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作者：柯法钧江西农业大学

学位级别：硕士

呋喃唑酮药物因其良好的抗菌作用和促进动物生长的功能曾被广泛使用于动物养殖过程中,因原药及其代谢物均有致癌性,我国欧盟等许多国家均已禁止在动物养殖过程中添加使用,但因其药物效果好,受经济利益驱使,目前非法使用现象仍时有发生... 详细信息

呋喃唑酮药物因其良好的抗菌作用和促进动物生长的功能曾被广泛使用于动物养殖过程中,因原药及其代谢物均有致癌性,我国欧盟等许多国家均已禁止在动物养殖过程中添加使用,但因其药物效果好,受经济利益驱使,目前非法使用现象仍时有发生进而威胁着国民的身体健康,同时影响了我国动物源性食品的进出口贸易,因此对呋喃唑酮及其代谢物的监控就显得十分紧迫和必要,呋喃唑酮原药在体内代谢迅速,而其代谢物AOZ却能在动物体内存在数星期之久,因此药残监测部门通常将其代谢物AOZ作为监测呋喃唑酮药物残留的靶标检测物。传统的AOZ残留仪器分析法虽然准确度和灵敏度高,但需要昂贵的仪器设备和专业操作人员,随着我国经济的快速发展,此类方法已难以满足高通量、快速、在线检测的需要,基于此,迫切需要一种灵敏度高、适合现场筛选、简单、快速、成本低的新型检测技术,而免疫分析方法的快速发展恰好满足上述检测的新要求。本论文针对以上问题,利用免疫分析技术的优势,主要开展了呋喃唑酮代谢物AOZ衍生物单克隆抗体的制备研究。主要研究内容及结果如下:（1）AOZ衍生物人工抗原的合成以呋喃唑酮代谢物AOZ为研究对象,通过偶联不同结构的手臂改变整个半抗原体系的电子得失,进行一系列的反应合成得到了3种AOZ衍生物半抗原。合成的AOZ衍生物半抗原结构都经过了核磁共振氢谱鉴定,在此基础上通过碳二亚胺盐酸盐法将以上AOZ衍生物半抗原与牛血清蛋白（BSA）偶联制备了CPAOZ1-BSA、CPAOZ2-BSA和CPAOZ3-BSA三种完全免疫抗原,与卵清白蛋白（OVA）偶联制备了CPAOZ1-OVA、CPAOZ2-OVA、CPAOZ3-OVA和AOZ-COOH-OVA四种完全包被抗原,并通过紫外扫描对其位移进行了鉴定,得到了一系列鉴定结果正确的AOZ衍生物完全免疫抗原和完全包被抗原。（2）不同种类AOZ衍生物免疫抗原免疫效果的比较将合成好的三种完全免疫抗原免疫6周龄的雌性BALB/c小鼠,经一定周期的连续免疫,第五次免疫7 d后,收集小鼠血清进行ELISA实验测定各小鼠血清的效价及特异性。结果表明经CPAOZ 3-BSA免疫获得的小鼠抗血清效价与抑制无明显区别,没有产生特异性的抗体;经CPAOZ1-BSA免疫获得的小鼠效价和抑制差异较明显,其中鼠1的抗血清灵敏度IC可达249 ng/m L;经CPAOZ2-BSA免疫获得的小鼠效价与抑制的差异很明显,其中鼠1的抗血清灵敏度IC可达149 ng/m L,综上所述选取CPAOZ1-BSA免疫的鼠1和CPAOZ2-BSA免疫的鼠1这两只血清中具有特异性较好抗体的免疫小鼠作为后续细胞融合试验的对象。（3）抗AOZ衍生物单克隆抗体的制备采用杂交瘤细胞融合技术将具有免疫特异性抗体的小鼠脾脏B细胞与骨髓瘤细胞在PEG的诱导作用下进行融合,经HAT、HT培养基的筛选后成功获得了融合后的杂交瘤细胞。并在融合后的11-13d吸取细胞上清液进行间接ELISA和间接竞争ELISA方法筛选出能够分泌特异性抗体的阳性杂交瘤细胞株,随后进行有限稀释进一步纯化目标细胞株并冻存,经三次有限稀释得到抗AOZ衍生物单克隆阳性杂交瘤细胞后扩大培养,于成年昆明小鼠腹腔内接种该细胞,2周后获得的腹水即为抗AOZ衍生物单克隆抗体。采用间接ELISA和间接竞争ELISA方法对腹水单克隆抗体进行效价和特异性分析并对得到的单抗的类型和亚型进行鉴定。结果表明得到的抗AOZ衍生物单克隆阳性杂交瘤细胞能稳定分泌具有活性的特异性抗体,抗体亚型重链是IgG2b型,轻链是Kappa型;制备得到的腹水单抗效价为1:50万;利用腹水单抗对icELISA工作条件进行优化,得到icELISA最优工作条件为AOZ-COOH-OVA包被原浓度125 ng/m L,腹水单抗稀释倍数128K,在此工作条件下,建立测定2-NPAOZ的标准曲线,线性方程为Y=-0.4996X+0.076（R=0.9829）,计算得到IC为115.71 ng/m L,LOD为24.86 ng/m L,线性检测范围为41.38-545.64 ng/m L;icELISA法精密度实验的批内和批间平均相对标准偏差均小于15%,符合检测要求;icELISA法测定的抗AOZ衍生物腹水单抗与其它硝基呋喃类抗生素及其代谢物、同系物的交叉反应率均小于0.1%;icELISA方法添加回收率81.6%-124.3%。本研究合成了3种AOZ衍生物完全免疫抗原和4种完全包被抗原,通过动物免疫实验筛选得到了免疫效果较好的实验小鼠,进而运用杂交瘤细胞融合技术成功筛选得到了分泌特异性抗体的阳性杂交瘤细胞株,制备得到了抗AOZ衍生物腹水单克隆抗体,成功实现了抗AOZ衍生物单克隆抗体在体外无限生产的目的,最后利用制备得到的腹水单克隆抗体建立了动物性食品中AOZ残留的icELISA免疫分析方法并

关键词：呋喃唑酮 AOZ衍生物单克隆抗体 ELISA

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芦荟蒽醌对高脂血症小鼠脂代谢及LPL、MTTP基因mRNA表达的影响

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中国食品学报 2018年第12期18卷 13-21页

作者：杨武英吴磊燕洪艳平王学渊柯法钧罗秋水江西农业大学食品科学与工程学院江西省天然产物与功能食品重点实验室南昌330045

目的:研究芦荟蒽醌对高脂血症小鼠脂代谢及脂蛋白酯酶(LPL)、微粒体甘油三酯转运蛋白(MTTP)基因表达的影响。方法:采用灌胃高胆固醇乳剂的方法建立高脂血症的模型,用精制芦荟蒽醌对高脂血症小鼠进行干预,持续4周后测定血清中总胆固醇(TC... 详细信息

目的:研究芦荟蒽醌对高脂血症小鼠脂代谢及脂蛋白酯酶(LPL)、微粒体甘油三酯转运蛋白(MTTP)基因表达的影响。方法:采用灌胃高胆固醇乳剂的方法建立高脂血症的模型,用精制芦荟蒽醌对高脂血症小鼠进行干预,持续4周后测定血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)等生化指标,以此评定芦荟蒽醌对高脂血症小鼠的降血脂作用;采用实时荧光定量RT-PCR法测定小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏等组织中LPL和MTTP mRNA的表达水平,从分子水平探讨芦荟蒽醌的降血脂机制。结果:芦荟蒽醌具有良好的降血脂作用,能够显著降低高脂血症小鼠血清中的TC、TG和LDL-C水平(P<0.01),显著升高HDL-C水平(P<0.05或P<0.01);芦荟蒽醌可以显著提高心脏、肺脏及肾脏中LPL基因m RNA表达量(P<0.05或P<0.01),显著降低肝脏中MTTP基因mRNA表达量(P<0.01)。结论:芦荟蒽醌具有调节高脂血症小鼠LPL和MTTP基因表达的作用,进而起到缓解高脂血症的功效。

关键词：芦荟蒽醌类化合物降血脂作用 LPL基因表达 MTTP基因表达

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呋喃它酮代谢物单链抗体制备和酶联免疫分析方法

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食品科学 2020年第24期41卷 251-258页

作者：杨武英王弘洪艳平王丹徐振林沈玉栋柯法钧陈薪竹孙远明南昌市农产品加工与质量控制重点实验室江西农业大学食品科学与工程学院江西南昌330045 广东省食品质量安全重点实验室华南农业大学食品学院广东广州510642

从呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮(5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ)衍生物单克隆抗体杂交瘤细胞中克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因,通过(G1y4Ser)3连接肽采用重叠延伸聚合酶链式反应技术构建单链... 详细信息

从呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮(5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ)衍生物单克隆抗体杂交瘤细胞中克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因,通过(G1y4Ser)3连接肽采用重叠延伸聚合酶链式反应技术构建单链抗体基因,pET-22b(+)表达载体进行表达,Ni亲和柱进行纯化,制备得到抗AMOZ衍生物单链抗体,采用棋盘滴定实验优化包被原包被浓度和单链抗体稀释度,建立基于此单链抗体的AMOZ残留间接竞争酶联免疫分析方法并对方法进行评价。结果表明:最佳包被抗原质量浓度和单链抗体稀释度分别为0.0625μg/mL和20倍;建立的间接竞争酶联免疫分析方法半抑制浓度为8.65μg/L,线性范围为2.90~53.28μg/L,检测限为1.48μg/L;除与原药呋喃它酮有交叉反应外,此单链抗体与其他硝基呋喃类抗生素及其代谢物交叉反应率均小于0.1%,虾肉样品添加回收率为74.3%~86.6%;用高效液相色谱-串联质谱法对免疫测定结果进行确证实验,两种方法相关性良好(R^2=0.9992),说明建立的间接竞争酶联免疫分析方法可用于虾类等水产品中AMOZ残留的快速筛查。

关键词：呋喃它酮呋喃它酮代谢物单链抗体间接竞争酶联免疫分析

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江西名茶中Cr、Ni和Co3种重金属元素含量的比较分析

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江西农业大学学报 2020年第4期42卷 674-683页

作者：柯法钧王丹洪艳平陈薪竹王玉波杨武英江西农业大学南昌市农产品加工与质量控制重点实验室/食品科学与工程学院江西南昌330045

【目的】建立Cr、Ni和Co 3种重金属元素含量测定的石墨炉原子吸收光谱法,并利用建立的方法测定8种江西名茶中相应的3种重金属元素的含量,同时进行比较分析。【方法】首先通过正交试验设计优选各元素测定的仪器最佳工作条件,在最佳仪器... 详细信息

【目的】建立Cr、Ni和Co 3种重金属元素含量测定的石墨炉原子吸收光谱法,并利用建立的方法测定8种江西名茶中相应的3种重金属元素的含量,同时进行比较分析。【方法】首先通过正交试验设计优选各元素测定的仪器最佳工作条件,在最佳仪器工作条件下建立各元素的标准曲线,同时考察建立方法的检出限、精密度;然后优化前处理条件,在优选的前处理条件下,测定样品加标回收率,考察建立方法的准确度;最后利用建立的方法测定8种江西名茶中3种元素的含量并对其进行比较分析。【结果】建立的各元素原子吸收光谱法在相应浓度区间内线性关系良好,相关系数为0.9946~0.9993,精密度RSD值为3.93%~8.06%,检出限为0.88~5.625μg/mL,回收率为70.02%~93.50%,均符合要求。3种元素测定结果表明各元素在8种茶叶中的含量存在一定的差异显著性,各元素含量在不同茶叶中的由大到小排序基本为Ni、Cr和Co,Ni元素含量最高的是婺源毛尖;Cr元素含量最高的是庐山云雾;Co元素含量最高的是井冈翠绿。【结论】建立的茶叶中3种重金属元素含量的石墨炉原子吸收光谱法操作简便,干扰较少,灵敏度高,对其他各种茶叶中相应元素含量的测定均适用,测得的8种江西名茶中Cr、Ni和Co 3种重金属元素含量均较低,符合食用要求。

关键词：江西名茶重金属元素含量测定石墨炉原子吸收法比较分析

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江西名茶中10种金属元素含量的测定

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食品与机械 2020年第7期36卷 72-77页

作者：柯法钧杨武英王丹洪艳平陈薪竹王玉波南昌市农产品加工与质量控制重点实验室江西南昌330045 江西农业大学食品科学与工程学院江西南昌330045

对K、Ca、Na、Mg、Fe、Cu、Mn、Zn 8种必需元素火焰原子吸收光谱法的最佳工作条件(乙炔流量、空心阴极灯灯流量和燃烧器高度)进行优化,对铅、镉两种有毒元素石墨炉原子吸收光谱法的最佳工作条件(灰化温度、灰化时间、原子化温度及原子... 详细信息

对K、Ca、Na、Mg、Fe、Cu、Mn、Zn 8种必需元素火焰原子吸收光谱法的最佳工作条件(乙炔流量、空心阴极灯灯流量和燃烧器高度)进行优化,对铅、镉两种有毒元素石墨炉原子吸收光谱法的最佳工作条件(灰化温度、灰化时间、原子化温度及原子化时间)进行优化,绘制各元素的标准曲线,考察方法的检出限和精密度,优化样品前处理条件及测定样品加标回收率,并对江西名茶中对应的10种金属元素的含量进行测定比较。结果表明,建立的各元素原子吸收光谱法在相应浓度区间内线性关系良好,相关系数为0.9918~0.9992,精密度为0.77%~3.32%,检出限为0.004~0.050μg/mL,回收率为99.25%~102.25%,均符合要求。10种金属元素在8种茶叶中的含量差异性显著,其排序基本为K>Mg>Mn>Ca>Fe>Na>Zn>Cu>Pb>Cd;遂川狗牯脑中K、Ca、Fe含量最高,庐山云雾中Na含量最高,靖安白茶中Mg、Zn含量最高,井冈山翠绿中Mn含量最高,武夷红茶中Cu含量最高,8种茶叶中Pb、Cd含量均较低。试验建立的原子吸收光谱法操作简便、干扰较少、灵敏度高,适用于各种茶叶中相应元素含量的测定;8种江西名茶中K、Ca、Na、Mg 4种常量元素和Fe、Cu、Mn、Zn 4种微量元素含量都比较丰富,Pb、Cd两种有毒元素含量均低于国家标准。

关键词：江西名茶金属元素火焰原子吸收法石墨炉原子吸收法

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不同类型江西名茶儿茶素含量及体外抗氧化能力比较

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食品与机械 2019年第6期35卷 152-158页

作者：王学渊刘静宜洪艳平李雨薇柯法钧陈薪竹杨武英江西农业大学食品科学与工程学院江西南昌330045 江西省天然产物与功能食品重点实验室江西南昌330045 华南农业大学食品学院广东广州510642

采用高效液相色谱法测定江西11种名茶中的5种儿茶素(儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、儿茶素没食子酸酯)含量,并通过测定茶叶样品的DPPH自由基清除能力、铁还原抗氧化能力、ABTS+自由基清除能力和总还原能... 详细信息

采用高效液相色谱法测定江西11种名茶中的5种儿茶素(儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、儿茶素没食子酸酯)含量,并通过测定茶叶样品的DPPH自由基清除能力、铁还原抗氧化能力、ABTS+自由基清除能力和总还原能力4项体外抗氧化指标,比较11种江西名茶的抗氧化能力。研究结果表明:上述茶叶中5种儿茶素含量有较大差异,总儿茶素含量大部分差异不显著,绿茶和白茶总儿茶素和各种儿茶素含量总体比红茶高;各种类型茶叶均表现出明显的抗氧化能力,总体趋势也是绿茶和白茶强于红茶。从抗氧化、防衰老的角度来说,推荐消费者优先选择井岗翠绿、浮瑶仙芝等绿茶,资溪白茶、靖安白茶等白茶。

关键词：江西名茶儿茶素含量高效液相色谱法抗氧化能力

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岩浆因素对中国东部铜陵矿集区差异性矿化的控制作用:来自角闪石、斜长石矿物学证据

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地学前缘 2024年第3期31卷 199-217页

作者：陈可邵拥军刘忠法张俊柯李永顺陈雨莹中南大学有色金属成矿预测与地质环境监测教育部重点实验室湖南长沙410083 中南大学地球科学与信息物理学院湖南长沙410083

冬瓜山铜(金)矿床和新桥硫铁铜金矿床是铜陵矿集区内两个大型夕卡岩型矿床,二者成矿地质背景相似,矿体产于同一地层层位,冬瓜山矿床以黄铜矿和磁黄铁矿为主,新桥矿床以黄铁矿和磁铁矿为主,二者矿物组合差异性非常明显,但造成二者矿物组... 详细信息

冬瓜山铜(金)矿床和新桥硫铁铜金矿床是铜陵矿集区内两个大型夕卡岩型矿床,二者成矿地质背景相似,矿体产于同一地层层位,冬瓜山矿床以黄铜矿和磁黄铁矿为主,新桥矿床以黄铁矿和磁铁矿为主,二者矿物组合差异性非常明显,但造成二者矿物组合差异的关键控制因素还不清楚。针对这一科学问题,本文以二者成矿岩体中的角闪石和斜长石为研究对象,拟揭示岩浆因素对二者差异性矿化的控制作用。冬瓜山矿床青山脚石英二长闪长岩和新桥矿床矶头石英闪长岩角闪石和斜长石岩相学和电子探针(EPMA)主量元素和LA-ICP-MS微量元素分析结果显示,青山脚岩体中的角闪石大部分属于镁角闪石系列;矶头岩体中的角闪石大部分属于镁角闪石和浅闪石系列。青山脚岩体和矶头岩体的角闪石结晶压力、结晶温度、结晶深度、氧逸度和含水量分别为41~306 MPa和23~225 MPa,691~916℃和634~918℃,1.6~11.6 km和0.9~8.5 km,ΔNNO=0~2.3和ΔNNO=-0.4~2.4,3.7%~5.5%和3.1%~5.4%,青山脚和矶头岩体内角闪石以地壳型为主,少部分为壳幔混合型。两个岩体中斜长石多为中长石,根据斜长石结构和成分剖面特征,推测青山脚和矶头岩体晶体群分别来自5个和4个不同的岩浆子系统,都经历了镁铁质岩浆的注入和混合作用。我们认为镁铁质岩浆中氧逸度和元素含量的差异控制了冬瓜山和新桥的差异性矿化。

关键词：角闪石斜长石成因矿物学夕卡岩型矿床铜陵矿集区

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新课标指导下初中历史跨学科教学研究——以《沟通中外文明的“丝绸之路”》史地时空融合课为例

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试题与研究 2024年第2期 40-42页

作者：柯法星福建省浦城县第二中学

《义务教育历史课程标准（2022年版）》出台，围绕培养学生核心素养，新课标首次增设“跨学科主题”学习活动，占初中历史学科总课时的10%，强化了学科间的相互关联，历史学科时间特征决定了具有跨学科教学的优势，融合地理学科空间视... 详细信息

《义务教育历史课程标准（2022年版）》出台，围绕培养学生核心素养，新课标首次增设“跨学科主题”学习活动，占初中历史学科总课时的10%，强化了学科间的相互关联，历史学科时间特征决定了具有跨学科教学的优势，融合地理学科空间视角等信息，增强了历史课程的综合性和实践性。教师在历史教学中秉承“时空观念”，构建以学生为中心的史地跨学科融合课程体系，是新课标指导思想下教学创新实践的重要方向与核心素养落地的体现，既提高教师扎实业务水平，也更好契合新时代新课标育人要求，激发学生潜能、培育全人。

关键词：课程标准时空观念核心素养跨学科融合育人

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利用小角中子核磁散射分离研究AerMet100钢中纳米析出相的形貌和成分

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金属学报 2024年第8期60卷 1109-1118页

作者：柯于斌李彬段辉平散裂中子源科学中心东莞523803 中国科学院高能物理研究所北京100049 北京航空航天大学材料科学与工程学院北京100191

AerMet100超高强度钢以其优异的力学性能广泛应用于飞机起落架。其超高强度主要源于合金回火过程中产生的大量M_(2)C型针状析出相的二次硬化作用。由于AerMet100高强钢中的纳米析出相与马氏体基体共格且尺寸细小,无法进行萃取,很难采用... 详细信息

AerMet100超高强度钢以其优异的力学性能广泛应用于飞机起落架。其超高强度主要源于合金回火过程中产生的大量M_(2)C型针状析出相的二次硬化作用。由于AerMet100高强钢中的纳米析出相与马氏体基体共格且尺寸细小,无法进行萃取,很难采用传统成像手段对其尺寸和成分进行准确表征。本工作结合TEM和XRD的观测结果,采用小角中子散射(SANS)技术分别对454、482、486和498℃回火5 h的AerMet100合金钢中M_(2)C型针状析出相的尺寸、分布和含量进行了定量表征。通过在SANS实验时施加1.1 T横向磁场并对数据沿平行和垂直磁场方向按角度规约,实现了对数据的核、磁散射分离。对核散射曲线的模型拟合结果显示,合金中针状析出相平均长度为6~16 nm,平均直径为1~2 nm,针状碳化物相的体积分数随退火温度升高由0.54%逐渐提高至5.19%。磁散射数据得到的碳化物结构参数均大于核散射结果,说明在碳化物与马氏体基体相界面存在自旋错排的纳米磁畴区。此外,通过对碳化物和基体相中子核磁散射长度密度的对比计算,推断出针状碳化物的可能的化学组成和密度分别为:(Cr_(0.4)Mo_(1.6))C和8.55 g/cm^(3)。

关键词： AerMet100钢纳米析出相小角中子散射核磁散射分离纳米相化学成分

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新时代新征程政治建军的科学指南——深入学习贯彻习近平主席在中央军委政治工作会议上的重要讲话

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求是 2024年第15期 13-20页

作者：钧政不详

回望历史,我们党总是在重大关头作出战略决策,标定人民军队的前进方向,指引全军官兵在党的旗帜下奋斗。10年前,闽西小镇古田,习主席带领我军高级干部重回这个确立思想建党、政治建军原则的地方,召开全军政治工作会议。

关键词：思想建党政治工作会议建军原则政治建军全军官兵战略决策党的旗帜科学指南

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