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根癌农杆菌介导的虎杖茎尖转化研究

生物技术通报 2014年第2期30卷 79-84页

作者：柳忠玉赵树进长江大学生命科学学院荆州434025 广州军区广州总医院广州510010

为了建立根癌农杆菌介导的虎杖茎尖遗传转化体系,以虎杖的茎尖为转化受体,研究了携带白藜芦醇合酶基因(PcRS)的根癌农杆菌载体介导的虎杖遗传转化若干因素对转化效果的影响。结果显示,较适宜的转化系统为预培养2 d,农杆菌菌液(OD600值为... 详细信息

为了建立根癌农杆菌介导的虎杖茎尖遗传转化体系,以虎杖的茎尖为转化受体,研究了携带白藜芦醇合酶基因(PcRS)的根癌农杆菌载体介导的虎杖遗传转化若干因素对转化效果的影响。结果显示,较适宜的转化系统为预培养2 d,农杆菌菌液(OD600值为0.6)侵染10 min,共培养3 d,在含8 mg/L潮霉素的培养基上诱导不定芽。利用该体系从300块茎尖外植体中共转化获得15株抗性再生植株,经PCR和Southern杂交检测,有6株虎杖的基因组中已整合进了目的基因。

关键词：虎杖茎尖根癌农杆菌遗传转化

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转PcRS基因拟南芥的抗炭疽病研究

生物技术通报 2014年第10期30卷 107-112页

作者：柳忠玉赵树进长江大学生命科学学院荆州434025 广州军区广州总医院广州510010

为确定虎杖(Polygonum cuspidatum *** Zucc.)白藜芦醇合酶基因PcRS(Polygonum cuspidatum resveratrol synthase)提高植物抗病性的有效性,以转PcRS基因拟南芥为材料,对其进行了分子鉴定和抗炭疽病(Colletotrichum higginsianum)研究。利用Southern blot和Northern blot验证了外源PcRS基因在转基因拟南芥基因组中的整合和表达。对经过选育得到的T3代纯合株系进行离体的抗病性试验。转基因拟南芥甲醇提取物对炭疽病菌具有明显抑制作用。进一步采用点滴法接种生长4周的转基因拟南芥离体叶片,与野生型植株相比,转基因植株叶片坏死斑直径和坏死斑上的孢子数目都显著减少,表明转基因拟南芥通过抑制孢子的繁殖来限制炭疽病菌的定植,从而提高转基因植株对炭疽病的抗性。

关键词：虎杖白藜芦醇合酶转基因拟南芥炭疽菌抗病性

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虎杖白藜芦醇合酶基因转化拟南芥的研究

华南理工大学学报（自然科学版） 2011年第5期39卷 138-142页

作者：柳忠玉庄楚雄生书晶邵利赵树进华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510006 华南农业大学生命科学学院广东广州510642 广州军区广州总医院广东广州510010

为验证虎杖白藜芦醇合酶基因PcRS在转基因植物中合成白藜芦醇的有效性,构建了植物表达载体pCAM1380-35S-PcRS,通过农杆菌介导,利用花序浸泡法转化拟南芥.转化子在含有潮霉素的培养基上经筛选后,利用PCR和Southern杂交技术检测,进一步证... 详细信息

为验证虎杖白藜芦醇合酶基因PcRS在转基因植物中合成白藜芦醇的有效性,构建了植物表达载体pCAM1380-35S-PcRS,通过农杆菌介导,利用花序浸泡法转化拟南芥.转化子在含有潮霉素的培养基上经筛选后,利用PCR和Southern杂交技术检测,进一步证实PcRS基因已整合到拟南芥基因组.经过选育得到了遗传稳定的T3代纯合子转基因拟南芥株系.Northern杂交证实外源基因在转基因拟南芥纯合子株系中实现表达,并且通过HPLC法检测到终产物是反式白藜芦醇苷.两周大拟南芥幼苗产生的反式白藜芦醇苷为136μg/g(鲜重),干重为1813μg/g.

关键词：虎杖白藜芦醇合酶转基因拟南芥白藜芦醇白藜芦醇苷

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转PcRS基因拟南芥植株表型分析

广东农业科学 2014年第24期41卷 134-137,I0002页

作者：柳忠玉赵树进长江大学生命科学学院湖北荆州434025 广州军区广州总医院广东广州510010

为了研究虎杖(Polygonum cuspidatum *** Zucc.)白藜芦醇合酶基因Pc RS的功能,以转Pc RS基因拟南芥为材料,对其进行分子鉴定和表型研究。利用Southern blot和Northern blot验证了外源Pc RS基因在转基因拟南芥基因组中的整合和表达。对... 详细信息

为了研究虎杖(Polygonum cuspidatum *** Zucc.)白藜芦醇合酶基因Pc RS的功能,以转Pc RS基因拟南芥为材料,对其进行分子鉴定和表型研究。利用Southern blot和Northern blot验证了外源Pc RS基因在转基因拟南芥基因组中的整合和表达。对经过选育得到的T3代纯合株系(L4、L6、L15)进行性状观察。在体视显微镜下观察野生型和转基因拟南芥植株表型;采用分光光度法测定低氮培养基上的子叶花青素含量。结果显示,与野生型拟南芥相比,转基因拟南芥的种皮颜色发生改变呈浅黄褐色,并且子叶中花青素含量显著减少。这表明Pc RS基因可能导致转基因拟南芥的黄酮类物质合成受阻。

关键词：虎杖白藜芦醇合酶转基因拟南芥花青素种皮

利用荧光定量PCR技术快速检测转基因产品的研究

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食品工业科技 2006年第1期27卷 193-195页

作者：白卫滨黄亚东柳忠玉赵文苏志坚暨南大学医药生物技术研究开发中心广东广州510630

针对转基因植物普遍含有的35S启动子进行了通用引物和Tapman荧光探针的设计合成,利用荧光定量PCRfluorescencequantitativepolymerasechainreactionFQ-PCR技术对转基因大豆、玉米和辣椒进行非特异性检测,结果显示出转基因样本有阳性扩... 详细信息

针对转基因植物普遍含有的35S启动子进行了通用引物和Tapman荧光探针的设计合成,利用荧光定量PCRfluorescencequantitativepolymerasechainreactionFQ-PCR技术对转基因大豆、玉米和辣椒进行非特异性检测,结果显示出转基因样本有阳性扩增条带,非转基因样本呈现阴性。实验表明,荧光定量PCR检测较普通的检测方法具有高效、准确的特点,在转基因产品的分析检测方面提供了一个实用的方法。

关键词：转基因植物检测荧光定量PCR

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TAC载体介导温敏不育水稻的遗传转化

华南农业大学学报 2005年第3期26卷 52-55页

作者：姜大刚付晓柳忠玉庄楚雄华南农业大学生命科学学院广东广州510642

选用两系杂交稻的母本———温敏不育系籼稻Oryzasativa品种安农S1、安湘S和香125S为试验材料,对这3个品种的组织培养特性进行了研究.结果表明:香125S的胚性愈伤组织最容易形成,状态也最好.以含有50kb水稻基因组片段的TAC27克隆(GLA40)... 详细信息

选用两系杂交稻的母本———温敏不育系籼稻Oryzasativa品种安农S1、安湘S和香125S为试验材料,对这3个品种的组织培养特性进行了研究.结果表明:香125S的胚性愈伤组织最容易形成,状态也最好.以含有50kb水稻基因组片段的TAC27克隆(GLA40)和农杆菌Agrobacteriumtumefaciens菌株LBA4404组合,转化水稻胚性愈伤组织,获得了大量转化苗,通过潮霉素溶液浸泡试验,全部转化苗均表现抗性;PCR检测,证明TAC27所携带的50kb的外源片段已经完整地整合到水稻基因组上.

关键词：水稻温敏不育系愈伤组织转化

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红曲大豆花生豆瓣酱的制作工艺

中国调味品 2017年第5期42卷 69-71页

作者：宋淑芬柳忠玉马立安长江大学生命科学学院湖北荆州434025 长江大学荆楚特色食品研发中心湖北荆州434025

制备好需要的大豆曲、花生曲、豆瓣曲及红曲霉、米曲酶麸曲,然后制定单因素混合酱筛选的项目进行试验,再制定评分标准,筛选出风味最好的酱,以满足消费者的需求。

关键词：红曲大豆花生豆瓣酱

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几个温敏不育水稻品种组织培养特性的研究

种子 2005年第4期24卷 9-11,15页

作者：姜大刚付晓柳忠玉庄楚雄华南农业大学生命科学学院广州510642

以我国特有的温敏不育系籼稻品种安农S 1,及其转育的不育系安湘S和香125S为实验材料,对愈伤组织的诱导、继代和再生体系的建立进行了研究。结果表明:不同水稻品种和不同的外植体种类愈伤组织的诱导存在比较明显的差别:对成熟种子来说,安... 详细信息

以我国特有的温敏不育系籼稻品种安农S 1,及其转育的不育系安湘S和香125S为实验材料,对愈伤组织的诱导、继代和再生体系的建立进行了研究。结果表明:不同水稻品种和不同的外植体种类愈伤组织的诱导存在比较明显的差别:对成熟种子来说,安农S 1的愈伤组织诱导率最高;而对幼胚而言,香125S的诱导率最高。不同的水稻品种所适用的培养基不同,形成的愈伤组织的状态也存在差别,香125S所适用的培养基种类比较广泛,形成的胚性愈伤组织状态最好,也最容易形成。在愈伤组织的分化阶段,添加3mg/L6 BA+1mg/LNAA分化成苗率最高;随继代时间的延长,愈伤组织的再生率下降,形成的幼苗的状态也存在明显的差别。

关键词：水稻品种培养特性愈伤组织诱导率安农S-1 温敏不育系籼稻品种实验材料再生体系成熟种子组织状态胚性愈伤分化阶段继代时间培养基安湘S 差别外植体成苗率 NAA 再生率适用转育幼胚添加幼苗

GST-SUMO-MT融合蛋白在大肠杆菌中的自诱导表达

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生物技术通报 2016年第2期32卷 219-224页

作者：彭冬杨威王昭王席柳忠玉长江大学生命科学学院荆州434025

旨在考察在大肠杆菌中自诱导表达GST-SUMO-MT融合蛋白的可行性,并对自诱导培养条件及培养基成分进行优化,以提高蛋白产量。采用摇瓶培养,利用单因素和正交实验对工程菌自诱导的培养条件(诱导时间、诱导温度)和培养基组分(蛋白胨、酵母... 详细信息

旨在考察在大肠杆菌中自诱导表达GST-SUMO-MT融合蛋白的可行性,并对自诱导培养条件及培养基成分进行优化,以提高蛋白产量。采用摇瓶培养,利用单因素和正交实验对工程菌自诱导的培养条件(诱导时间、诱导温度)和培养基组分(蛋白胨、酵母粉、甘油、葡萄糖、乳糖)进行优化,检测菌体浓度、可溶性目的蛋白的表达量。结果表明,自诱导培养基碳氮源的最优配比为:2%蛋白胨、2%酵母粉、0.3%甘油、0.05%葡萄糖和0.3%乳糖。重组菌自诱导表达最优发酵条件为:采用两阶段温度控制,37℃培养3 h,25℃继续培养13 h。此时可溶性目的蛋白的表达量和菌体浓度分别为LB培养基(IPTG诱导)的2.2倍和2.3倍。

关键词：金属硫蛋白融合蛋白可溶性表达自诱导