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酿酒酵母3-磷酸甘油脱氢酶基因和3-磷酸甘油酯酶基因在大肠杆菌中的共表达

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酿酒酵母3-磷酸甘油脱氢酶基因和3-磷酸甘油酯酶基因在大肠杆菌中...

作者：杜丽琴广西大学

学位级别：硕士

作为改造代谢途径获得直接转化葡萄糖生产1，3-丙二醇的基因工程菌的第一步，本论文对产甘油基因工程菌的构建做了以下研究。首先，从酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae中克隆3-磷酸甘油脱氢酶(GPD1)和3-磷酸甘油酯酶(HOR2)基因，分别... 详细信息

作为改造代谢途径获得直接转化葡萄糖生产1，3-丙二醇的基因工程菌的第一步，本论文对产甘油基因工程菌的构建做了以下研究。首先，从酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae中克隆3-磷酸甘油脱氢酶(GPD1)和3-磷酸甘油酯酶(HOR2)基因，分别构建重组质粒pSE-gpd1和pSE-hor2，然后进行两种重组基因的表达试验，一种是双表达盒法，另一种是多顺反子法。在第一种表达法中含双表达盒的重组*** JM109菌株在含1％葡萄糖的摇瓶发酵培养基中于37℃培养24小时，有甘油产生，产甘油率为1.18g／L。在第二种表达方法中以JM109为宿主的含多顺反子的重组菌株在含1％葡萄糖的摇瓶发酵培养基中于37℃培养24小时，有甘油产生，产甘油率为3.79g／L。而以BL21作为宿主时，重组菌株发酵罐发酵28小时，产甘油率为22.64g／L，葡萄糖的转化率为45.3％研究结果表明：将gpd1和hor2基因引入大肠杆菌，在大肠杆菌中构建了一条可将葡萄糖直接转化成甘油的新的代谢途径是可行的。同类研究在国内尚无报道。

关键词：甘油,3-磷酸甘油脱氢酶,3-磷酸甘油酯酶,大肠杆菌,共表达,发酵

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产甘油基因工程菌的构建

化学通报 2004年第12期67卷 925-929页

作者：杜丽琴韦宇拓黄鲲陈发忠黄日波广西大学生命科学与技术学院发酵与酶工程研究所南宁530005

利用途径工程的基本原理 ,在大肠杆菌中构建一条产甘油的新代谢途径。从酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae INVSc1菌株总 DNA克隆 3-磷酸甘油脱氢酶基因 (gpdl)和 3-磷酸甘油酯酶基因 (hor2 ) ,构建由两个杂合启动子 trc启动基因的双表... 详细信息

利用途径工程的基本原理 ,在大肠杆菌中构建一条产甘油的新代谢途径。从酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae INVSc1菌株总 DNA克隆 3-磷酸甘油脱氢酶基因 (gpdl)和 3-磷酸甘油酯酶基因 (hor2 ) ,构建由两个杂合启动子 trc启动基因的双表达盒的重组质粒 p GEM- Cgpd1- Chor2 ,后者转入E. coli JM10 9菌株 ,构建的重组菌株就具有一条直接将葡萄糖转化为甘油的新代谢途径 ,将该重组菌株以葡萄糖为底物进行摇瓶发酵 ,甘油产率为 1.18g/ L。该研究结果为进一步构建生产 1,3-丙二醇工程菌打下了基础。

关键词：甘油杂合葡萄糖构建研究结果表达重组质粒重组菌株基因工程菌磷酸

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途径工程生产1,3-丙二醇的研究进展

现代化工 2004年第11期24卷 24-26页

作者：杨登峰韦宇拓杜丽琴黄日波广西大学生物技术实验中心广西南宁530005

利用基因工程技术生产1,3-丙二醇,特别是途径工程的利用已取得了重大突破.利用生物技术生产1,3-丙二醇的成本比化学法的低25%,它将逐步实现工业化生产.介绍了一步法生产1,3-丙二醇的超级基因工程菌所需的3-磷酸甘油脱氢酶(GPD1)、甘油3... 详细信息

利用基因工程技术生产1,3-丙二醇,特别是途径工程的利用已取得了重大突破.利用生物技术生产1,3-丙二醇的成本比化学法的低25%,它将逐步实现工业化生产.介绍了一步法生产1,3-丙二醇的超级基因工程菌所需的3-磷酸甘油脱氢酶(GPD1)、甘油3-磷酸酶(GPP2)、甘油脱水酶(dhaB)和1,3-丙二醇氧化还原酶(dhaT),并对关键酶dhaB进行了分析,同时介绍了穿梭质粒和甘油-3-磷酸酶积累对生产的影响.最后,对今后的研究重点和策略进行了探讨.

关键词： 1 3-丙二醇基因工程菌途径工程甘油脱水酶

蔗糖富集环境土壤微生物宏基因组分析及蔗糖水解相关酶基因克隆

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应用与环境生物学报 2010年第3期16卷 403-407页

作者：杜丽琴庞浩胡媛媛韦宇拓黄日波广西大学生命科学与技术学院广西亚热带生物资源保护利用重点实验室南宁530005 广西科学院国家非粮生物质能源工程技术研究中心南宁530004

蔗糖水解酶是蔗糖转化生成生物质能源的关键酶,且还具有重要的转糖苷功能.针对蔗糖富集的土壤环境,利用未培养的宏基因组技术对蔗糖水解相关的酶基因进行克隆.首先使用微生态分子技术对蔗糖富集的土壤样品进行分析,在可信区间为95%的情... 详细信息

蔗糖水解酶是蔗糖转化生成生物质能源的关键酶,且还具有重要的转糖苷功能.针对蔗糖富集的土壤环境,利用未培养的宏基因组技术对蔗糖水解相关的酶基因进行克隆.首先使用微生态分子技术对蔗糖富集的土壤样品进行分析,在可信区间为95%的情况下,样品覆盖率为20%(C指数为0.2),Species richness指数为235.0,Shannon index为5.2889,说明这个蔗糖富集样品中的微生物来源具有广泛性.然后使用宏基因组技术构建这个土壤样品中微生物的DNA文库,成功构建一个包含约100000个克隆的大片段DNA Fosmid文库.对文库中的Fosmid质粒进行随机测序,发现质粒的外源DNA与已报道的DNA都没有同源性,文库所克隆的DNA都来源于仍没有被研究的微生物.使用蔗糖作为唯一碳源对文库进行筛选,获得了能水解蔗糖的克隆.在蔗糖水解能力最强的两个克隆中所包含的蔗糖水解酶与GenBank数据库中已知蔗糖酶的相似性分别为38%和68%.

关键词：宏基因组环境DNA DNA文库细菌多样性统计技术蔗糖水解酶

一株产酸性α-淀粉酶菌株的筛选、纯化及酶学性质

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应用与环境生物学报 2011年第1期17卷 95-99页

作者：谢建华师永生杜丽琴黄日波韦宇拓广西大学生命科学与技术学院南宁530005 广西亚热带生物资源保护利用重点实验室南宁530005

从南宁酒厂附近土壤中筛选到一株产淀粉酶的野生菌株GXBA-4,经革兰氏染色、芽孢染色以及16SrDNA鉴定,初步确定为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefacien）.将该菌株发酵液经过硫酸铵沉淀和凝胶过滤纯化出一种α-淀粉酶,该酶相对分... 详细信息

从南宁酒厂附近土壤中筛选到一株产淀粉酶的野生菌株GXBA-4,经革兰氏染色、芽孢染色以及16SrDNA鉴定,初步确定为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefacien）.将该菌株发酵液经过硫酸铵沉淀和凝胶过滤纯化出一种α-淀粉酶,该酶相对分子质量约为57×103;反应最适温度为40~45℃,适应温度范围广,30℃时仍具有80%以上的相对活力;最适pH为5.0,为低温酸性淀粉酶.该酶水解可溶性淀粉的产物,经HPLC检测主要是以葡萄糖,麦芽糖以及麦芽三糖为主的低聚糖,分别以α-环糊精、β-环糊精、可溶性淀粉、玉米生淀粉为底物,还原糖产物比为0：0：99：3.4,表明该酶为典型的α-淀粉酶.

关键词：芽孢杆菌酸性淀粉酶纯化酶学性质

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奥斯汀小说中的多角恋与反讽

西南学林 2013年第1期 108-116页

作者：杜丽琴刘娴昆明学院人文学院

奥斯汀一生著述不多,仅有六部小说,且每部作品都不长,而它们突显了一个共同的主题:主人公对爱情婚姻的不懈追求。细读这些作品,我们不难发现,其中的爱情故事,以多角恋为主,结局均为好事多磨,有情人终成眷属,这种情形几乎存在于每一部小...

奥斯汀一生著述不多,仅有六部小说,且每部作品都不长,而它们突显了一个共同的主题:主人公对爱情婚姻的不懈追求。细读这些作品,我们不难发现,其中的爱情故事,以多角恋为主,结局均为好事多磨,有情人终成眷属,这种情形几乎存在于每一部小说中。多角恋本身特有的张力有助于小说情节的编织,表现人性中的多种可能,可以充分满足读者的好奇心,使其做出各样的假想,在

关键词：

张爱玲小说女性意象群落研究——月、花、饰物意象

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昆明学院学报 2011年第4期33卷 106-109页

作者：杜丽琴昆明学院人文学院云南昆明650214

张爱玲围绕男女争战故事中的女性,铺写了月、花、饰物、颜色、音响、戏曲6组意象。意象间彼此关联,形成了一个类似生物群落的女性意象群落。就前3组意象而言,其中多为原型意象,反讽是常用的修辞技巧。原型意象主要是通过改造物象的形质... 详细信息

张爱玲围绕男女争战故事中的女性,铺写了月、花、饰物、颜色、音响、戏曲6组意象。意象间彼此关联,形成了一个类似生物群落的女性意象群落。就前3组意象而言,其中多为原型意象,反讽是常用的修辞技巧。原型意象主要是通过改造物象的形质进入小说,每个意象都有其独具一格的显现方式。张爱玲借助原型意象反讽,把对笔下女性的放任、容忍、宽爱、嘲讽等复杂态度隐藏在作品中,使其意蕴更加丰富。

关键词：张爱玲小说女性意象群落原型意象反讽月花饰物

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石泉水电站消力戽大修及效果

大坝与安全 1993年第2期8卷 59-63页

作者：杜丽琴石泉水电站

石泉水电站位于汉江上游,离石泉县城上游1km.控制流域面积23400km^2.河面宽150m,河床断面呈U型.坝址下游有月河大断层通过,上游有铙丰、熨斗大断裂.坝基地层为致密的黑云母石英片岩,岩性坚硬,岩层呈单斜构造,走向大致与坝轴线相同、倾... 详细信息

石泉水电站位于汉江上游,离石泉县城上游1km.控制流域面积23400km^2.河面宽150m,河床断面呈U型.坝址下游有月河大断层通过,上游有铙丰、熨斗大断裂.坝基地层为致密的黑云母石英片岩,岩性坚硬,岩层呈单斜构造,走向大致与坝轴线相同、倾向下游.坝后消力戽基础河床覆盖层厚3～5m.左侧消力戽基岩高程355～358m,右侧有深槽,覆盖层厚度10余m,基岩标高342～350m不一.

关键词：消力戽石泉水电站河床断面云母石英片岩坝轴线河床覆盖层表孔基岩标石泉县汉江上游

张爱玲小说女性意象群落研究——颜色、音响、戏曲意象

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思茅师范高等专科学校学报 2011年第4期27卷 68-72页

作者：杜丽琴昆明学院人文学院云南昆明650214

张爱玲围绕男女争战故事中的女性,铺写了月、花、饰物、颜色、音响、戏曲六个意象群落,它们彼此关联,形成一个更大的女性意象群落。就后三个群落而论,它们从不同侧面展示了"意象化"客观叙事的复杂性与多样性。颜色因其存在广泛,在小说... 详细信息

张爱玲围绕男女争战故事中的女性,铺写了月、花、饰物、颜色、音响、戏曲六个意象群落,它们彼此关联,形成一个更大的女性意象群落。就后三个群落而论,它们从不同侧面展示了"意象化"客观叙事的复杂性与多样性。颜色因其存在广泛,在小说中随处可见,承担的叙事功能最多;音响中的贩声是一个独特的叙事时间意象;戏曲则给小说带来互文性特征。

关键词：张爱玲小说女性意象群落叙事颜色音响戏曲