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小鼠精原细胞体外培养特性及冷冻保存

小鼠精原细胞体外培养特性及冷冻保存

作者：李学家西北农林科技大学

学位级别：硕士

精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是精子发生的干细胞,是成年动物体内具备自我更新和多向分化潜能的二倍体永生细胞群。十几年来,SSCs移植技术的发展为SSCs的相关研究提供了极大便利,使SSCs的研究更加深入。为了给小鼠SSCs... 详细信息

精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是精子发生的干细胞,是成年动物体内具备自我更新和多向分化潜能的二倍体永生细胞群。十几年来,SSCs移植技术的发展为SSCs的相关研究提供了极大便利,使SSCs的研究更加深入。为了给小鼠SSCs的体外分化、转基因、移植等体外操作提供理论依据和技术方法,本研究主要进行了小鼠精原细胞(含SSCs)的体外培养特性及冷冻保存研究。结果如下: 1、为研究小鼠精原细胞的体外存活、增殖特性,优化其体外培养体系,本实验利用7日龄昆白系小鼠睾丸,一步酶法分离获得生精上皮单细胞悬液(主要含精原细胞和支持细胞),分别接种于D-MEM、D-MEM/F12和KSOM后系统研究了精原细胞的存活和增殖情况。结果显示,小鼠精原细胞在D-MEM和D-MEM/F12中均能存活并增殖,表现为在培养的第1天/1天呈逐渐减少趋势,第93天/82天呈增殖趋势,第17天/16天以后增殖减缓,而小鼠精原细胞在KSOM中只短暂存活不能增殖。 2、为摸索小鼠精原细胞单细胞形式以及功能性结构形式(曲细精管和完整睾丸)冷冻保存方法,本实验以10% DMSO为冷冻保护剂,对生精上皮单细胞、曲细精管及完整睾丸进行了-70℃冷冻保存,同时对生精上皮单细胞进行了液氮冷冻保存,并对冻存后细胞进行了培养。结果显示,完整睾丸、曲细精管及生精上皮单细胞经1周冻存复苏后细胞存活率分别为85.75±2.24%、93.28±0.37%和90.21±0.89%,曲细精管经2周冻存复苏后细胞存活率为91.27±0.39%,生精上皮单细胞经2周、1个月和3个月液氮冻存复苏后细胞存活率分别为91.17±1.47%、90.51±1.34和89.73±2.51%。复苏后精原细胞培养第10天出现旺盛增殖行为。 3、为探索小鼠精原细胞的纯化方法,验证小鼠精原细胞无饲养层培养的可行性。本实验用机械震摇法对处于旺盛增殖期的精原细胞集落进行了纯化,并分别接种于未包被培养板及明胶包被培养板后进行培养,详细观察了精原细胞的培养特性。结果显示,该纯化方法效果较为理想,纯化的精原细胞在无饲养层培养(包被或不包被培养板)条件下能够存活205天,但未观察到明显的增殖现象,集落中精原细胞形态(由外周到中心)由圆形或微卵圆形逐渐演化为带尾的精子样细胞,表现出分化迹象。

关键词：小鼠精原细胞培养冷冻保存

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猴中暑的防治

中国兽医杂志 2009年第1期45卷 79-80页

作者：陈子亮李学家刘晓明华南灵长类研究开发中心广东广州510555

1 病因造成实验猴中暑的主要原因:(1)室外温度在40℃以上.(2)猴舍内通风不良,温度大,闷热.

关键词：实验猴中暑防治室外温度通风不良饲养密度长途运输适应能力

通脉活血方联合低分子肝素钙预防髋部手术后下肢深静脉血栓形成的临床研究

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中国中医急症 2015年第2期24卷 227-230页

作者：李学家汤伟忠上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院上海200437

目的观察通脉活血方预防髋部手术后患者下肢深静脉血栓形成(LDVT)的临床疗效。方法将60例患者随机分为试验组和对照组各30例,对照组予低分子肝素钙7 d,试验组在对照组基础上加用通脉活血方,两组疗程均为14 d。结果治疗后试验组下肢深静... 详细信息

目的观察通脉活血方预防髋部手术后患者下肢深静脉血栓形成(LDVT)的临床疗效。方法将60例患者随机分为试验组和对照组各30例,对照组予低分子肝素钙7 d,试验组在对照组基础上加用通脉活血方,两组疗程均为14 d。结果治疗后试验组下肢深静脉血栓形成疑似诊断发生率低于对照组(P<0.05);治疗后试验组D-Dimer低于对照组(P<0.01);治疗后试验组凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶时间(APTT)均较对照组延长(P<0.05或P<0.01);治疗后试验组患肢VAS评分无疼痛者占86.67%,高于对照组的66.66%(P<0.01);治疗后试验组大腿周径差值低于对照组(P<0.01)。结论通脉活血方可以降低髋部手术后患者血浆D-二聚体水平;延长其PT、APTT;减轻患肢水肿、改善下肢疼痛症状;降低LDVT的疑似发生率。

关键词：髋部手术下肢深静脉血栓低分子肝素钙通脉活血方

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非人灵长类动物精原干细胞研究进展

中国比较医学杂志 2009年第11期19卷 70-75页

作者：李学家彭白露刘晓明华南濒危动物研究所灵长类研究开发中心广州510555

精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是维持精子发生的一类干细胞,由于与人亲缘关系的相近性,使得开展非人灵长类动物SSCs研究具有重要的理论意义和比较医学价值。本文综述了非人灵长类动物SSCs的生物学特性、鉴定方法、冷冻保... 详细信息

精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是维持精子发生的一类干细胞,由于与人亲缘关系的相近性,使得开展非人灵长类动物SSCs研究具有重要的理论意义和比较医学价值。本文综述了非人灵长类动物SSCs的生物学特性、鉴定方法、冷冻保存、移植及生精细胞缺失模型建立等方面的研究进展。

关键词：非人灵长类精原干细胞

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1例猕猴尿潴留的诊断与治疗方法初探

中国兽医杂志 2013年第9期49卷 78-79页

作者：陈子亮李学家蔺涛饶军华广东蓝岛生物技术有限公司广东广州510555

本文详细阐述了1只雄性猕猴的尿潴留诊断及治疗方案。在诊断过程中,采取了兽医临床诊断结合实验室检验的综合诊断措施;在治疗过程中,采取了膀胱穿刺排尿和抗生素全身抗菌治疗的综合治疗方案,从而使病猴得以快速治愈;对康复猴的行为、采... 详细信息

本文详细阐述了1只雄性猕猴的尿潴留诊断及治疗方案。在诊断过程中,采取了兽医临床诊断结合实验室检验的综合诊断措施;在治疗过程中,采取了膀胱穿刺排尿和抗生素全身抗菌治疗的综合治疗方案,从而使病猴得以快速治愈;对康复猴的行为、采食情况进行观察,并对其血液生化指标进行检测,以确认病猴完全康复。本文所提出的方案为实验猴尿潴留的诊断和治疗提供了成功的范例,值得在国内其他实验猴生产及科研单位推广应用。

关键词：猕猴尿潴留诊断治疗

高能量膳食对中老年食蟹猴糖尿病相关基因表达的影响

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动物学杂志 2012年第6期47卷 112-118页

作者：张秀娟李学家季芳靳丽莎孙云霄刘晓明周彤饶军华彭白露广东省昆虫研究所广州510260 广东蓝岛生物技术有限公司广州510555 南方医科大学广州510515

本研究选择空腹血糖值(FPG)在正常范围内(3.20 mmol/L≤FPG0.05)。基因表达水平上,诱高血糖组和正常血糖组均有血管紧张素转换酶基因(ACE)、肝糖原磷酸化酶基因(PYGL)、水通道蛋白基因(AQP2)等19个基因的mRNA表达量在高能量膳食诱导前... 详细信息

本研究选择空腹血糖值(FPG)在正常范围内(3.20 mmol/L≤FPG0.05)。基因表达水平上,诱高血糖组和正常血糖组均有血管紧张素转换酶基因(ACE)、肝糖原磷酸化酶基因(PYGL)、水通道蛋白基因(AQP2)等19个基因的mRNA表达量在高能量膳食诱导前后存在显著差异(P<0.05),且基因的表达模式变化一致,但诱高血糖组的mRNA表达量变化大,且三磷酸腺苷柠檬酸裂解酶(ACLY)、选择素L(SELL)、突触相关蛋白23(SNAP23)、突触融合蛋白(STX4)这4个基因的mRNA表达水平仅在诱高血糖组高能量膳食诱导前后呈差异表达(P<0.05)。

关键词：食蟹猴 2型糖尿病外周血白细胞基因表达

补肾活血汤对激素性股骨头坏死模型大鼠神经肽Y系统的影响

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中医杂志 2021年第14期62卷 1247-1252页

作者：黄季红朱波李学家李勃冯圣一李建民陈师黎上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院上海200437

目的探讨补肾活血汤治疗激素性股骨头坏死(SONFH)的可能作用机制。方法32只SD大鼠随机分为对照组、模型组、补肾活血汤组和拮抗剂组,每组8只。除对照组外,其余各组依次尾静脉注射内毒素(20μg/kg)2次和臀部肌肉注射强的松(40mg/kg)3次,... 详细信息

目的探讨补肾活血汤治疗激素性股骨头坏死(SONFH)的可能作用机制。方法32只SD大鼠随机分为对照组、模型组、补肾活血汤组和拮抗剂组,每组8只。除对照组外,其余各组依次尾静脉注射内毒素(20μg/kg)2次和臀部肌肉注射强的松(40mg/kg)3次,每次间隔24h,制备SONFH大鼠模型。末次肌肉注射24h后,补肾活血汤组大鼠给予补肾活血汤6.3ml/(kg·d)灌胃,对照组和模型组用等量生理盐水灌胃,拮抗组大鼠给予JNJ-31020028(10mg/kg)皮下注射。灌胃和皮下注射均每周3次,持续8周。采用HE染色观察股骨头病理学改变,计算空骨陷窝率及骨小梁面积占比;ELISA法检测下丘脑神经肽Y(NPY)、Y2受体(Y2R)和股骨头NPY、Y1受体(Y1R)含量;Western Blot法检测下丘脑和股骨头NPY以及股骨头B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)表达。结果HE染色可见模型组骨小梁稀疏、破坏,多见空骨陷窝和脂肪空泡,补肾活血方组和拮抗组病理损伤明显减轻;与模型组比较,补肾活血汤组和拮抗组大鼠空骨陷窝率下降,骨小梁面积占比上升(P<0.01)。与对照组比较,模型组大鼠下丘脑NPY、Y2R和股骨头NPY含量及蛋白表达升高,Bcl-2下降、Bax上升(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,补肾活血汤组和拮抗剂组大鼠下丘脑NPY、Y2R含量及蛋白表达降低,股骨头NPY含量及蛋白表达升高,Bcl-2升高、Bax降低(P<0.01)。结论补肾活血汤可改善SONFH股骨头病理损伤,其机制可能与抑制下丘脑NPY、Y2R和增加骨组织中NPY表达,提高骨组织抗凋亡能力有关。

关键词：激素性股骨头坏死补肾活血汤神经肽Y 细胞凋亡

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中老年食蟹猴群中糖尿病相关基因的表达状态

动物学研究（英文） 2011年第3期32卷 300-306页

作者：张秀娟李学家夏机良颜孙兴季芳张艳春刘晓明彭白露广东省昆虫研究所广东广州510260 广东蓝岛生物技术有限公司广东广州510555

该研究选择10岁以上健康中老年食蟹猴138只,按空腹血糖值(FPG)将其分为低血糖组、血糖正常组和高血糖组。采用全自动血液生化仪分别检测各组血清中总胆固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C... 详细信息

该研究选择10岁以上健康中老年食蟹猴138只,按空腹血糖值(FPG)将其分为低血糖组、血糖正常组和高血糖组。采用全自动血液生化仪分别检测各组血清中总胆固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平变化;采用荧光定量PCR分析食蟹猴外周血白细胞中37个糖尿病相关基因的mRNA表达情况。结果表明,血清血脂水平HDL-C、LDL-C、TCHO和TG都与FPG分组无显著相关性(P>0.05),而外周血白细胞中ACE、ACLY、PRKCB1、SLC2A4、SNAP23、VAPA、IGF2BP2、IFNG8个基因的mRNA表达水平随FPG的升高而显著上调(P<0.05)。

关键词：食蟹猴血脂外周血白细胞糖尿病基因表达

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小鼠精原细胞体外增殖与冷冻保存

农业生物技术学报 2007年第4期15卷 633-639页

作者：李学家王勇胜刘凤军刘军张涌西北农林科技大学生物工程研究所杨凌712100 西北农林科技大学生物工程研究所

利用一步酶法将7日龄昆白系小鼠睾丸分离获得生精上皮单细胞悬液(主要含精原细胞和支持细胞),分别接种于D-MEM、D-MEM/F12和KSOM后,系统研究其精原细胞的存活和增殖情况,并对生精上皮单细胞、曲细精管及完整睾丸进行了-70℃冷冻保存,同... 详细信息

利用一步酶法将7日龄昆白系小鼠睾丸分离获得生精上皮单细胞悬液(主要含精原细胞和支持细胞),分别接种于D-MEM、D-MEM/F12和KSOM后,系统研究其精原细胞的存活和增殖情况,并对生精上皮单细胞、曲细精管及完整睾丸进行了-70℃冷冻保存,同时对生精上皮单细胞进行了液氮冷冻(-196℃)保存。结果表明,小鼠精原细胞在D-MEM和D-MEM/F12中均能存活并增殖,表现为在培养的第1～9天/1～8天呈逐渐减少趋势,第9～13天/8～12天呈增殖趋势,第17天/16天以后增殖减缓,而在KSOM中只短暂存活不能增殖。生精上皮单细胞、曲细精管及完整睾丸-70℃短期(1周和2周)冷冻保存及单细胞悬液液氮短期(2周)和中长期(1和3个月)冷冻保存后,均可获得较理想的细胞存活率(均大于85%)。

关键词：小鼠精原细胞增殖冷冻保存