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肿瘤 2011年第7期31卷 585-590页

作者：刘增军沈赞赵晖杜雪菲丰涛李洪涛林李家宓姚阳上海交通大学附属第六人民医院肿瘤内科上海200233 香港中文大学脑肿瘤研究所香港999077

目的:探讨肝细胞生长因子Kringle1结构域(kringle1domain of hepatocyte growth factor,HGFK1)基因对人前列腺癌裸鼠骨移植瘤生长的影响。方法:通过向裸鼠胫骨骨髓腔内注射人前列腺癌PC-3细胞,建立人前列腺癌裸鼠骨移植瘤模型;分别向移... 详细信息

目的:探讨肝细胞生长因子Kringle1结构域(kringle1domain of hepatocyte growth factor,HGFK1)基因对人前列腺癌裸鼠骨移植瘤生长的影响。方法:通过向裸鼠胫骨骨髓腔内注射人前列腺癌PC-3细胞,建立人前列腺癌裸鼠骨移植瘤模型;分别向移植瘤和裸鼠尾静脉内注射PBS、携带有HGFK1基因或增强型绿色萤光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的腺相关病毒载体的病毒上清液rAAV-EGFP和rAAV-HGFK1,观察肿瘤生长、体内转移和裸鼠生存时间,免疫组织化学法检查移植瘤组织中Ki67、E-cadherin和CD31的表达。结果:成功建立了人前列腺癌裸鼠骨移植瘤模型,rAAV-HGFK1组的肿瘤体积和质量明显小于PBS和rAAV-EGFP组(P<0.05),抑瘤率达46.69%;rAAV-HGFK1组裸鼠的中位生存时间比PBS和rAAV-EGFP组明显延长(P<0.05);PBS和AAV-EGFP组腹主动脉旁淋巴结转移发生率高于rAAV-HGFK1组(P<0.05);rAAV-HGFK1组肿瘤组织中Ki67和CD31的表达明显低于PBS和AAV-EGFP组(P<0.05),E-cadherin的表达明显高于PBS和AAV-EGFP组(P<0.05)。结论:HGFK1具有抑制人前列腺癌裸鼠骨移植瘤生长、转移和血管生成的作用,并可延长荷瘤裸鼠的生存时间。

关键词：前列腺肿瘤疾病模型动物新生血管化病理性肝细胞生长因子Kringle 1结构域

人细胞周期相关激酶(CCRK)启动子的分析和特征研究

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军事医学科学院院刊 2004年第5期28卷 437-441页

作者：贾向志林李家宓何明亮马文煜黄培堂孔祥复黄翠芬第四军医大学基础医学部微生物学教研室西安710032 香港大学分子生物学研究所军事医学科学院生物工程研究所北京100850

目的 :分析人CCRK基因启动子、启动子的核心序列及与其表达相关的转录因子。方法 :采用 5′ RACE技术鉴定人CCRK基因的转录起始点 ;对启动子区 3′端 3个截短片段 2 5 5bp(- 36 7/- 12 8) ,2 10bp(- 32 2 /- 12 8)和16 0bp(- 2 72 /- 12... 详细信息

目的 :分析人CCRK基因启动子、启动子的核心序列及与其表达相关的转录因子。方法 :采用 5′ RACE技术鉴定人CCRK基因的转录起始点 ;对启动子区 3′端 3个截短片段 2 5 5bp(- 36 7/- 12 8) ,2 10bp(- 32 2 /- 12 8)和16 0bp(- 2 72 /- 12 8)进行删除分析 ,双荧光素酶分析测出的最小活性片段作为核心启动子的上游位点。通过生物软件MatInspectorV2 .2分析核心启动子区域 ,寻找并推测重要的转录因子 ,并对其核心序列进行定点突变分析 ,再通过电泳迁移率 (EMSA)实验加以鉴定。结果 :采用 5′ RACE技术 ,得到的PCR产物直接测序 ,定位 - 2 4 2“T”为转录起始点 ;通过启动子 3′端小片段删除分析 ,2 5 5 ,2 10和 16 0bp均无活性 ,由此判断 3′端 2 5 5个核苷酸不存在核心启动子序列 ,并定位一段 74bp的区域为核心启动子 (- 4 4 1/- 36 7)区域。通过MatInspector软件分析 ,发现在这段核心启动子区域内有 3个重要的结合位点 :DeltaEF 1,NF κB和Sp1。对这 3个结合位点的核心序列进行定点突变后瞬时转染U373,经双荧光素酶分析发现DeltaEF 1的活性明显升高 ,NF κB没有变化 ,Sp1的活性降低但不太明显。进一步通过电泳迁移率 (EMSA)实验鉴定 ,DeltaEF 1和NF κB能与U373核蛋白形成特异性的DNA 蛋白质复合体。

关键词：神经胶质瘤细胞周期相关激酶启动子定点突变转录因子

hTERTC27过表达对鼻咽癌C666-1细胞株增殖和凋亡的影响

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肿瘤防治研究 2013年第1期40卷 28-31页

作者：林桂淼王晓梅林苏霞余水红吴世明林李家宓陈思平深圳大学医学院生物医学工程重点实验室深圳518060 泌尿生殖研究所香港中文大学神经外科肿瘤研究所

目的研究外源表达hTERTC27对鼻咽癌C666-1细胞增殖和凋亡的影响。方法采用脂质体将pcDNA3-hTERTC27转染至C666-1细胞株中。采用Western blot法鉴定hTERTC27和Bcl-2在细胞中的表达。采用MTT比色法和细胞克隆形成实验观察其对细胞增殖的... 详细信息

目的研究外源表达hTERTC27对鼻咽癌C666-1细胞增殖和凋亡的影响。方法采用脂质体将pcDNA3-hTERTC27转染至C666-1细胞株中。采用Western blot法鉴定hTERTC27和Bcl-2在细胞中的表达。采用MTT比色法和细胞克隆形成实验观察其对细胞增殖的影响。采用TUNEL实验观察其对细胞凋亡的影响。结果脂质体转染24h后,C666-1细胞株外源性hTERTC27出现高表达。过量表达hTERTC27的C666细胞增殖能力明显减缓(P<0.01),克隆形成率降低(P<0.01),TUNEL阳性细胞率增加(P<0.01),Bcl-2表达量降低(P<0.01)。结论 hTERTC27可以抑制C666-1细胞增殖、促进凋亡,可能与下调Bcl-2蛋白的表达有关。

关键词： hTERTC27 端粒酶鼻咽癌基因治疗

人类端粒酶反转录酶C27多肽过表达对鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的影响

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肿瘤研究与临床 2014年第2期26卷 94-97页

作者：林桂淼李慧林李家宓林苏霞吴世明王晓梅深圳大学医学院泌尿生殖研究所 518060 深圳大学医学院泌尿生殖研究所合成生物学工程实验室 518060 香港中文大学神经外科肿瘤研究所

目的研究人类端粒酶反转录酶C27多肽（hTERTC27）过表达对鼻咽癌C666-1细胞移植瘤生长的影响。方法利用稳定转染质粒pcDNA3.1（对照组）与pcDNA3.1-hTERTC27（hTERTC27组）的C666-1细胞株建立裸鼠鼻咽癌皮下移植瘤模型。观察肿瘤生长... 详细信息

目的研究人类端粒酶反转录酶C27多肽（hTERTC27）过表达对鼻咽癌C666-1细胞移植瘤生长的影响。方法利用稳定转染质粒pcDNA3.1（对照组）与pcDNA3.1-hTERTC27（hTERTC27组）的C666-1细胞株建立裸鼠鼻咽癌皮下移植瘤模型。观察肿瘤生长情况，绘制肿瘤生长曲线，处死后剥离肿瘤，进行HE染色观察组织形态学变化。采用Western blot法观察肿瘤组织中剪切后的Caspase-3、Caspase-9、PARP以及bax和bcl-2的表达。结果小鼠荷瘤第8天后，hTERTC27组移植瘤的体积明显小于对照组（P＜0.05），肿瘤的重量明显低于对照组（P＜0.05），局部肌肉浸润现象较少。hTERTC27组移植瘤Caspase-3、Caspase-9、PARP、bax的表达量增加（P＜0.01），而bcl-2的表达量降低（P＜0.01）。结论 hTERTC27减缓裸鼠鼻咽癌皮下移植瘤的生长速度并促进其凋亡，可能与其上调bax蛋白的表达和下调bcl-2蛋白的表达有关。

关键词：鼻咽肿瘤 hTERTC27 端粒末端转移酶基因疗法

DNA载体介导RNA干扰抑制LMP-1基因对鼻咽癌细胞转移能力的影响

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DNA载体介导RNA干扰抑制LMP-1基因对鼻咽癌细胞转移能力的影响

第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议

作者：李刚李湘平彭英刘雄林李家宓南方医科大学附属南方医院耳鼻咽喉-头颈外科南方医科大学附属南方医院耳鼻咽喉-头颈外科香港大学分子生物学研究所南方医科大学附属南方医院耳鼻咽喉-头颈外科南方医科大学附属南方医院耳鼻咽喉-头颈外科

目的:探讨应用DNA载体介导RNA干扰技术,抑制鼻咽癌细胞中EB病毒（Epstein-Barr virus）潜伏膜蛋白1（latent membrane protein-1,LMP-1）表达的可能性,并观察LMP-1基因沉默对鼻咽癌细胞转移能力的影响。方法:设计合成针对EB病毒LMP-1基... 详细信息

目的:探讨应用DNA载体介导RNA干扰技术,抑制鼻咽癌细胞中EB病毒（Epstein-Barr virus）潜伏膜蛋白1（latent membrane protein-1,LMP-1）表达的可能性,并观察LMP-1基因沉默对鼻咽癌细胞转移能力的影响。方法:设计合成针对EB病毒LMP-1基因的短链干扰RNA（small hairpin RNA,siRNA）,利用脂质体转染导入EB病毒（+）的鼻咽癌细胞C611,用半定量RT-PCR检测LMP-1 mRNA水平的变化,筛选出能有效抑制LMP-1表达的siRNA序列筛选出最佳RNA干扰序列。根据此序列合成能转录出干扰 RNA的DNA模板插入pAVU6+27质粒,构建能够介导RNA干扰的发夹状干扰RNA（small hairpin RNA, shRNA）DNA表达载体。采用磷酸钙共沉淀法将质粒导入C611细胞,G418筛选找到LMP-1基因沉默的亚克隆C611L,通过胰酶消化后细胞脱落时间,观察贴壁生长能力的变化,肿瘤细胞穿膜实验分析细胞基底膜穿透能力与对照组的差异,采用划痕时间观察细胞移动能力的改变,以检测IMP-1基因沉默对鼻咽癌细胞转移能力的影响。结果:导入有效干扰siRNA后,C611细胞中LMP-1 mRNA水平下降90％以上。在shRNA表达载体有效转染的C611细胞中,也能对LMP-1基因的表达产生稳定的抑制。肿瘤细胞转移实验表明,LMP-1基因沉默的C611L细胞在胰酶消化后,脱落时间延长;相同时间内穿过人工基底膜的和移动到划痕生长的细胞数量较对照组减少。说明C611L细胞贴壁生长能力提高,基底膜穿透能力和细胞移动能力下降。结论:RNA干扰能够有效抑制EB病毒LMP-1基因在鼻咽癌细胞中的表达。shRNA表达载体能够在鼻咽癌细胞内介导RNA干扰,并获得对LMP-1基因稳定的抑制。LMP-1基因可能通过贴壁生长能力,基底膜穿透能力和细胞移动能力等不同方面影响鼻咽癌细胞的转移。

关键词：鼻咽癌 EB病毒潜伏膜蛋白1 RNA干扰转移

来源： cnki会议评论

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香港中文大学神经外科转译研究

香港中文大学神经外科转译研究

腺相关病毒介导的HGFK1对大鼠肝细胞癌的治疗作用研究

中华医学会神经外科学分会第九次学术会议

作者：潘伟生李珺林李家宓路钢朱献伦香港中文大学威尔斯亲王医院神经外科

转译研究与传统的实验室基础医学研究有所不同,主要是围绕临床诊疗过程中遇到的一些问题,利用及模拟可与临床诊断治疗相吻合的研究方法,解决临床遇到的实际问题,从而更好的为病人服务.香港中文大学神经外科转移研究包括

关键词：

来源： cnki会议评论

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中国癌症杂志 2009年第6期19卷 416-422页

作者：顾春荣郭跃武赵晖孙元珏姚阳沈赞林李家宓上海交通大学附属第六人民医院奉贤分院肿瘤内科上海201400 上海交通大学附属第六人民医院肿瘤内科上海200233 香港大学癌症中心生物载体与基因治疗实验室

背景与目的:肝细胞癌是一种有高度新生血管的肝脏恶性肿瘤,进展期肝细胞癌的预后很差,目前缺乏有效的治疗。近来有报道肝细胞生长因子的Kringle1结构域(HGFK1)基因具有很强的抑制新生血管的作用。本研究探讨肝细胞生长因子Kringle1结构... 详细信息

背景与目的:肝细胞癌是一种有高度新生血管的肝脏恶性肿瘤,进展期肝细胞癌的预后很差,目前缺乏有效的治疗。近来有报道肝细胞生长因子的Kringle1结构域(HGFK1)基因具有很强的抑制新生血管的作用。本研究探讨肝细胞生长因子Kringle1结构域(HGFK1)基因对原发性肝细胞癌的治疗作用及其机制。方法:构建携带有HGFK1基因的腺相关病毒载体(rAAV-HGFK1),建立大鼠原发性肝细胞癌模型,以rAAV-HGFK1进行治疗,继而观察大鼠原发性肝癌模型的生存时间、肿瘤生长情况、肿瘤内血管密度以及转移情况。结果:在大鼠肝脏内注射6×105个大鼠肝细胞癌细胞株McA-RH7777后,第10天全部成瘤。通过向瘤内和门静脉内注射rAAV-HGFK1导入HGFK1基因可以明显延长荷肝细胞癌大鼠的生存时间,对照组生存时间为30d,而治疗组的生存时间为49d。在对照的PBS注射组和AAV-EGFP注射组,肝脏和腹腔内转移的发生率都是100%;而肺转移的发生率则分别为100%和83%。而治疗组都没有转移,且腹水的发生率才只有33%。组织学证实AAV-HGFK1对肿瘤的作用则具体表现为肿瘤生长的受到抑制、肿瘤内血管密度的减少、以及发生肝内、肺、腹膜等转移机率的下降。HGFK1表现出了明显的抗血管生成及抑制肿瘤细胞生长作用。在大鼠体内的毒性实验未发现明显毒性。结论:HGFK1能通过抗血管生成作用达到抑制肝细胞癌原发灶及转移灶的效果,显著延长荷瘤大鼠的生存时间,没有发现明显的毒性,为临床抗肿瘤治疗提供了一个潜在的新靶点。

关键词： rAAV—HGFK1 肝细胞癌抗血管生成转移

外源性hTERTC27抑制鼻咽癌C666-1细胞株生长的体外研究

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外源性hTERTC27抑制鼻咽癌C666-1细胞株生长的体外研究

中国遗传学会“第十一届全国激光生物学学术会议”暨《激光生物学报》创刊廿周年庆祝会、第十届粤港生物物理研讨会暨2012年广东生物物理学术年会

作者：林桂淼王晓梅林苏霞余水红吴世明林李家宓陈思平深圳大学医学院生物医学工程重点实验室、生理学教研室深圳大学医学院泌尿生殖研究所香港中文大学神经外科肿瘤研究所

目的研究外源表达hTERTC27对鼻咽癌C666-1细胞增殖和凋亡的影响。方法采用脂质体将pcDNA3-hTERTC27转染至C666-1细胞株中。采用Western blot法鉴定hTERTC27和Bcl-2在细胞中的表达。采用MTT比色法和细胞克隆形成实验观察其对细胞增殖的影响。采用TUNEL实验观察其对细胞凋亡的影响。结果脂质体转染24h后,C666-1细胞株外源性hTERTC27出现高表达。过量表达hTERTC27的C666细胞增殖能力明显减缓(P<0.01),克隆形成率降低(P<0.01),TUNEL阳性细胞率增加(P<0.01),Bcl-2表达量降低(P<0.01)。结论 hTERTC27可以抑制C666-1细胞增殖,促进凋亡,可能与其下调Bcl-2蛋白的表达有关。

关键词：鼻咽癌细胞增殖细胞株 hTERTC27 C666-1 体外研究外源性

来源： cnki会议评论

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人细胞周期相关激酶启动子的克隆和初步分析

生物技术通讯 2004年第3期15卷 222-225页

作者：贾向志林李家宓何明亮马文煜黄培堂孔祥复黄翠芬第四军医大学基础医学部微生物学教研室西安710032 香港大学分子生物研究所军事医学科学院生物工程研究所北京100850

克隆人的细胞周期相关激酶(CCRK)基因启动子,分析与其表达有关的转录调控因子。通过巢式PCR方法,从人的基因组总DNA中分离出CCRK基因5'端非翻译区大小为1072bp的片段。这段片段的3'端起始点在第一个外显子里第一个翻译密码子ATG(+1)上游... 详细信息

克隆人的细胞周期相关激酶(CCRK)基因启动子,分析与其表达有关的转录调控因子。通过巢式PCR方法,从人的基因组总DNA中分离出CCRK基因5'端非翻译区大小为1072bp的片段。这段片段的3'端起始点在第一个外显子里第一个翻译密码子ATG(+1)上游128bp处。以1072bp为模板,对启动子进行5'端删除分析,分别扩增951bp穴-1072/-128雪、564bp穴-692/-128雪、313bp穴-441/-128雪、127bp穴-239/-128雪的片段,与pGL3-Basic荧光素酶报告载体重组构建,人工加上克隆位点,5'端带有KpnI、3'端带有XhoI位点。瞬时转染恶性神经胶质瘤细胞株U373,通过双荧光素酶活性进行分析。对分离出的1072bp的片段进行测序,结果与GenBank(AccessionAF035013雪的序列比较,同源序列达到98%。双荧光素酶活性分析564bp片段有最强的活性,313bp片段为有活性的最小片段。本研究为进一步研究分析CCRK的核心启动子和与其相关的转录因子奠定基础。

关键词：人启动子细胞周期相关激酶 CCRK 克隆转录