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掌纤维瘤病的克隆性分析

中华病理学杂志 2006年第4期35卷 224-227页

作者：王磊朱虹光复旦大学上海医学院病理学系

目的通过人雄激素受体(HUMARA)基因位点克隆性分析技术确定掌纤维瘤病是否为肿瘤性增生。方法收集12例女性掌纤维瘤病患者的组织蜡块,连续切片、HE染色后,采用激光显微切割技术获取梭形细胞丰富的区域,1例女性直肠腺癌组织蜡块作为阳性... 详细信息

目的通过人雄激素受体(HUMARA)基因位点克隆性分析技术确定掌纤维瘤病是否为肿瘤性增生。方法收集12例女性掌纤维瘤病患者的组织蜡块,连续切片、HE染色后,采用激光显微切割技术获取梭形细胞丰富的区域,1例女性直肠腺癌组织蜡块作为阳性对照。酚-氯仿抽提DNA后,经甲基化敏感的HpaⅡ限制性内切酶消化,聚合酶链反应(PCR)扩增HUMARA基因,PCR产物经8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,凝胶成像系统分析。结果作为阳性对照的直肠腺癌被验证是单克隆起源的,说明了本实验的克隆性分析方法的有效性。12例掌纤维瘤病石蜡组织标本中,3例标本未扩增成功;1例标本的HUMARA基因为纯合子,不适于克隆性分析;其余8例标本在HpaⅡ酶切前后均显示2条条带,经凝胶成像系统软件分析2条条带的亮度相近,说明掌纤维瘤病是多克隆性增生。结论掌纤维瘤病是多克隆性增生,属于非肿瘤性增生。

关键词：结缔组织疾病受体,雄激素 X染色体失活 DNA甲基化克隆性分析

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microRNA的功能研究流程及常用技术

中华病理学杂志 2012年第12期41卷 858-861页

作者：孔辉朱虹光复旦大学上海医学院病理学系 200032

microRNA（miRNA）是一类长度为18-25nt的非编码调控性单链小分子RNA，能够在转录后水平负性调控基因表达，参与细胞的增殖、分化和凋亡等多个生物学过程，并与肿瘤的发生和转移密切相关。

关键词： microRNA 小分子RNA 调控基因表达生物学过程调控性

caveolin-1过表达抑制胰腺癌细胞的增殖和侵袭

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中华肿瘤杂志 2009年第10期31卷 732-737页

作者：韩非朱虹光复旦大学医学院病理系上海200032

目的体外研究caveolin-1对胰腺癌细胞生物学行为及相关信号通路的影响。方法caveolin-1基因脂质体法稳定转染胰腺癌细胞株panc-，筛选出稳定高表达caveolin-1的克隆，并用实时荧光定量PCR和免疫印迹法鉴定。应用四甲基偶氮唑蓝（MTI＂... 详细信息

目的体外研究caveolin-1对胰腺癌细胞生物学行为及相关信号通路的影响。方法caveolin-1基因脂质体法稳定转染胰腺癌细胞株panc-，筛选出稳定高表达caveolin-1的克隆，并用实时荧光定量PCR和免疫印迹法鉴定。应用四甲基偶氮唑蓝（MTI＂）法检测细胞的生长能力，软琼脂克隆生长实验检测细胞锚定非依赖性生长能力，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况，细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力，免疫印迹法检测表皮生长因子受体（EGFR）、c—Raf、Mek、Erk、p38和SAPK／JNK的表达。结果转染panc1细胞后筛选到3株稳定高表达caveolin-1的克隆。MTT法检测结果显示，转染后的细胞生长速度明显慢于对照组，软琼脂中克隆生长能力较对照组也明显下降。流式细胞术检测结果显示，高表达caveolin-1可使细胞阻滞在G0／G1期，并且促进细胞的凋亡。细胞侵袭实验显示，转染caveolin-1后，细胞的侵袭能力明显下降，此外，caveolin-1过表达降低了EGFR、C—Raf、Mek和Erk的磷酸化水平。结论caveolin-1基因过表达抑制了胰腺癌细胞panc1的生长和侵袭能力，对EGFR—C—Raf-Mek—Erk信号级联的抑制与其抑制胰腺癌细胞恶性表型的作用相关。

关键词： caveolin-1 胰腺肿瘤受体表皮生长因子

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免疫磁珠法富集循环肿瘤细胞研究进展

复旦学报（医学版） 2009年第3期36卷 369-371页

作者：韩晶朱虹光复旦大学上海医学院病理学系上海200032

循环肿瘤细胞富集为肿瘤的分期诊断、判断复发、分析预后和制定个体化治疗的有力向导。本文综述了免疫磁珠法富集肿瘤细胞的原理,肿瘤细胞检测的方法比较及常用的细胞表面标志物和目前临床上的实际应用方面的进展。

关键词：免疫磁珠法循环肿瘤细胞微转移

免疫组化检测广谱细胞角蛋白诊断胰腺癌淋巴结微转移灶的价值

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复旦学报（医学版） 2007年第6期34卷 899-902页

作者：韩非朱虹光复旦大学上海医学院病理学系上海200032 复旦大学附属华山医院病理科上海200040

目的以抗广谱细胞角蛋白(pan-cytokeratin,CK)单克隆抗体为第一抗体,采用免疫组化技术检测胰腺癌淋巴结微转移。方法采用连续切片方法,对54例胰腺癌患者的938个淋巴结进行CK和HE的双重染色。结果54例病人中,CK染色发现10例病人共42个淋... 详细信息

目的以抗广谱细胞角蛋白(pan-cytokeratin,CK)单克隆抗体为第一抗体,采用免疫组化技术检测胰腺癌淋巴结微转移。方法采用连续切片方法,对54例胰腺癌患者的938个淋巴结进行CK和HE的双重染色。结果54例病人中,CK染色发现10例病人共42个淋巴结出现微转移,其中有8例为常规病理诊断无淋巴结微转移的病例,漏诊率为15.3%,CK染色微转移灶检出率为4.4%(42/938),而常规HE染色阳性率仅为1.0%(10/938),两者差别有显著性意义(P<0.001)。结论常规的H-E切片检测很难发现淋巴结的微转移病灶,我们采用CK标记淋巴结的方法弥补了常规HE观察的不足,提高了胰腺癌的淋巴结转移检出率,对患者的预后判断和指导临床治疗具有重要的指导意义。

关键词：角蛋白淋巴结微转移免疫组织化学

端粒酶的研究进展,存在问题及其在病理学中的应用

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中华病理学杂志 2000年第1期29卷 58-59页

作者：朱虹光宋宜上海医科大学病理学教研室 200032

乳腺癌细胞过表达HER2/neu时经PI3K和Ras/Raf/MEK/ERK信号通路下调野生型p53蛋白含量

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中华病理学杂志 2004年第4期33卷 358-362页

作者：郑莉任加强张琳陈琦朱虹光复旦大学上海医学院病理学系上海200032

目的研究HER2/neu基因过表达对乳腺癌细胞野生型p53蛋白含量的影响并探讨其分子机制。方法脂质体介导的HER2/neu基因转染MCF7细胞,G418筛选阳性克隆。Western印迹法鉴定HER2/neu蛋白表达,并同时检测p53及信号转导分子Akt,p-Akt,p-Raf,... 详细信息

目的研究HER2/neu基因过表达对乳腺癌细胞野生型p53蛋白含量的影响并探讨其分子机制。方法脂质体介导的HER2/neu基因转染MCF7细胞,G418筛选阳性克隆。Western印迹法鉴定HER2/neu蛋白表达,并同时检测p53及信号转导分子Akt,p-Akt,p-Raf,p-MEK,p-ERK蛋白含量,以及P13K信号通路抑制剂LY294002和MEK抑制剂U0126处理对p53蛋白含量的影响。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测p53 mRNA水平。结果成功建立稳定过表达HER2/neu的MCF7细胞(MCF7-neu3),其HER2/neu蛋白表达量是对照组MCF7细胞的13倍。MCF7-neu3中p-Akt,p-Raf,p-MEK,P-ERK蛋白含量分别较MCF7细胞升高了2.5倍、2倍、1.6倍和1.6倍(P<0.01),p53蛋白含量仅为对照组细胞的40％(P<0.01),但p53mRNA表达无明显差异。在经PI3K信号通路抑制剂LY294002及MEK抑制剂U0126处理24 h后,MCF7-neu3细胞p53蛋白含量分别上升了1.7和1.5倍(P<0.01),在LY294002和U0126处理48 h后,p53蛋白含量分别升高了4.7倍和5.3倍(P<0.01)。LY294002和U0126处理对MDA-MB-453细胞突变型p53蛋白含量不产生影响。结论乳腺癌细胞中HER2/neu基因的过表达能够通过激活P13K和Ras/Raf/MEK/ERK通路导致野生型p53蛋白含量减少,可能是HER2/neu过表达乳腺癌患者预后不良及对治疗产生抗性的分子机制。

关键词：乳腺癌 HER2/neu 信号通路下调 p53 基因过表达分子机制信号转导分子 c-erbB-2 Ras/Raf/MEK/ERK

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肿瘤内皮细胞标志物8单抗的制备及组织分布

复旦学报（医学版） 2004年第5期31卷 458-461页

作者：李华张敏郑莉任加强陈琦张秀荣朱虹光复旦大学上海医学院病理学系上海200032

目的　制备特异性抗人肿瘤内皮细胞标志物 8(TEM8)单克隆抗体 ;检测TEM 8蛋白在部分肿瘤和正常组织中的分布。方法　原核表达含TEM 8膜外段多肽的融合蛋白 ,免疫Balb/c雌性小鼠后取效价较高的小鼠脾细胞与SP2 / 0骨髓瘤细胞进行细胞融... 详细信息

目的　制备特异性抗人肿瘤内皮细胞标志物 8(TEM8)单克隆抗体 ;检测TEM 8蛋白在部分肿瘤和正常组织中的分布。方法　原核表达含TEM 8膜外段多肽的融合蛋白 ,免疫Balb/c雌性小鼠后取效价较高的小鼠脾细胞与SP2 / 0骨髓瘤细胞进行细胞融合 ,以ELISA、Westernblot筛选、鉴定分泌特异性抗TEM8的单克隆杂交瘤细胞株 ;ABC免疫组织化学方法检测TEM 8蛋白表达产物在结肠癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌旁组织等组织中表达。结果　共获得 5株稳定分泌TEM 8抗体的单克隆杂交瘤细胞株 ;TEM 8在多种组织细胞表达 :结肠癌新生血管 (4 / 2 3) ,结肠癌癌性腺上皮 (8/ 2 3) ,结肠癌旁组织腺上皮 (6 / 17) ,结肠组织平滑肌 (17/ 37) ,前列腺癌腺上皮 (1/ 17)。结论　成功制备抗人TEM 8单克隆抗体 ;

关键词：肿瘤结肠癌上皮标志物内皮细胞杂交瘤细胞株前列腺癌分泌细胞融合融合蛋白