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猪前体脂肪细胞与肌卫星细胞联合培养体系建立

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第7期23卷 673-675页

作者：孙红梅杨公社孙超西北农林科技大学动物脂肪沉积与肌肉发育实验室陕西杨凌712100

目的:探讨猪前体脂肪细胞与肌卫星细胞体外直接联合培养的适宜体系。方法:将分离纯化、鉴定的猪前体脂肪细胞与骨骼肌肌卫星细胞按1:1(Ⅰ组)、1:2(Ⅱ组)、1:4(Ⅲ组)浓度比混合培养,MTT比色绘制2～9d内细胞生长曲线,经倒置显微镜观察第9... 详细信息

目的:探讨猪前体脂肪细胞与肌卫星细胞体外直接联合培养的适宜体系。方法:将分离纯化、鉴定的猪前体脂肪细胞与骨骼肌肌卫星细胞按1:1(Ⅰ组)、1:2(Ⅱ组)、1:4(Ⅲ组)浓度比混合培养,MTT比色绘制2～9d内细胞生长曲线,经倒置显微镜观察第9天细胞生长状态,选取最佳浓度比重复联合培养,通过血细胞板计数测定72h内细胞贴壁率,分析得最佳贴壁时间,并比较不同培养液(M199、DMEM/F12、M199+100mL/LFBS、DMEM/F12+100mL/LFBS、RPMI+100mL/LFBS、DMEM+100mL/LFBS)及血清浓度(10～200mL/LFBS)对细胞贴壁率的影响。结果:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组细胞生长曲线与形态学观察显示,前体脂肪细胞与肌卫星细胞以1:4浓度比联合培养至9d时,细胞增殖率可达到最大、生长状态优于Ⅰ、Ⅱ组;通过细胞计数发现联合培养细胞贴壁率在48～66h之间趋于稳定,DMEM/F12+100mL/LFBS培养液培养效果显著优于其他培养液(P<0·05);在测定1～100mL/L血清浓度范围内,联合培养细胞贴壁率的升高对血清浓度具有依赖性。结论:使用含100mL/L胎牛血清的DMEM/F12(1:1)培养液,将前体脂肪细胞与肌卫星细胞以1:4浓度比混合接种,在联合培养48h后第1次换液,可保持联合培养细胞良好的贴壁与增殖状态。

关键词：联合培养浓度比贴壁时间培养液血清浓度

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猪CHPT1基因的发现及其表达谱分析

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2012年第3期40卷 1-6,12页

作者：蒲蕾程佳张晓霄杨公社孙世铎西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

【目的】对猪脂肪组织RNA的Solexa测序结果进行分析整理,发现猪新转录本CHPT1基因。研究CHPT1在猪不同组织及脂肪细胞不同分化阶段的表达谱,以便为后续的基因功能研究奠定基础。【方法】取猪的背部脂肪组织提取RNA,建立cDNA文库,进行Sol... 详细信息

【目的】对猪脂肪组织RNA的Solexa测序结果进行分析整理,发现猪新转录本CHPT1基因。研究CHPT1在猪不同组织及脂肪细胞不同分化阶段的表达谱,以便为后续的基因功能研究奠定基础。【方法】取猪的背部脂肪组织提取RNA,建立cDNA文库,进行Solexa测序,对测序结果进行生物信息学分析。利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及实时荧光定量PCR,克隆猪CHPT1基因的CDs区部分序列,并对其在不同组织及脂肪细胞不同分化阶段的表达谱进行分析。【结果】由Solexa测序分析结果发现,猪存在新转录本基因CHPT1,其对应的Tag表达量在180日龄大白猪与240日龄荣昌猪的脂肪组织中无明显差异,在3日龄与240日龄荣昌猪脂肪组织中表达差异达到20倍以上。克隆获得了其CDs区193bp的cDNA序列。实时荧光定量PCR检测结果表明,CHPT1基因在3日龄和180日龄大白猪的各个组织中均有表达,其中在肝脏和肾脏中表达量较高,且表达量有差异。3日龄与180日龄大白猪相比,肾脏和脂肪组织中CHPT1的表达量均有显著差异。在猪前体脂肪细胞的时序表达结果中,CHPT1表达量呈先增加后降低的趋势,其中第2天表达量明显升高,于第6天达到最大值,之后降低。【结论】猪存在CHPT1基因,其在猪的各个组织中都有表达,对猪的脂肪沉积可能发挥着重要作用。

关键词： CHPT1 Solexa测序新转录本猪表达谱

miR-191通过调控C/EBPβ转录影响猪前体脂肪细胞分化

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生物化学与生物物理进展 2013年第2期40卷 165-176页

作者：刘帅宁小敏李美航仇杨李艳杰董培越杨公社西北农林科技大学动物科技学院动物脂肪沉积与肌肉发育实验室杨凌712100

对实验室前期Solexa结果进行深入挖掘,结合生物信息学分析从不同发育阶段猪皮下脂肪组织差异表达的miRNAs中筛选出高丰度差异极显著的候选miR-191.采用腺病毒过表达miR-191,实时定量PCR、Western blot及双荧光素酶报告基因检测等技术方... 详细信息

对实验室前期Solexa结果进行深入挖掘,结合生物信息学分析从不同发育阶段猪皮下脂肪组织差异表达的miRNAs中筛选出高丰度差异极显著的候选miR-191.采用腺病毒过表达miR-191,实时定量PCR、Western blot及双荧光素酶报告基因检测等技术方法,初步研究miR-191对猪前体脂肪细胞分化的影响.结果发现,miR-191随着猪前体脂肪细胞的分化表达量逐渐增加.与对照组相比,过表达miR-191的猪前体脂肪细胞中miR-191转录本显著增加,并引起CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)、PPARγ和aP2的mRNA水平降低,抑制了猪前体脂肪细胞分化.同时,Western blot结果显示,与对照组相比过表达miR-191的猪前体脂肪细胞在48 h C/EBPβ蛋白水平下降了55%.更重要的是,通过TargetScan等算法正向筛选以及MicroInspector反向筛选联合获得miR-191候选靶基因,经双荧光素酶报告基因检测结果证实,miR-191可直接作用于C/EBPβ3′UTR,从而降低萤火虫荧光素酶活性.综上所述,miR-191可能通过抑制脂肪细胞分化早期标志基因C/EBPβ的表达,从而抑制了猪前体脂肪细胞的分化.

关键词： miR-191 C EBPβ 猪前体脂肪细胞表达谱靶基因预测腺病毒双荧光素酶报告基因检测系统

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MicroRNA调控动物脂肪细胞的分化

中国生物化学与分子生物学报 2009年第4期25卷 321-326页

作者：李国喜宁小敏康相涛杨公社西北农林科技大学动物脂肪沉积与肌肉发育实验室陕西杨凌712100 河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002

MicroRNA(miRNA)属于非编码小调节RNA,在动物细胞的增殖、分化、凋亡和代谢等许多生物学过程中具重要作用.研究显示大量miRNA也参与动物脂肪细胞的分化调节,在前体脂肪细胞向成熟脂肪细胞的分化过程中具有多种功能.目前的研究结果表明,... 详细信息

MicroRNA(miRNA)属于非编码小调节RNA,在动物细胞的增殖、分化、凋亡和代谢等许多生物学过程中具重要作用.研究显示大量miRNA也参与动物脂肪细胞的分化调节,在前体脂肪细胞向成熟脂肪细胞的分化过程中具有多种功能.目前的研究结果表明,这些miRNA在脂肪细胞分化的早期或后期通过其靶基因发挥功能,如miR-17-92和miR-143分别通过其靶基因Rb2/p130和ERK5/BMK1调节脂肪细胞分化,过表达可促进体外培养的脂肪细胞分化.因此,了解更多miRNA在脂肪细胞分化中的功能,可以加深对动物脂肪形成分子机制的理解,并有可能将其作为脂类代谢性疾病治疗的潜在靶点.

关键词： MicroRNA 脂肪细胞分化

过表达miR-155抑制C2C12成肌分化

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生物工程学报 2014年第2期30卷 182-193页

作者：熊燕王禹卫宁许儒祥杨公社庞卫军西北农林科技大学动物脂肪沉积与肌肉发育实验室陕西杨凌712100

为明确miR-155在C2C12成肌分化中的作用及分子机制,本研究构建了miR-155过表达腺病毒载体,运用过表达miR-155的腺病毒感染C2C12,并诱导其成肌分化。通过形态学观察,成肌标志基因mRNA和蛋白表达水平的检测,以及双荧光素酶报告基因系统对... 详细信息

为明确miR-155在C2C12成肌分化中的作用及分子机制,本研究构建了miR-155过表达腺病毒载体,运用过表达miR-155的腺病毒感染C2C12,并诱导其成肌分化。通过形态学观察,成肌标志基因mRNA和蛋白表达水平的检测,以及双荧光素酶报告基因系统对预测的miR-155靶基因(TCF4)的验证,结果表明,C2C12细胞分化中,过表达miR-155明显降低了肌管的形成,成肌标志基因MyoG和MyHC的mRNA表达量极显著地下降(P0.05),成肌标志基因蛋白检测结果与mRNA检测结果一致;进一步研究显示miR-155与预测的TCF4基因的3'UTR 3个靶点(1487-1493,1516-1522,4532-4583)中的1个(4532-4538)结合,并发现过表达miR-155显著降低了TCF4的mRNA水平(P<0.05)。表明miR-155可能通过靶向TCF4抑制C2C12成肌分化。

关键词： miR-155 C2C12 成肌分化 TCF4 腺病毒

Sirt1:一种新的脂肪细胞和肌细胞调控因子

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遗传 2006年第11期28卷 1462-1466页

作者：白亮庞卫军杨公社西北农林科技大学动物脂肪沉积与肌肉发育实验室陕西杨凌712100

Sirt1(Sirtuin type 1)是依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的组蛋白脱乙酰酶,为Sirtuins家族成员之一,与细胞增殖、分化、衰老、凋亡和代谢密切相关。目前,有关Sirt1与衰老和代谢的论文已在Science、Nature、Cell等杂志上连续刊出。其... 详细信息

Sirt1(Sirtuin type 1)是依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的组蛋白脱乙酰酶,为Sirtuins家族成员之一,与细胞增殖、分化、衰老、凋亡和代谢密切相关。目前,有关Sirt1与衰老和代谢的论文已在Science、Nature、Cell等杂志上连续刊出。其中,Sirt1通过抑制PPARγ促进白色脂肪细胞中脂肪动员,并且通过下调肌细胞标志基因表达来抑制成肌细胞分化。提示Sirt1不仅是一个重要的与机体“长寿”有关的因子,而且可能在动物脂肪沉积和肌肉发育中起着关键的调控作用。

关键词： Sirt1基因长寿脂肪细胞成肌细胞细胞分化

不同冷冻保护剂对猪前体脂肪细胞冷冻后细胞活力的影响(简报)

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分子细胞生物学报 2006年第3期39卷 285-288页

作者：李影杨公社卢荣华西北农林科技大学动物脂肪沉积与肌肉发育实验室杨凌712100

To explore the optimal cryoprotectant for porcine preadipocyte cryppreservation,the primary pig preadipocytes were cryopreseved with DMSO, ethlyleneglycol(EG),PVP and DMSO+PVP cryoprotective agents (CPA) and without CPA,respectively. After 30d, the cells were recovered, viability of pig preadipocyte cryopreserved with different CPAs was evaluated by the Typlan exclusion, growth characteristic was analyzed with MTT, the differentiation potentials of pig preadipocytes were observed by morphology change from preadipocyte to mature adipocyte and Oil Red O staining. The results were as follows: four cryoprotectants all could protect the pig preadipocyte from frozen at a certain degree, and the efficiency was as follows: PVP>DMSO+PVP>DMSO>EG>without cryoprotectant. The growth state and the lipogenic capability of the pig preadipocytes cryopreserved with PVP were similar to those unfreezing cells. Thus, we draw a conclusion: PVP is the optimal cryoprotectant for pig preadipocyte.

关键词：猪前体脂肪细胞冷冻保护剂活力生脂特性

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生物钟在卵巢生理和病理中的作用

中国生物化学与分子生物学报 2022年第1期38卷 49-57页

作者：黄亮褚瑰燕杨公社陕西省动物遗传育种与繁殖重点实验室陕西杨凌712100 西北农林科技大学动物科技学院动物脂肪沉积与肌肉发育实验室陕西杨凌712100

哺乳动物的昼夜节律是基因编码的分子钟在体内产生的一种以大约24 h为周期的生理现象,使机体的生理过程与外界环境的变化相协调,是对环境适应的一种表现。在哺乳动物中,繁殖生理功能受生物钟系统的调节。在下丘脑-垂体-卵巢(hypothalami... 详细信息

哺乳动物的昼夜节律是基因编码的分子钟在体内产生的一种以大约24 h为周期的生理现象,使机体的生理过程与外界环境的变化相协调,是对环境适应的一种表现。在哺乳动物中,繁殖生理功能受生物钟系统的调节。在下丘脑-垂体-卵巢(hypothalamic-pituitary-ovarian,HPO)轴的各组织中均已观察到生物钟基因的表达,各层次的生物钟相互协调和同步,维持正常的生殖行为。昼夜节律的产生、维持和调控依赖连锁的转录-翻译反馈环路(transcription-translation feedback loop,TTLs),它决定着下丘脑-垂体-卵巢(hypothalamic-pituitary-ovarian,HPO)轴每个组织中基因表达的周期和振幅。卵巢中生物钟接受下丘脑视交叉上核的神经内分泌调控,但其又具有自主性。环境因素引起的生物钟紊乱会严重损害雌性动物的生殖能力,导致一系列相关的卵巢疾病。另外,生物钟还与卵巢衰老密切相关。基于已有的研究,本文着重阐述卵巢生物钟在卵泡发育、排卵和类固醇生成的作用机制,以及生物钟与卵巢衰老的最新研究进展。还介绍了几种常见的由生物钟紊乱引起的生殖能力下降的卵巢疾病。

关键词：生物钟昼夜节律卵巢生殖能力

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中国狼的种内系统发育关系与亚种分化

东北林业大学学报 2003年第5期31卷 81-83页

作者：罗理杨金煜杨公社西北农林科技大学杨凌712100 东北林业大学

通过对来自 5个地区、11个亚地区的 4 3个中国狼 (Canislupuschanco)样品的mtDNA分析 ,得到了 14个单倍类型。应用Mega 2 .1计算机软件包构建了NJ树。系统树的拓扑图显示 ,中国狼的母系群体来源于两个世系 ,且世系 1要比世系 2古老。此... 详细信息

通过对来自 5个地区、11个亚地区的 4 3个中国狼 (Canislupuschanco)样品的mtDNA分析 ,得到了 14个单倍类型。应用Mega 2 .1计算机软件包构建了NJ树。系统树的拓扑图显示 ,中国狼的母系群体来源于两个世系 ,且世系 1要比世系 2古老。此外 ,无论是在亚地区还是在地区的群体间 ,都存在明显的基因交流 ,使得地区间和地区内群体的遗传分化不明显。但是 ,结合序列分析、拓扑结构图和遗传距离分析认为 ,青藏和西南群体与我国其它地区群体具有等同的分类地位。

关键词：中国狼系统发育亚种分化 mtDNA分析单倍类型计算机软件包系统树拓扑图显示遗传分化