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青海省乌兰县与同德县鼠疫噬菌体分离及流行病学比较分析

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医学动物防制 2024年第2期40卷 113-116,121页

作者：李翔赵海红徐小青张琪李存香杨建国徐伟祁芝珍青海省地方病预防控制所青海西宁811602 青海省乌兰县疾病预防控制中心

目的对青海省乌兰县和同德县喜马拉雅旱獭采集到的鼠疫噬菌体进行分离及流行病学分析,掌握喜马拉雅旱獭鼠疫疫情的发展趋势和鼠疫防控预警。方法利用Luria-Bertani(LB)液体培养基和双层琼脂平板进行纯化,分析噬菌体裂解谱,噬菌体分离... 详细信息

目的对青海省乌兰县和同德县喜马拉雅旱獭采集到的鼠疫噬菌体进行分离及流行病学分析,掌握喜马拉雅旱獭鼠疫疫情的发展趋势和鼠疫防控预警。方法利用Luria-Bertani(LB)液体培养基和双层琼脂平板进行纯化,分析噬菌体裂解谱,噬菌体分离率比较采用t检验。结果乌兰县与同德县100份喜马拉雅旱獭肠道样品分别分离到噬菌体14株和1株,分离率为14.00%和1.00%,两地噬菌体的分离率差异有统计学意义(t=3.583,P=0.001);喜马拉雅旱獭的爪子、肝脏和脾脏样品均未分离到噬菌体。鼠疫噬菌体裂解谱结果显示,乌兰县1株噬菌体分离株仅能裂解18株鼠疫耶尔森菌,裂解率为32.73%,其他13株与同德县的1株噬菌体基本可全部裂解所选的55株鼠疫耶尔森菌,裂解率为89.09%~100.00%。结论乌兰县喜马拉雅旱獭所采集样品的鼠疫噬菌体分离率较高,符合当地动物间鼠疫疫情高发现状;同德县虽长期处于鼠疫疫情静息状态,但喜马拉雅旱獭所采集的样品分离到鼠疫噬菌体,或可间接指示该地区动物间鼠疫疫情的存在。

关键词：鼠疫噬菌体分离纯化裂解谱鼠疫疫源地乌兰县同德县流行病学分析

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鼠疫噬菌体分离技术综述

医学动物防制 2024年第5期40卷 495-498页

作者：窦艳丽祁芝珍张青雯代瑞霞冯建萍金星李存香青海省疾病预防控制中心青海西宁810007 青海省地方病预防控制所

鼠疫噬菌体作为鼠疫耶尔森菌的细菌病毒,在自然界分布广泛。鼠疫噬菌体的深入认识,将会在鼠疫鉴定与诊断、疾病预防和治疗、生态学研究、微生物进化等方面扮演重要的角色。为了获取更多的鼠疫噬菌体样本,鼠疫自然疫源地不同生物环境因... 详细信息

鼠疫噬菌体作为鼠疫耶尔森菌的细菌病毒,在自然界分布广泛。鼠疫噬菌体的深入认识,将会在鼠疫鉴定与诊断、疾病预防和治疗、生态学研究、微生物进化等方面扮演重要的角色。为了获取更多的鼠疫噬菌体样本,鼠疫自然疫源地不同生物环境因素中鼠疫噬菌体样本的规范采集、处理、保存对其质量有重要影响,鼠疫噬菌体分离培养的优化因素对自然界鼠疫噬菌体数量和种类分离率的提高发挥着重要作用。本文从野生型鼠疫噬菌体采集现场的选择、样本的保存条件、噬菌体的分离方法及其注意事项方面对野生型鼠疫噬菌体的分离技术做一综述。

关键词：鼠疫耶尔森菌噬菌体样本采集保存分离

OmniLog TM微生物鉴定系统在青海高原野生型鼠疫噬菌体宿主谱检测中的应用研究

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中国人兽共患病学报 2024年第1期40卷 21-25页

作者：李存香祁芝珍张青雯赵海红马龙游陪松杨建国吴海生冯建萍青海省地方病预防控制所/国家卫生健康委鼠疫防治研究重点实验室(共建) 西宁811602

目的采用两种微量法检测青海高原野生型鼠疫噬菌体的宿主谱,为今后噬菌体生态学研究和基于宿主范围噬菌体分类研究提供科学依据。方法基于OmniLog TM微生物鉴定系统微量法和微量点滴法,检测3株鼠疫噬菌体对2株鼠疫耶尔森菌(鼠疫疫苗株EV... 详细信息

目的采用两种微量法检测青海高原野生型鼠疫噬菌体的宿主谱,为今后噬菌体生态学研究和基于宿主范围噬菌体分类研究提供科学依据。方法基于OmniLog TM微生物鉴定系统微量法和微量点滴法,检测3株鼠疫噬菌体对2株鼠疫耶尔森菌(鼠疫疫苗株EV 76、614F)和4株非鼠疫耶尔森菌(假结核耶尔森菌PTB3、PTB5、大肠杆菌V517、小肠结肠炎耶尔森菌52302-2)的裂解情况。结果476号、087号和072204号鼠疫噬菌体均能成功感染鼠疫疫苗株EV 76、614F并依赖其生长繁殖,且基于OmniLog TM系统33℃培养48 h也能够观察到试验孔中四唑类染料颜色随着噬菌体数量的增加和宿主菌数量的减少而变淡。利用微量点滴法检测3株鼠疫噬菌体对4株非鼠疫耶尔森菌敏感性结果显示,28℃和37℃时476号鼠疫噬菌体对假结核耶尔森菌PTB5敏感,而087号和072204号对其不敏感;476号、087号和072204号鼠疫噬菌体对假结核耶尔森菌PTB3、大肠杆菌V517、小肠结肠炎耶尔森菌52302-2这3株非鼠疫耶尔森菌均不敏感,且基于OmniLog TM系统观察到试验孔与对照孔中细菌生长曲线和四唑类染料颜色分别呈现相似对应的结果。然而,以鼠疫疫苗株EV 76、614F为宿主菌,37℃时072204号鼠疫噬菌体微量点滴于固体培养基上不显示噬菌斑。结论基于OmniLog TM检测系统的噬菌体宿主范围测定法可以作为一种替代传统检测宿主谱的测定方法,在噬菌体与宿主菌相互作用研究中具有较好的应用价值。

关键词：噬菌体鼠疫菌宿主谱 OmniLog TM微生物鉴定系统点滴法

青海省杂多县鼠疫菌病原学特征及流行病学分析

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青海畜牧兽医杂志 2024年第4期54卷 24-27页

作者：张晓璐代瑞霞熊浩明辛有全杨晓艳李广辉靳娟张丽李存香青海省地方病预防控制所青海西宁810021

分析青海省杂多县鼠疫菌病原及流行病学特征,为该地区的鼠疫防控监测工作提供科学依据。对1964—1989年青海省杂多县不同宿主体内分离的21株鼠疫菌进行生化糖醇类试验、毒力因子(荚膜抗原(F1+)、毒力抗原因子(VW+)、色素沉着因子(Pgm+)... 详细信息

分析青海省杂多县鼠疫菌病原及流行病学特征,为该地区的鼠疫防控监测工作提供科学依据。对1964—1989年青海省杂多县不同宿主体内分离的21株鼠疫菌进行生化糖醇类试验、毒力因子(荚膜抗原(F1+)、毒力抗原因子(VW+)、色素沉着因子(Pgm+)、鼠疫杆菌素I(Pst1+))检测、质粒及菌株差异区段(Different region,DFR)分型等研究。结果发现:21株菌株均为青藏高原型,90.48%的鼠疫菌4个毒力因子俱全;所有菌株均携带分子质量为6×10^(6)、45×10^(6)和65×10^(6)的质粒;DFR分型结果显示,5型占90.48%,32型占4.76%,1b型占4.76%。青海省杂多县鼠疫菌具备青藏高原鼠疫病原体特性,该地区鼠疫菌毒力强,应加强鼠疫监测和宣传力度,防止鼠疫波及影响加剧。

关键词：鼠疫耶尔森菌病原学流行病学杂多县

喜马拉雅旱獭血清中鼠疫噬菌体特异性抗体检测

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医学动物防制 2024年第8期40卷 770-773页

作者：杨建国游培松张晓璐李光辉李翔李胜冯建萍金泳赵海红王永顺谷昕玥李存香国家卫生健康委鼠疫防治研究重点实验室(青海省地方病预防控制所) 青海西宁810021

目的利用微量板法间接检测青海省兴海县喜马拉雅旱獭血清中特异性鼠疫噬菌体抗体,为该地区鼠疫流行态势分析、噬菌体与哺乳动物机体免疫系统的相互作用提供理论依据。方法采用微量板法经间接血细胞凝集试验,检测497份采集于2020—2021... 详细信息

目的利用微量板法间接检测青海省兴海县喜马拉雅旱獭血清中特异性鼠疫噬菌体抗体,为该地区鼠疫流行态势分析、噬菌体与哺乳动物机体免疫系统的相互作用提供理论依据。方法采用微量板法经间接血细胞凝集试验,检测497份采集于2020—2021年青海省兴海县喜马拉雅旱獭血清中的鼠疫耶尔森菌荚膜蛋白FraI抗体,再以1株温和性鼠疫噬菌体和1株裂解性鼠疫噬菌体为抗原,采用微量板法和双层琼脂平板法间接检测喜马拉雅旱獭血清中的鼠疫噬菌体抗体。结果采用微量板法经间接血细胞凝集试验检测497份喜马拉雅旱獭血清中鼠疫耶尔森菌荚膜蛋白FraI抗体,均为阴性;其次497份血清分别与2株不同类型鼠疫噬菌体进行中和试验,基于点滴法在上述血清中均未检测到鼠疫噬菌体免疫抗体,间接提示兴海县鼠疫耶尔森菌的数量可能与特定噬菌体的出现相关。结论2010—2019年兴海县鼠疫疫源地未发现动物间鼠疫流行,喜马拉雅旱獭血清中未检出特异性鼠疫噬菌体抗体可能与当地的鼠疫流行形式和强度有关。

关键词：噬菌体喜马拉雅旱獭血清免疫抗体流行病学鼠疫

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鼠疫噬菌体的分离和生物学特性研究

鼠疫噬菌体的分离和生物学特性研究

作者：李存香中国疾病预防控制中心

学位级别：硕士

鼠疫是一种流行在啮齿动物间通过跳蚤传播的自然疫源性疾病,其病原体为鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis,简称“鼠疫菌”)。历史上鼠疫的流行曾给人类带来巨大的灾难。鼠疫噬菌体作为一种细菌病毒,寄生于鼠疫菌。在动物鼠疫流行末期和间歇... 详细信息

鼠疫是一种流行在啮齿动物间通过跳蚤传播的自然疫源性疾病,其病原体为鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis,简称“鼠疫菌”)。历史上鼠疫的流行曾给人类带来巨大的灾难。鼠疫噬菌体作为一种细菌病毒,寄生于鼠疫菌。在动物鼠疫流行末期和间歇期,从鼠疫疫源地宿主动物及其生存环境中常常可以分离出非典型鼠疫菌和／或鼠疫噬菌体。目前在鼠疫诊断“四步”检验中,人们越来越依靠噬菌体裂解实验的结果来判定鼠疫菌,甚至一些地方仅剩下噬菌体实验。因此一旦这个防线失守,整个鼠疫诊断体系将受到极大挑战。在鼠疫监测中现已发现天然的抗现有鼠疫诊断噬菌体的鼠疫菌存在。因此,制备更多鼠疫诊断噬菌体的备选对鼠疫诊断、动物鼠疫流行病学研究和鼠疫微生态研究具有重要意义。本论文包括三部分内容：(1)从模拟土壤标本中分离鼠疫噬菌体方法的建立;(2)云南省鼠疫自然疫源地野生型鼠疫噬菌体的分离和流行病学分析;(3)野生型鼠疫噬菌体YL060生物学特性鉴定。(1)采用点滴法和双层琼脂平板法分离模拟土壤中的鼠疫噬菌体,建立由土壤环境中分离鼠疫噬菌体的技术方法。实验结果表明,分别加入5μL、50μL、500μL、1000μL鼠疫诊断噬菌体的模拟土壤样本,通过点滴法检测显示其过滤液在稀释前均出现明显的噬菌斑,2g土壤样本中鼠疫噬菌体的最小检出量为30PFU。由此说明采集的环境样本中鼠疫噬菌体含量很少时,通过富集可以提高鼠疫噬菌体的分离率。(2)云南省玉龙县黄山镇和剑川县石龙村采集261份生态环境样本(包括鼠巢、鼠巢地土壤、鼠洞道土壤、鼠粪等)和鼠类样本(以鼠盲肠为主)进行鼠疫噬菌体分离。结果显示,以鼠疫疫苗株EV76为宿主菌,样本经过富集后采用点滴法和双层平板法从云南省玉龙县黄山镇采集的鼠巢中分离4株鼠疫噬菌体,从该地鼠盲肠中分离3株鼠疫噬菌体。云南省玉龙县黄山镇在2009-2014年期间动物鼠疫持续流行。本研究为国内首次从鼠疫疫源地鼠巢中分离到野生型鼠疫噬菌体,通过流行病学分析说明它跟近期的动物鼠疫流行相对应。(3)本研究选取鼠疫噬菌体YL060进行了生物学特性研究。结果显示,鼠疫噬菌体YL060电镜下形态呈蝌蚪形,头部为正多面体结构,头部直径约为60 nm左右,尾部长约140 nm左右,带有一伸缩的尾鞘,其形态符合肌尾噬菌体科特征。该噬菌体最佳感染复数为0.1;一步生长曲线显示噬菌体感染宿主菌EV76的潜伏期为50 min,暴发期为80 min,裂解量约为7.1。鼠疫噬菌体YL060宿主谱较窄,仅仅裂解鼠疫疫苗株EV76,而对其它耶尔森菌均不裂解,说明该鼠疫噬菌体有较强的特异性。理化因素敏感性试验显示,该噬菌体在pH 5.0-10.0范围内具有良好的裂解活性;50℃作用60 min后其活性基本保持不变,超过50℃其效价急剧下降;其对氯仿不敏感,5%浓度的氯仿对其活性基本没有影响;对紫外线比较敏感。提取的鼠疫噬菌体YL060 DNA进行琼脂糖凝胶电泳显示其条带大约23 kb。

关键词：鼠疫菌噬菌体分离生物学特性

1991—2000年青海省人间鼠疫流行病学分析

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中国地方病学杂志 2002年第5期21卷 431-432页

作者：李民焦巴太王丽李存香郭文涛青海省地方病预防控制所青海西宁811602

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实验感染青海田鼠血清中鼠疫FI抗体的观察

现代预防医学 2007年第4期34卷 821-821页

作者：于晓涛李存香李超幕有青海省地方病预防控制所青海省地方病预防控制所西宁 811602

[目的]观察青海田鼠血清中鼠疫FI抗体动态。[方法]间接血凝试验。[结果]实验感染青海田鼠28只,16份阳性,滴度1︰20～1︰640。[结论]青海田鼠对鼠疫菌能产生免疫力。

关键词：青海田鼠鼠疫菌 FI抗体滴度鼠疫

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分子生物学方法鉴定四川省德格县鼠疫菌株

中国人兽共患病学报 2008年第8期24卷 749-751页

作者：崔百忠金丽霞李存香青海省地方病预防控制所西宁811602

目的对四川省德格县更庆乡上压巴地区从自毙喜马拉雅旱獭体内分离到2株疑似鼠疫耶尔森氏菌(以下简称鼠疫菌)进行实验室诊断及鉴定。方法采用PCR技术,检测鼠疫菌特异基因,并进行基因分型。结果鉴定的2株菌具有鼠疫菌的特异标识序列3a和... 详细信息

目的对四川省德格县更庆乡上压巴地区从自毙喜马拉雅旱獭体内分离到2株疑似鼠疫耶尔森氏菌(以下简称鼠疫菌)进行实验室诊断及鉴定。方法采用PCR技术,检测鼠疫菌特异基因,并进行基因分型。结果鉴定的2株菌具有鼠疫菌的特异标识序列3a和鼠疫菌的质粒基因Pla、calf、LcrG;DFR谱中均缺失DFR1、DFR2、DFR13、DFR23。结论本次鉴定的2株菌均为喜马拉雅旱獭型鼠疫杆菌。

关键词：四川省鼠疫菌鉴定