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基于噬菌体展示技术筛选和鉴定人源性HPV18VLP中和抗体

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基于噬菌体展示技术筛选和鉴定人源性HPV18VLP中和抗体

作者：顾亚茹重庆理工大学

学位级别：硕士

[目的]构建人源性Fab噬菌体抗体库,筛选出与HPV18VLP特异性结合的人源性Fab抗体,为HPV18中和抗体研发及基于抗原抗体复合物结构学指导的HPV疫苗设计提供参考。[方法]1.从接种人乳头瘤病毒（HPV）疫苗的15名女性的外周血中分离出外周血... 详细信息

[目的]构建人源性Fab噬菌体抗体库,筛选出与HPV18VLP特异性结合的人源性Fab抗体,为HPV18中和抗体研发及基于抗原抗体复合物结构学指导的HPV疫苗设计提供参考。[方法]1.从接种人乳头瘤病毒（HPV）疫苗的15名女性的外周血中分离出外周血单个核细胞（PBMC）,并从中提取总RNA,进行反转录以制备c DNA。以此c DNA为模板分别扩增抗体重链和轻链的可变区序列,并以p Comb3XTT和p Comb3XLambda噬菌体质粒为模板,扩增抗体重链和轻链的恒定区。2.通过重叠延伸PCR技术,将抗体重链的可变区与恒定区连接,同时将轻链的可变区与恒定区连接,形成了Fd重链和λ/κ轻链。再以Fd重链和λ/κ轻链作为模板,进行进一步的重叠延伸PCR,最终获得完整的Fab基因片段。将Fab片段连接至p Comb3XTT噬菌体质粒中,通过电转化的方式将其导入大肠杆菌XL1-Blue并以辅助噬菌体VCSM13进行超感染,以构建人源性Fab噬菌体抗体库。3.以纯化的HPV18VLP作为抗原进行亲和筛选,通过四轮筛选,富集特异性结合HPV18VLP的噬菌体抗体。采用Phage-ELEIA法对第三轮和第四轮筛选后的噬菌体抗体进行鉴定,并对获得的阳性克隆进行可溶性表达。利用Western-Blot和免疫组化技术鉴定获得的VLP18-Fab抗体的特异性,采用BLI技术评估该VLP18-Fab抗体的亲和力,并通过人乳头瘤病毒假病毒中和实验验证该VLP18-Fab抗体的中和活性。4.使用人工智能结构解析工具Alphafold2对VLP18-Fab抗体及HPV18VLP重组抗原的三维结构进行预测,并利用Discovery Studio模拟了抗体与抗原结合复合物的结构,以及锚定抗体与抗原结合的潜在表位。[结果]1.成功构建了库容量为4.91×10～9的Fabλ噬菌体抗体库和库容量为2.92×10～9的Fabκ噬菌体抗体库,通过PCR鉴定和酶切鉴定,阳性率均达到了100%。基因序列分析,Fabλ和Fabκ噬菌体库的同源性分别66.84%和56.65%。2.用纯化的HPV18VLP作为抗原,Fabλ噬菌体抗体库四轮筛选后,同源性增加为80.82%;Fabκ噬菌体抗体库四轮筛选后,同源性增加为82.22%。将Fabλ噬菌体抗库中序列一致且阳性值最高的单克隆转入大肠杆菌HB2151进行周质空间表达,SDS-PAGE电泳检测表明VLP18-Fab抗体成功表达,且分子量约为42 k Da。***-Blot、免疫组化鉴定结果显示VLP18-Fab抗体可以特异性结合HPV18VLP抗原,BLI结果显示出微摩尔级亲和力(KD值为1.002×10 M),假病毒中和实验显示VLP18-Fab抗体组与对照组相比,中和活性显著增强（P<0.0001）。4.将Alphafold2预测的VLP18-Fab抗体与HPV18VLP抗原PLDD评分值最高的三维结构,用Discovery Studio预测抗体与抗原的结合表位结果显示VLP18-Fab抗体与抗原上Ser、Ile、Phe、Tyr、His、Phe、Gly、Leu、Pro、Asp、Asn、Ser、Ile、Glu、Lys、Phe、Ser 、Leu、Asp、Leu、Asp、Gln、Asp、Leu、Leu、Arg、Thr、Ile、Arg、Lys、Arg、Ser氨基酸序列结合。[结论]成功构建人源特异性Fab噬菌体抗体库,并从中筛选到1株与HPV18VLP特异性结合的Fab抗体,该抗体还表现出强大的中和活性。此外,利用Discovery Studio对抗体与抗原的结合表位进行了模拟。总体而言,研究结果强调了噬菌体展示的抗体库技术筛选中和抗体的潜力,并为HPV疫苗的设计提供了指导意义。

关键词：噬菌体展示技术宫颈癌中和抗体分子对接

时间轴上具有次线性中立项的二阶动力方程的振动性

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数学的实践与认识 2024年第6期54卷 225-230页

作者：赵春茹梧州学院广西机器视觉与智能控制重点实验室广西高校智能软件重点实验室广西梧州543002

利用时间轴上的微积分理论和广义黎卡提变换以及不等式技巧,研究了一类具有次线性中立项的二阶动力方程的振动性,建立了该类动力方程的一些新的振动准则,推广且丰富了已有文献中的结果,并给出应用实例.

关键词：振动性二阶动力方程次线性中立项时间轴

复杂环境下含电动汽车的多区域电力系统容错负荷频率控制

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复杂环境下含电动汽车的多区域电力系统容错负荷频率控制

作者：梁瑜茹西安理工大学

学位级别：硕士

在通信技术不断革新的背景下,现代电力系统逐渐发展为由多个子区域所构成的复杂系统。伴随着电力系统整体复杂性的提升,系统频率稳定问题日益凸显其重要性。鉴于电动汽车的大规模渗透以及车到网技术的发展,电动汽车可看作一种可控负载,... 详细信息

在通信技术不断革新的背景下,现代电力系统逐渐发展为由多个子区域所构成的复杂系统。伴随着电力系统整体复杂性的提升,系统频率稳定问题日益凸显其重要性。鉴于电动汽车的大规模渗透以及车到网技术的发展,电动汽车可看作一种可控负载,为电力系统提供辅助调频服务。此外,电力系统通常运行在极端环境(如高压、高磁场)中,这些条件极大地提升了系统控制回路部件故障的风险。同时,由于采用开放式网络进行信号通信,电力系统面临来自网络攻击的威胁和风险,并且当系统发生大量的数据通信时,有限的网络信道带宽会导致网络拥塞,对系统稳定性构成了考验。因此,针对上述挑战,制定可靠的控制策略以确保系统频率稳定是本文的核心工作。本文主要工作内容如下:(1)针对含电动汽车的多区域电力系统中执行器故障问题,设计了一种容错负荷频率控制器。首先,考虑到电动汽车电池荷电状态(Stateof Charge,SOC)变化所带来的不确定性因素和系统存在执行器故障,建立了一种执行器故障下含电动汽车的多区域电力系统模型。然后,利用滑模观测器所得估计值设计了容错负荷频率控制器,并结合李雅普诺夫-克拉索夫斯基(Lyapunov-Krasovskii,L-K)泛函法对电力系统稳定性进行分析。最后,通过仿真验证了该方案能有效减少执行器故障对系统稳定运行造成的影响。(2)针对含电动汽车的多区域电力系统中欺骗攻击和传感器故障问题,设计了一种欺骗攻击下容错负荷频率控制器。首先,针对一种基于频率触发的欺骗攻击,构建了传感器故障和欺骗攻击下含电动汽车的多区域电力系统模型。然后,利用滑模观测器对系统状态和传感器故障值进行同时估计,并利用估计值设计了容错负荷频率控制器。最后,基于L-K泛函法分析了电力系统稳定性,并通过仿真验证了该方案能有效减少传感器故障和欺骗攻击对系统安全稳定运行造成的影响。(3)针对含电动汽车的多区域电力系统中通信通道带宽有限和传感器故障问题,设计了一种事件触发下容错负荷频率控制器。首先,建立了传感器故障下含电动汽车的多区域电力系统模型。然后,设计了一种基于记忆的自适应混合事件触发机制,并将事件触发机制和容错负荷频率控制相结合。最后,基于L-K泛函法建立了电力系统稳定性判据,并通过仿真验证了该方案能在减少传感器故障对系统稳定运行造成影响的同时节约网络通信资源。

关键词：多区域电力系统负荷频率控制容错控制欺骗攻击事件触发机制

对外汉语初级综合课寓言故事教学设计研究 ——以泰国芭堤雅明满学校六年级中文课堂为例

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对外汉语初级综合课寓言故事教学设计研究 ——以泰国芭堤雅明满...

作者：韩青茹浙江科技大学

学位级别：硕士

寓言是对外汉语教学的一项重要内容,具有语言和文化的双重教育意义,学习寓言不仅可以扩大学生的汉语词汇量,提高汉语交际与书面表达的能力,更能够帮助学生从中更好地了解和学习相关的文化知识。本文以寓言故事作为研究对象,将研究范围... 详细信息

寓言是对外汉语教学的一项重要内容,具有语言和文化的双重教育意义,学习寓言不仅可以扩大学生的汉语词汇量,提高汉语交际与书面表达的能力,更能够帮助学生从中更好地了解和学习相关的文化知识。本文以寓言故事作为研究对象,将研究范围锁定在《汉语》教材第六册中涉及到的寓言课文,从寓言的特点入手,明确寓言在对外汉语教学中特有的教学意义,并以相关的资料分析为基础,对该校六年级中文课及中文课堂中寓言课文教学情况作出调查与分析,设计对外汉语初级阶段寓言故事教学方案,之后根据教师和学生的反馈以及教师的课堂实践作出反思,并且对相应的问题提出建议。本文主要分为六部分:第一部分为引言,主要阐述了本选题的缘由、意义,分析了国内外关于寓言教学的研究现状,提出本文的研究方法。第二部分为寓言与其对外初级汉语教学的意义,笔者从寓言的定义、特点等基本理论的介绍入手,阐述了寓言在对外初级汉语教学中的教学和教育价值。第三部分为对寓言教学情况的教学现状调查及分析。主要对该校“中文课”上寓言课文教学现状从学生汉语学习情况、“中文课”学习现状和寓言课文教学相关情况三方面进行调查及分析,得出三点内容:一是学生普遍对于以寓言题材改编的课文更感兴趣,尤其是其中的故事情节和人物角色;二是学生希望教师在寓言课堂上能够组织丰富的教学活动;三是学生普遍对寓言故事蕴含的寓意难以理解,并且学习程度一般。第四部分为寓言课文教学设计。根据教学对象、使用教材、教学原则等方面的分析,并依据第三部分调查得来的结果作出针对性的寓言教学设计,分为激发学生兴趣点的课堂导入设计、组织丰富课堂活动的课文学习设计和加深文化理解的寓意学习设计三方面的教学设计;第五部分为具体的教学设计案例,对《刻舟求剑》和《乌鸦喝水》两篇寓言故事分别进行教学设计;第六部分为教学设计反思,根据教师及学生反馈分析本教学设计的优点及不足,并针对教学设计的不足给出相应的解决对策。

关键词：寓言寓言故事泰国对外汉语综合课教学设计

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欠驱动机械手结构设计与控制技术研究

欠驱动机械手结构设计与控制技术研究

作者：茹琛太原科技大学

学位级别：硕士

随着工业朝着精密化、智能化的方向发展,各行各业对机器人的抓取能力提出了更高的要求。末端执行器是机器人与工件直接接触的重要组成部分,在整个加工、生产和运输中都发挥着重要作用。传统的末端执行器只能完成对特定物体的抓取,具有... 详细信息

随着工业朝着精密化、智能化的方向发展,各行各业对机器人的抓取能力提出了更高的要求。末端执行器是机器人与工件直接接触的重要组成部分,在整个加工、生产和运输中都发挥着重要作用。传统的末端执行器只能完成对特定物体的抓取,具有一定的局限性,为满足机器人的多样化操作需求,迫切需要一种能够实现智能抓取、柔性装配和快速更换的智能灵巧型末端执行器。欠驱动机械手作为机器人末端执行器的一种,具有单输入多输出的特点,一直是国内外学者的热点研究课题,但多数欠驱动机械手的手掌为固定平面且末端轨迹为圆弧,抓取稳定性较差,影响整体生产效率。针对以上问题,本文设计了一种新型欠驱动机械手,主要研究内容如下:首先以欠驱动原理为理论依据,结合直线运动机构,设计出一种具有精确平行捏取、平行抓取及自适应包络抓取三种抓取模式的机械手。通过对该机械手手指、手掌和传动定位结构的设计,提高了在不同工况下的适应能力,能够完成对不同尺寸和形状物体的抓取。其次,使用D-H法建立了机械手的连杆坐标系,完成了运动学分析并对机械手的不同抓取模式进行静力学分析。以抓取圆柱型物体为例,以杆长为设计变量,以接触力大于零为约束条件,以接触力均匀性为优化目标,使用遗传算法确定手指结构尺寸参数,并在此基础上选定机械手材料,使用Solid Works和ADAMS进行抓取仿真分析,证明了结构设计和力学分析的合理性。然后,在Matlab中的机器人工具箱建立了机械手模型,并使用蒙特卡洛法确定手指的可达工作空间。基于软手指点接触模型分析机械手的最大抓取质量与抓取目标质心位置、摩擦系数和接触点之间的关系。根据机械手抓取过程中的弹射现象,确定了影响抓取稳定性的主要因素。最后,根据接触力信号反馈的控制方式对机械手的控制系统进行设计,基于Py Qt库对上位机交互页面进行搭建,实现与机械手的智能交互。对机械手系统的关键部件进行了选型及相应的I/O分配,包括微处理器、电源模块、传感器模块、电机驱动模块等。

关键词：欠驱动机械手直线运动机构精确平行捏取自适应性优化设计

新业态从业者公共服务需求分类及优先序研究 ——基于山西省J市的调查研究

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新业态从业者公共服务需求分类及优先序研究 ——基于山西省J市的...

作者：崔妍茹广西大学

学位级别：硕士

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基于核心素养的高中化学大单元教学研究

基于核心素养的高中化学大单元教学研究

作者：叶文茹伊犁师范大学

学位级别：硕士

移动环境下Leslie-Gower捕食模型的强迫行波解的存在性

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移动环境下Leslie-Gower捕食模型的强迫行波解的存在性

作者：郭庆茹山东师范大学

学位级别：硕士

本文主要研究在移动环境下的Leslie-Gower捕食模型的强迫行波解的存在性,分别考虑带有局部扩散项、非局部功能反应项以及非局部扩散项的Leslie-Gower捕食模型的强迫行波解的存在性.第一章主要介绍研究问题的背景与研究现状,以及本文的... 详细信息

本文主要研究在移动环境下的Leslie-Gower捕食模型的强迫行波解的存在性,分别考虑带有局部扩散项、非局部功能反应项以及非局部扩散项的Leslie-Gower捕食模型的强迫行波解的存在性.第一章主要介绍研究问题的背景与研究现状,以及本文的主要工作和研究意义.第二章主要考虑了在移动环境下带有局部扩散项的Leslie-Gower捕食模型的强迫行波解的存在性其中,di>0(i=1,2)分别代表被捕食者与捕食者的扩散率,α,β均大于零,ri(·)(i=1,2)分别为两个物种受环境影响的出生率.对于上述模型,我们主要考虑了在环境不断恶化即环境变化常数c>0的情况下,通过构造合适的上下解并结合单调迭代方法,证明了对于任意的环境变化的正速度,都存在一个与环境变化速度一致的非减的强迫行波解.最后我们给出了该强迫行波解的渐近行为.第三章主要研究在移动环境下带有非局部功能反应项的Leslie-Gower捕食模型的强迫行波解的存在性其中(J*u)(t,x)=∫R J(x-y)v(t,y)dy.在本章中,我们主要运用上下解方法和单调迭代方法证明了对于任意的环境变化的正速度,都存在一个与环境变化速度一致的非减的强迫行波解.最后,我们给出该强迫行波解的渐近行为.第四章主要研究在移动环境下带有非局部扩散项的Leslie-Gower捕食模型的强迫行波解的存在性其中(J*u)(t,x)=∫R J(x-y)u(t,y)dy,(J*v)(t,x)=∫R J(x-y)v(t,y)dy.在本章中,我们主要通过构造出一对合适的上下解并结合单调迭代方法,证明了对于任意的环境变化的正速度,该非局部扩散模型都存在一个与环境变化速度一致的非减的强迫行波解.

关键词： Leslie-Gower捕食模型移动环境非局部扩散项非局部反应项强迫行波解

具有恶化效应和学习效应的单机双代理调度问题研究

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具有恶化效应和学习效应的单机双代理调度问题研究

作者：杨新茹沈阳大学

学位级别：硕士

多代理调度是物流生产调度的重要组成部分,本文考虑的问题是多代理调度问题中的单机双代理调度问题。单机多代理调度问题即不同的代理商对应不同的客户需求,这些代理商在一台机器上竞争有限的资源,使得各自的目标值得到满足。在单机双... 详细信息

多代理调度是物流生产调度的重要组成部分,本文考虑的问题是多代理调度问题中的单机双代理调度问题。单机多代理调度问题即不同的代理商对应不同的客户需求,这些代理商在一台机器上竞争有限的资源,使得各自的目标值得到满足。在单机双代理调度问题中,需要设计一个调度方案,以确保在单机环境下,满足一个代理商特定约束条件的同时,实现另一代理商的目标值的最优化。具体而言,这一方案需要确保其中一个代理商的目标值不超过给定的上界,而另一个代理商的目标值则达到最优。本文从钢铁企业的热轧实际生产流程中,提炼出一类工件随加工位置呈一般线性恶化或一般线性学习效应规律,且工件正常加工时长为单位时间的单机双代理调度问题。在该问题中,热轧阶段进入冷轧厂进行冷轧的工件看作A代理,直接销售给顾客的工件看作B代理,寻求一种调度方案在满足A代理商目标值最大完工时间不大于给定上界的约束条件下,以优化B代理商的目标值最小化总加权延误工件数量。在现有的单机双代理调度问题研究中,有将A代理商目标值为最大完工时间,B代理商目标值为加权总误工数的条件结合在一起研究的,但很少有在此基础上加上恶化效应和学习效应的约束条件,文本将以上约束条件结合在一起进行研究。本文针对文中的两个调度问题设计了动态规划算法,并且为了求解B代理商目标函数最优值的上下界,设计了两个时间复杂度各异的算法。在此基础上,结合这些算法,进一步构建了一个完全多项式时间近似方案,使本文研究的单机双代理调度问题在多项式时间内可解。

关键词：单机双代理调度最大完工时间总加权延误工件恶化效应完全多项式时间近似方案