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全腹腔镜与腹腔镜辅助右半结肠切除术治疗右半结肠癌临床研究

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中华实验外科杂志 2024年第2期41卷 336-339页

作者：潘雪凯吴凯高官壮陈涛李炫飞方效昌冯茂辉曹翔南京医科大学附属常州第二人民医院胃肠外科常州213000 武汉大学中南医院胃肠外科武汉市腹膜癌临床医学研究中心湖北省肿瘤医学临床研究中心肿瘤生物学行为湖北省重点实验室武汉430071

目的比较全腹腔镜右半结肠切除与腹腔镜辅助右半结肠切除治疗右半结肠癌的临床效果。方法分析常州市第二人民医院2020年10月至2023年10月收治的82例施行腹腔镜下右半结肠切除术患者资料, 全腹腔镜组和腹腔镜辅助组各41例。使用t检验、χ... 详细信息

目的比较全腹腔镜右半结肠切除与腹腔镜辅助右半结肠切除治疗右半结肠癌的临床效果。方法分析常州市第二人民医院2020年10月至2023年10月收治的82例施行腹腔镜下右半结肠切除术患者资料, 全腹腔镜组和腹腔镜辅助组各41例。使用t检验、χ^(2)检验或确切概率法对比分析全腹腔镜组及腹腔镜辅助组的术中指标(手术时间、淋巴结清扫数目)及术后指标(术后排气时间、住院时长、辅助切口长度、术后疼痛程度、并发症例数), 两组比较采用t检验。结果全腹腔镜组手术时间[(152.76±8.84) min比(151.59±9.31) min, t=0.086, P>0.05]、淋巴结清扫个数[(21.27±1.52)比(21.65±1.41), t=0.065, P>0.05]、并发症发生率[19.5%(7/41)比17.1%(8/41), χ^(2)=0.085, P>0.05]与腹腔镜辅助组基本相似, 差异均无统计学意义。全腹腔镜组术后排气时间明显早于腹腔镜辅助组[(2.00±0.24) d比(3.14±0.37) d, t=11.209, P<0.01];住院时间明显短于腹腔镜辅助组[(6.03±0.24) d比(7.40±0.35) d, t=12.976, P<0.05];术后疼痛程度明显低于腹腔镜辅助组[(2.49±0.51)分比(4.32±0.47)分, t=6.101, P<0.05];辅助切口长度明显短于腹腔镜辅助组[(3.91±0.25) cm比(5.37±0.49) cm, t=16.055, P<0.01], 差异均有统计学意义。结论右半结肠癌患者行全腹腔镜右半结肠切除可有效减小辅助切口长度, 减轻术后疼痛程度, 缩短患者住院时长, 促进术后康复, 更符合快速康复理念, 疗效显著。

关键词：全腹腔镜腹腔镜辅助右半结肠切除

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人源性类器官在结直肠癌中的应用及研究进展

中华实验外科杂志 2022年第11期39卷 2282-2285页

作者：方效昌李炫飞冯茂辉武汉大学中南医院胃肠外科武汉市腹膜癌临床医学研究中心湖北省肿瘤医学临床研究中心肿瘤生物学行为湖北省重点实验室430071

类器官是一种新兴的三维培养模型,具有培养简单、稳定性好、能高度重现来源组织的特征和异质性等优点。它既可作为临床预测模型,在体外对患者进行抗癌药物筛选和敏感性测试,从而制定个性化的治疗方案;亦可以作为基础研究的工具,通过进... 详细信息

类器官是一种新兴的三维培养模型,具有培养简单、稳定性好、能高度重现来源组织的特征和异质性等优点。它既可作为临床预测模型,在体外对患者进行抗癌药物筛选和敏感性测试,从而制定个性化的治疗方案;亦可以作为基础研究的工具,通过进行自身基因编辑和修饰研究,或结合气-液界面培养法和微流控技术研究,探索结直肠癌发生发展分子机制及寻找潜在治疗靶点。本文就结直肠癌类器官在临床应用和基础研究中的现状和进展作一综述。

关键词：类器官结直肠癌转化医学肿瘤微环境类器官芯片

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结直肠癌免疫检查点治疗现状与展望

中华实验外科杂志 2022年第10期39卷 2037-2039页

作者：束琳李炫飞冯茂辉武汉大学中南医院胃肠外科武汉市腹膜癌临床医学研究中心湖北省肿瘤医学临床研究中心肿瘤生物学行为湖北省重点实验室 430071

免疫检查点抑制剂(ICIs)的出现,开启了肿瘤免疫治疗的新时代。对于高度微卫星不稳定(MSI-H)结直肠癌患者,ICIs往往有较好疗效,其临床应用也逐渐从晚期后线移至一线治疗;然而对于微卫星稳定(MSS)结直肠癌患者,ICIs单药并无明显作用。近年... 详细信息

免疫检查点抑制剂(ICIs)的出现,开启了肿瘤免疫治疗的新时代。对于高度微卫星不稳定(MSI-H)结直肠癌患者,ICIs往往有较好疗效,其临床应用也逐渐从晚期后线移至一线治疗;然而对于微卫星稳定(MSS)结直肠癌患者,ICIs单药并无明显作用。近年来,随着ICIs联合放化疗等治疗方案的应用,ICIs治疗MSS型结直肠癌患者效果得到改善。本文拟对近年来免疫检查点治疗在结直肠癌上的应用进行总结与展望。

关键词：结直肠癌免疫检查点抑制剂高度微卫星不稳定

应用生物信息学方法对着丝粒蛋白L进行泛癌中的免疫分析

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中华实验外科杂志 2022年第4期39卷 707-709页

作者：王芬康金麟李炫飞冯茂辉周福祥武汉大学中南医院肿瘤放化疗科湖北省肿瘤医学临床研究中心肿瘤生物学行为湖北省重点实验室 430071 武汉大学中南医院胃肠外科武汉市腹膜癌临床医学研究中心 430071

目的探究着丝粒蛋白L(CENPL)在泛癌中的表达,并研究CENPL表达与免疫浸润之间的关系。方法通过人类蛋白质图谱(HPA)和TIMER数据库探讨CENPL在人体正常组织及33种癌症类型中的基因表达情况。应用R语言计算了33种癌症的免疫细胞浸润、ESTIM... 详细信息

目的探究着丝粒蛋白L(CENPL)在泛癌中的表达,并研究CENPL表达与免疫浸润之间的关系。方法通过人类蛋白质图谱(HPA)和TIMER数据库探讨CENPL在人体正常组织及33种癌症类型中的基因表达情况。应用R语言计算了33种癌症的免疫细胞浸润、ESTIMATE评分、肿瘤突变负荷(TMB)、微卫星不稳定性(MSI)及免疫检查点基因相关性。结果CENPL的mRNA表达水平在16种肿瘤中高于相对应的癌旁组织(P<0.01)。CENPL表达与31种肿瘤中的免疫细胞浸润相关(P<0.05)。此外,CENPL的表达水平与免疫评分相关性最高的肿瘤是肾上腺皮质癌(R=-0.43,P<0.01);基质评分相关性最高的肿瘤是睾丸癌(R=-0.43,P<0.01);免疫综合评分相关性最高的肿瘤是肾上腺皮质癌(R=-0.39,P<0.01)。CENPL表达与18种肿瘤的TMB呈正相关,与2种癌症的TMB呈负相关。CENPL表达与5种癌症的MSI呈正相关,与3种癌症的MSI呈负相关(P<0.05)。在肾透明细胞癌中,CENPL的表达与40个免疫检查点的表达具有显著相关性(P<0.05),差异有统计学意义。结论CENPL在泛癌中表达升高,与多种癌症的免疫浸润相关。

关键词：着丝粒蛋白L 泛癌免疫浸润

蛋白激酶D-1调控神经内分泌肿瘤细胞上皮-间充质转化的机制

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中华实验外科杂志 2022年第11期39卷 2141-2145页

作者：束琳陈天亮姜毅楠石东东李炫飞武汉大学中南医院胃肠外科武汉市腹膜癌临床医学研究中心湖北省肿瘤医学临床研究中心肿瘤生物学行为湖北省重点实验室430071

目的研究蛋白激酶D-1(PKD-1)在神经内分泌肿瘤(NEN)中的表达以及PKD-1信号调控NEN细胞上皮-间充质转化(EMT)的机制,探讨其与NEN转移的相关性。方法通过免疫荧光染色和免疫组织化学染色的方法,检测人胰腺NEN组织中PKD-1以及波形蛋白(Vime... 详细信息

目的研究蛋白激酶D-1(PKD-1)在神经内分泌肿瘤(NEN)中的表达以及PKD-1信号调控NEN细胞上皮-间充质转化(EMT)的机制,探讨其与NEN转移的相关性。方法通过免疫荧光染色和免疫组织化学染色的方法,检测人胰腺NEN组织中PKD-1以及波形蛋白(Vimentin)、白细胞共同抗原(CD45)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达及分布,分析转移性肿瘤细胞中PKD-1的表达;通过体外培养BON细胞,分别激活和阻断PKD-1信号,或以表皮生长因子(EGF)处理细胞,以免疫荧光染色、蛋白质印迹法(Western blot)和反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)的方法,检测BON细胞中EMT相关标志物的表达,分析PKD-1信号对BON细胞EMT的调控机制。两样本间比较采用t检验,多样本间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。结果NEN组织中Vimentin+转移性肿瘤细胞有在小动脉周围聚集现象,且PKD-1在NEN肿瘤细胞转移过程中呈动态变化;PKD-1信号能够促进BON细胞Vimentin的表达[(56.67±1.93)%比(35.55±2.22)%,t=7.178,P<0.01]并升高PKD-1和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的磷酸化水平,EGF能刺激BON细胞发生间质样形态变化,并降低E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达(0.517±0.005比1.000±0.004,t=74.63,P<0.001)而增加Vimentin的表达(9.632±0.646比1.004±0.061,t=13.29,P<0.001)。结论NEN中PKD-1信号是调控肿瘤细胞EMT的重要机制;血管内皮细胞分泌EGF可能通过PKD-1信号诱导肿瘤细胞EMT,促进肿瘤转移。

关键词：神经内分泌肿瘤蛋白激酶D-1 上皮-间充质转化转移

胍丁胺对脓毒症小鼠的保护作用及分子机制研究

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胍丁胺对脓毒症小鼠的保护作用及分子机制研究

作者：李炫飞重庆医科大学

学位级别：硕士

目的：探讨胍丁胺对脂多糖诱导的小鼠脓毒症的保护作用及相关分子机制。方法：1、将60只成年C57BL/6小鼠随机分为正常对照组（20只，腹腔注射磷酸盐缓冲液）、LPS模型组（20只，腹腔注射LPS10mg/kg）和AGM治疗组（20只，腹腔注射LPS10mg... 详细信息

目的：探讨胍丁胺对脂多糖诱导的小鼠脓毒症的保护作用及相关分子机制。方法：1、将60只成年C57BL/6小鼠随机分为正常对照组（20只，腹腔注射磷酸盐缓冲液）、LPS模型组（20只，腹腔注射LPS10mg/kg）和AGM治疗组（20只，腹腔注射LPS10mg/kg和AGM200mg/kg），各组于制模后6h和24h分别处死10只小鼠，采集血和肝、肺、肠脏器组织标本。处死小鼠前，持续观察小鼠生命状态。2、ELISA检测血清及脏器组织匀浆中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）及白细胞介素-6（IL-6）的含量，全自动生化分析仪测定血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、总胆红素（TBil）水平，苏木精-伊红染色观察各脏器组织病理学改变，TUNEL凋亡试剂盒检测肺和小肠组织凋亡情况。3、体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞，使用胍丁胺治疗经LPS刺激的RAW264.7细胞，在不同时间点收集细胞蛋白和细胞培养上清。ELISA检测细胞上清TNF-α、IL-1β、IL-6含量，Western Blot检测胞浆p-IκB、IκB、p-p65、p65，ELISA检测胞核NF-κB p65的DNA结合活力。结果：1、LPS注射6h各组小鼠均表现为精神萎靡、蜷缩少动、禁饮食水，但其中AGM治疗组小鼠精神和活动明显好于LPS模型组。AGM治疗后能有效降低LPS所致小鼠外周血中炎症因子TNF-α（ng/ml:296.3±42.5比627.2±81.3，P<0.05）、IL-1β（ng/ml:109±12.3比264±18.8，P<0.05）、IL-6（μg/ml:11.4±1.9比23.6±2.5，P<0.05）和ALT（U/L:107.9±8.5比189.9±13.6，P<0.05）、AST（U/L:347.4±24.9比716.8±60.4，P<0.05）、TBIL（μmol/L:8.3±1.9比10.6±2.5，P<0.05）的含量，减少肝脏组织匀浆中TNF-α（ng/g:287.4±32.5比461±31.4，P<0.05）、IL-1β（pg/g:146±13.5比351±28.7，P<0.05）和NF-κB p65入核蛋白水平（NF-κB/核内参灰度值比值：0.54比0.85，P<0.05）。2、LPS注射后24h肝、肺、小肠出现明显病理改变，组织细胞肿胀、坏死、充血和炎性细胞浸润，但AGM治疗后各脏器组织损伤明显缓解。激光共聚焦显微镜观察显示LPS炎症组小鼠肺和小肠组织发生明显的凋亡，核固缩、核碎裂、核溶解，并且出现大量的DNA断裂片段，AGM治疗组脏器组织凋亡明显减少。3、体外实验中，炎性巨噬细胞在接受胍丁胺处理后，表达TNF-α、IL-1β和IL-6明显减少，IκB磷酸化受到抑制，p-p65磷酸化和入核也明显受抑，NF-κB p65的DNA结合活力明显减弱。结论：1、AGM能够抑制LPS诱导的脓毒症小鼠血清和脏器炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的产生，表明AGM具有全身抗炎作用。2、AGM能够减少LPS诱导的脓毒症时ALT、AST和TBil的产生，减轻肝、肺和小肠组织炎症损伤，抑制脏器组织细胞凋亡，表明AGM对脓毒症小鼠脏器有明显保护作用。3、胍丁胺能减少炎性巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6的表达，抑制IκB的磷酸化，阻止p-p65的磷酸化和入核，并减弱NF-κB p65的DNA结合活力，表明胍丁胺能抑制炎性巨噬细胞NF-κB信号通路的活化。

关键词：胍丁胺脂多糖细胞因子 NF-κB

短期规范化临床技能强化培训对外科基本技能水平的影响

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重庆医学 2023年第17期52卷 2693-2695页

作者：杨朝纲蔡小鹏李炫飞熊斌彭春伟武汉大学中南医院胃肠外科/肿瘤生物学行为湖北省重点实验室/湖北省肿瘤医学临床研究中心武汉430071

目的探讨短期规范化临床技能强化培训对外科基本技能水平的影响。方法选择2018年5月至2019年12月在该院胃肠外科轮转的住院医师规范化培训(简称规培)和实习医生共289人作为研究对象。对所有学员实施包括入科标准化模拟教学、临床递进式... 详细信息

目的探讨短期规范化临床技能强化培训对外科基本技能水平的影响。方法选择2018年5月至2019年12月在该院胃肠外科轮转的住院医师规范化培训(简称规培)和实习医生共289人作为研究对象。对所有学员实施包括入科标准化模拟教学、临床递进式操作培训和站式考核3部分内容的短期(3~4周)规范化临床技能强化培训,比较培训前后不同学员类别、规培年限等结扎和缝合技能评分,评估培训效果。结果在基线评估时结扎技能评分低于60分13人,缝合技能评分低于60分19人,培训后低于60分均仅有1人。培训前后规培医师结扎、缝合技能评分均高于实习医生,差异有统计学意义(P<0.001)。和入科时基线评分相比,无论学员类别、规培年限,培训后的结扎、缝合技能出科评分均明显升高(P<0.001)。结论短期规范化临床技能强化培训能提高外科基本技能水平。

关键词：技能培训外科基本技能住院医师规范化培训实习医生

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通过共表达分析抑制素βA基因表达与肠正常黏膜到腺瘤再到腺癌进展的关系

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中华实验外科杂志 2022年第10期39卷 1987-1990页

作者：孙萌郑新宇陈志芬刘小平姜毅楠张姮李炫飞华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院消化内科 430014 武汉大学中南医院胃肠外科武汉市腹膜癌临床医学研究中心湖北省肿瘤医学临床研究中心肿瘤生物学行为湖北省重点实验室 430071 武汉大学中南医院消化内科湖北省肠病重点实验室肠病湖北省临床研究中心 430071 武汉大学中南医院病理科 430071

目的寻找与肠正常黏膜(NOR)到结直肠腺瘤(CRA)再到结直肠癌(CRC)的进展密切相关的基因。方法利用数据集GSE37364(包括38例NOR,29例CRA及27例CRC)构建加权基因共表达网络分析(WGCNA),选择软阈值为10确保基因无尺度网络分布,构建关系矩阵... 详细信息

目的寻找与肠正常黏膜(NOR)到结直肠腺瘤(CRA)再到结直肠癌(CRC)的进展密切相关的基因。方法利用数据集GSE37364(包括38例NOR,29例CRA及27例CRC)构建加权基因共表达网络分析(WGCNA),选择软阈值为10确保基因无尺度网络分布,构建关系矩阵转换为邻接矩阵,进一步构建拓扑重叠矩阵鉴定与疾病进展相关的基因模块并寻找其枢纽(Hub)基因。对Hub基因在数据集GSE20916中进行单因素方差分析及组间t检验,数据集GSE14333中进行t检验,以确认Hub基因与疾病进展的相关性。结果筛选出1858个差异表达基因进行分析,确定一个重要的基因模块(黄色模块)和该模块中的4个Hub基因:抑制素βA(INHBA)、趋化因子配体8(CXCL8)、趋化因子配体1(CXCL1)、CCAAT增强子结合蛋白(CEBPB),进一步线性回归分析发现INHBA与疾病进展高度相关(R^(2)=0.793)。基因富集分析表明,该模块中的INHBA主要参与细胞增殖的调控。在GSE20916数据集中进行分析,INHBA在NOR、CRA、CRC中表达分别为2.732±0.1441、2.81±0.1347、2.946±0.1603,INHBA表达与NOR至CRA再至CRC的进展密切相关(F=16.99,P<0.0001),在CRA及CRC表达均高于NOR(P<0.05),在CRC中表达高于CRA中表达(P<0.01)。在数据集GSE14333中,INHBA表达在Dukes分期A、B、C、D期CRC中表达分别为9.658±1.349、10.32±1.105、10.56±1.234、10.26±1.26,Dukes分期B、C、D中INHBA表达均高于Dukes分期A期CRC,差异有统计学意义(P<0.05),在B、C、D期中表达差异无统计学意义。结论通过共表达分析发现INHBA可能通过调节细胞增殖与NOR、CRA和CRC的进展有关。

关键词：结直肠癌抑制素βA 共表达分析加权基因共表达网络分析

微小RNA-6791-5p靶向磷酸呋喃酸性簇分选蛋白2抑制结直肠癌增殖、迁移和侵袭

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中华实验外科杂志 2023年第9期40卷 1769-1772页

作者：孙率真何梓芸裴富雍李炫飞冯茂辉姜毅楠程伏林武汉大学中南医院胃肠外科、武汉市腹膜癌临床医学研究中心、肿瘤生物学行为湖北省重点实验室、湖北省肿瘤医学临床研究中心武汉430071

目的探讨微小RNA(miR)-6791-5p对人结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭功能的影响及其分子机制。方法采集培养人结直肠癌细胞系RKO、SW480、DLD1、HCT116以及人正常结肠上皮细胞NCM460。通过反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-... 详细信息

目的探讨微小RNA(miR)-6791-5p对人结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭功能的影响及其分子机制。方法采集培养人结直肠癌细胞系RKO、SW480、DLD1、HCT116以及人正常结肠上皮细胞NCM460。通过反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-6791-5p在各细胞系中的表达水平(表达倍数为0.52±0.04、0.83±0.06、0.60±0.12、0.68±0.07),并构建miR-6791-5p模拟物(miR-6791-5p mimic)及其阴性对照Negative control,并将其转染至RKO细胞。使用RT-qPCR检测miR-6791-5p和PACS2 mRNA的表达水平(表达倍数为0.468±0.032)。利用蛋白质印迹法(Western blot)检测PACS2蛋白的表达水平[RKO:(51.590±6.018)%]。使用两样本t检验进行统计分析,结果以均数±标准差(±s)表示,以P<0.05为差异有统计学意义。结果miR-6791-5p在人结直肠癌细胞系表达水平显著低于人结肠上皮细胞,其中RKO和DLD1下调最明显(RKO组低于460组:0.52±0.04比1.00、DLD1组低于460组0.60±0.12比1.00),差异有统计学意义(RKO:t=17.811,P<0.0001;DLD1:t=5.372,P<0.01)。RKO转染后,mimic组miR-6791-5p表达水平高于mimic NC组(3.28±0.44比1.00),差异有统计学意义(RKO:t=8.764,P<0.01)。细胞计数试剂(CCK-8)检测表明mimic组24、48、72、96 h细胞吸光度值显著低于mimic NC组(24 h吸光度值为0.185±0.004比0.250±0.030,48 h吸光度值为0.275±0.040比0.376±0.020,72 h吸光度值为0.497±0.120比0.657±0.010,96 h吸光度值为0.691±0.004比0.905±0.019),差异有统计学意义(RKO:t=10.821,P<0.01)。平板克隆实验表明mimic组集落形成数低于mimic NC组(115.70±12.51比176.00±19.18),差异有统计学意义(RKO:t=4.581,P<0.05)。划痕愈合实验显示miR-6791-5p mimic组划痕愈合率低于NC组[(14.960±0.848)%比(36.480±1.340)%],差异有统计学意义(t=23.491,P<0.0001)。Transwell迁徙和侵袭实验显示穿透微孔膜的细胞数mimic组低于mimic NC组(迁移数目miR-6791-5p mimic组比NC组42.330±3.512比125.700±7.760,侵袭数目分别为54.33±4.16比159.30±7.76),差异有统计学意义(Transwell迁移t=16.931,P<0.01)、(Transwell侵袭t=20.641,P<0.01)。在线靶预测软件(miRWalk、mirtarbase、targetscan)预测miR-6791-5p可能的靶基因,并通过qRT-PCR及Western blot验证,mimic组PACS2的mRNA及蛋白表达水平低于mimic NC组[比例为(51.590±6.018)%比1.00],差异有统计学意义[mRNA(RKO:t=27.951,P<0.0001);Western blot(RKO:t=13.931,P<0.001)]。结论miR-6791-5p在结直肠癌细胞中低表达,过表达miR-6791-5p能抑制结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,并且明显下调PACS2的mRNA和蛋白表达水平,说明miR-6791-5p可能通过PACS2调控结直肠癌增殖、迁移及侵袭能力。

关键词：结直肠癌微小RNA 磷酸呋喃酸性簇分选蛋白2