熟和生长受限,如何实现肾类器官的血管化是该领域亟待解决的难题。目前,免疫缺陷动物移植、改变诱导分化方案、微流控芯片及调整细胞外基质和氧气浓度等方法可促进肾类器官血管化,为肾类器官科学研究及其临床应用提供了新的研究视角。

关键词：肾类器官血管化微流控异种移植细胞外基质

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人肺类器官用于肺结核病研究进展及前景

中国药理学与毒理学杂志 2022年第8期36卷 612-618页

作者：钟鹏飞保鹏涛檀英霞军事科学院军事医学研究院卫生勤务与血液研究所北京100089 河北北方学院研究生院河北张家口075000 解放军总医院第八医学中心呼吸与危重症医学科北京100089

结核病是一种由结核分枝杆菌(MTB)引起的传播范围极广的细菌感染性疾病,是主要的致死性传染病之一。传统细胞和动物模型为结核病研究作出了很大贡献,但两者均不能准确模拟人体的生理学过程,在结核病病理研究和药物筛选方面具有许多局限... 详细信息

结核病是一种由结核分枝杆菌(MTB)引起的传播范围极广的细菌感染性疾病,是主要的致死性传染病之一。传统细胞和动物模型为结核病研究作出了很大贡献,但两者均不能准确模拟人体的生理学过程,在结核病病理研究和药物筛选方面具有许多局限性。类器官作为一种新的研究模型,能够模拟和高度复制源器官的结构和功能,在生物医学领域具有重要的应用前景。人多能干细胞和成体干细胞衍生的人肺类器官已用于多种感染性呼吸系统疾病的研究,特别是在肺结核病研究方面揭开了体外研究的新篇章,在3D水平上揭示了感染早期MTB在宿主体内的适应性、细胞嗜性和宿主反应。人肺类器官模型在构建肉芽肿模型、肺结核病机制研究、共病研究和抗结核药物筛选等方面亦可能具有很好的应用前景,值得进一步探索。

关键词：多能干细胞肺类器官结核分枝杆菌肺结核模型

甲氧基聚乙二醇修饰改造RhD(+)血型的初步研究

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中国实验血液学杂志 2003年第6期11卷 654-658页

作者：李立立王捷熙檀英霞章扬培军事医学科学院输血研究所北京100850

Rh血型与ABO血型一样是重要的血型系统 ,Rh血型不符会引起严重的输血反应及新生儿溶血病。中国人群中RhD阴性血型的比例仅为 0 .2 % - 0 .5 % ,将RhD阳性红细胞改造成RhD阴性红细胞在临床输血中有重要的意义。本研究用 4种不同端基的甲... 详细信息

Rh血型与ABO血型一样是重要的血型系统 ,Rh血型不符会引起严重的输血反应及新生儿溶血病。中国人群中RhD阴性血型的比例仅为 0 .2 % - 0 .5 % ,将RhD阳性红细胞改造成RhD阴性红细胞在临床输血中有重要的意义。本研究用 4种不同端基的甲氧基聚乙二醇 (mPEG) ,修饰A型、B型、AB型和O型的RhD( + )红细胞 ,比较 4种mPEG衍生物对RhD抗原的修饰效果。同时观察mPEG修饰对红细胞形态、结构和功能的影响。结果表明 ,mPEG BTC(苯并三唑端基PEG)较其他 3种PEG的修饰效果好 ,在 1mmol/L时可以有效地遮蔽红细胞表面RhD抗原 ,而对红细胞形态、渗透脆性、自身溶血、乙酰胆碱酯酶、胆固醇、ATP、2 ,3 DPG含量以及变形性无影响。结论 :初步实现了将RhD( + )红细胞修饰改造成RhD( - )红细胞的目的。

关键词：甲氧基聚乙二醇 RhD血型输血反应新生儿溶血病 ABO血型

猪血人源化改造——酶解清除猪红细胞α-Gal抗原

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科学通报 2003年第2期48卷 174-176页

作者：王捷熙高新任会明檀英霞章扬培白燕军事医学科学院野战输血研究所北京100850 解放军307医院输血科北京100039

猪红细胞(pRBC)是人红细胞的理想替代品,但pRBC表面有异种抗原——α-Gal抗原(Galα1,3Galβ1,4GalNAc-Ra),人血清中含有天然存在的抗α-Gal抗原的抗体,pRBC的α-Gal抗原会引起猪→人异种输血的急性临床输血反应.因此要消除种间的免疫排... 详细信息

猪红细胞(pRBC)是人红细胞的理想替代品,但pRBC表面有异种抗原——α-Gal抗原(Galα1,3Galβ1,4GalNAc-Ra),人血清中含有天然存在的抗α-Gal抗原的抗体,pRBC的α-Gal抗原会引起猪→人异种输血的急性临床输血反应.因此要消除种间的免疫排斥,首先要清除pRBC表面的α-Gal抗原.实验使用基因重组的大豆α-半乳糖苷酶(rSα-GalE)切除α-Gal抗原的末端α-Gal残基,对pRBC表面的α-Gal抗原进行人源化改造.结果表明,rSα-GalE能清除pRBC表面的α-Gal抗原,减缓种间的急性输血反应,经适当浓度的rSα-GalE酶解后,pRBC的结构、功能和形态均正常.

关键词：猪血人源化改造猪红细胞 α-Gal抗原种间免疫排斥基因重组大豆α-半乳糖苷酶异种输血

联合转导人α1,3-半乳糖苷酶和α1,2-岩藻糖转移酶基因清除猪细胞表面异种抗原

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科学通报 2005年第22期50卷 2484-2488页

作者：宫锋章扬培贾延军王颖丽檀英霞田曙光北京输血研究所北京100850

猪细胞表面Galα1-3Galβ1-4GluNAc-R结构(称为αGal表位)是引起异种器官移植超急性排斥反应的主要原因,被称为主要异种抗原,由α1,3-半乳糖转移酶生成.α1,3-半乳糖苷酶特异性地水解αGal表位末端半乳糖,可清除这种主要异种抗原;α1,2... 详细信息

猪细胞表面Galα1-3Galβ1-4GluNAc-R结构(称为αGal表位)是引起异种器官移植超急性排斥反应的主要原因,被称为主要异种抗原,由α1,3-半乳糖转移酶生成.α1,3-半乳糖苷酶特异性地水解αGal表位末端半乳糖,可清除这种主要异种抗原;α1,2-岩藻糖转移酶与α1,3-半乳糖转移酶竞争底物的作用也可使Galα1,3-Gal的生成量降低并阻止α1,3-半乳糖苷酶水解的产物重新生成Galα1,3-Gal,也具有清除主要异种抗原的作用.以猪胚胎成纤维细胞为靶细胞,联合转导人α1,3-半乳糖苷酶和α1,2-岩藻糖转移酶基因,获得的转基因细胞异种抗原清除率达84%,转基因细胞染色体数目和形态正常,为进一步获得低αGal抗原的体细胞克隆猪奠定了基础.

关键词：异种器官移植 αGal抗原 α1-3半乳糖苷酶 α1-2岩藻糖转移酶

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mPEG修饰红细胞Rh抗原稳定性的研究

中国实验血液学杂志 2006年第5期14卷 1020-1023页

作者：邱艳查袆檀英霞章扬培北京红十字血液中心北京100088 军事医学科学院野战输血研究所北京100850

本研究旨在探究mPEG修饰的红细胞Rh抗原的稳定性。利用红细胞膜蛋白SDS-PAGE电泳技术分析mPEG修饰后红细胞膜蛋白与mPEG结合情况,用红细胞血影凝集实验及4℃CPD保养液保存的修饰红细胞与匹配血液体外混血实验,观察mPEG修饰后红细胞Rh抗... 详细信息

本研究旨在探究mPEG修饰的红细胞Rh抗原的稳定性。利用红细胞膜蛋白SDS-PAGE电泳技术分析mPEG修饰后红细胞膜蛋白与mPEG结合情况,用红细胞血影凝集实验及4℃CPD保养液保存的修饰红细胞与匹配血液体外混血实验,观察mPEG修饰后红细胞Rh抗原被遮蔽的稳定性。结果发现:不同保存时间的mPEG修饰的红细胞在模拟输血(即混血前后)的血型保持不变,同时mPEG修饰的红细胞在保存过程中游离血红蛋白水平正常,并且混血后经37℃孵育的mPEG修饰的红细胞游离血红蛋白水平低于不混合的修饰的红细胞。比较分析PEG特异的碘染和考马斯亮蓝染的显色图谱发现,特殊的碘染显示出mPEG与红细胞膜蛋白结合的条带,mPEG-SPA与红细胞膜蛋白结合后导致蛋白分子迁移速度发生改变。mPEG修饰的红细胞血影凝集实验证实,修饰红细胞在质膜裂损后mPEG仍有效地遮蔽抗原。结论:mPEG-SPA不论在红细胞膜蛋白被单独提取后,还是膜破损后以及存活状态下,均能与红细胞膜蛋白稳固结合。

关键词： mPEG修饰红细胞 Rh抗原红细胞

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建立人/猪造血嵌合体模型的初步探讨

中国实验血液学杂志 2005年第4期13卷 673-676页

作者：檀英霞王捷熙李明章扬培军事医学科学院野战输血研究所血液生化与分子生物学研究室北京100850 北京市SPF猪育种中心北京100095

本研究目的是利用免疫系统尚未成熟的胎猪和新生猪作为人脐血造血干细胞(HSC)的移植受者,建立人/猪造血嵌合体模型,初步探讨在猪体内扩增HSC的可行性。在无菌隔离器中,通过肌肉或脐静脉(剖子宫)给胎猪移植人脐血细胞,或在断脐前通过脐... 详细信息

本研究目的是利用免疫系统尚未成熟的胎猪和新生猪作为人脐血造血干细胞(HSC)的移植受者,建立人/猪造血嵌合体模型,初步探讨在猪体内扩增HSC的可行性。在无菌隔离器中,通过肌肉或脐静脉(剖子宫)给胎猪移植人脐血细胞,或在断脐前通过脐静脉给新生猪移植人脐血细胞,应用流式细胞术检测移植组猪外周血中人CD45+细胞。结果表明:移植后,受试猪生长发育与对照猪一致;移植后60天时,用流式细胞术在猪的外周血中检测到一定比例的人源细胞。结论:胎猪或新生猪能耐受一定量的人源抗原的植入,建立人/猪造血嵌合体模型是可行的。

关键词：脐血造血干细胞异种移植人/猪造血嵌合体

新型酪氨酸激酶抑制剂B-1对U251胶质瘤细胞存活和凋亡的影响

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中国药理学与毒理学杂志 2016年第8期30卷 833-838页

作者：杨媛媛王康敏张士坤宋锦文檀英霞李素波高红伟季守平宫锋军事医学科学院野战输血研究所北京100850 成都知普莱生物医药科技有限公司四川成都610000

目的探讨GNF-5837修饰改造而合成的神经生长因子受体酪氨酸激酶A(Trk A)抑制剂B-1对胶质瘤U251细胞存活和凋亡的影响,为恶性胶质瘤治疗提供新的思路。方法 B-1和GNF-5837 1.0×10-11~1.0×103mol·L^(-1)分别与Trk A激酶作用1 h,ADP-Glo... 详细信息

目的探讨GNF-5837修饰改造而合成的神经生长因子受体酪氨酸激酶A(Trk A)抑制剂B-1对胶质瘤U251细胞存活和凋亡的影响,为恶性胶质瘤治疗提供新的思路。方法 B-1和GNF-5837 1.0×10-11~1.0×103mol·L^(-1)分别与Trk A激酶作用1 h,ADP-Glo?激酶检测法测定Trk A活性;MTT法检测胶质瘤U251细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)存活率;直接计数法检测胶质瘤U251细胞集落形成;流式细胞仪检测胶质瘤U251细胞凋亡率;Western蛋白印迹法检测BAD、BCL-2和胱天蛋白酶原3蛋白表达水平。结果B-1和GNF-5837对Trk A活性的抑制作用相近,IC_(50)值分别为4.7±1.0和(4.3±1.7)nmol·L^(-1);B-1可浓度依赖性抑制胶质瘤U251细胞的存活(r=0.968,P<0.01),14μmol·L^(-1)时存活率降到50%;且B-1对HUVEC的IC_(50)约为31μmol·L^(-1),高于GNF-5837的IC_(50)13μmol·L^(-1);B-1浓度依赖性抑制U251细胞集落形成能力(r=0.959,P<0.05);与细胞对照组相比,B-1 10~40μmol·L^(-1)作用72 h后U251细胞的凋亡率升高(P<0.01);U251细胞内促凋亡蛋白BAD水平显著上升(P<0.01),而抗凋亡蛋白BCL-2和胱天蛋白酶原3表达水平降低(P<0.01)。结论 B-1能抑制胶质瘤U251细胞存活,其机制与B-1通过抑制Trk活性及下游信号通路,降低抗凋亡蛋白水平的同时增加促凋亡蛋白水平,最终诱导其凋亡有关。

关键词：酪氨酸激酶抑制剂 B-1 细胞,U251 细胞增殖细胞凋亡