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作者：曾瑞峰上海中医药大学

学位级别：硕士

目的:进行具有二氧化硫特异性响应的荧光探针设计,并研究其与二氧化硫特异性反应后,荧光、紫外-可见光谱的变化特征,建立适合于中药材中二氧化硫残留的定性检测、定量测定方法,并将其用于动物机体内亚硫酸根离子的荧光成像检测。方法:(1... 详细信息

目的:进行具有二氧化硫特异性响应的荧光探针设计,并研究其与二氧化硫特异性反应后,荧光、紫外-可见光谱的变化特征,建立适合于中药材中二氧化硫残留的定性检测、定量测定方法,并将其用于动物机体内亚硫酸根离子的荧光成像检测。方法:(1)通过羟醛缩合反应合成基于肉桂醛荧光母核的荧光探针I和基于半花菁荧光母核的荧光探针Ⅱ。(2)考察荧光探针I和Ⅱ在水溶液中与SO反应后的紫外-可见光吸收以及荧光图谱变化,判断荧光探针是否能与二氧化硫发生特异性反应;考察不同反应条件下(不同时间、p H以及离子干扰)对荧光探针与二氧化硫特异性反应的影响,判断荧光探针能否被应用于复杂环境下二氧化硫的检测;通过荧光探针在水溶液中与不同浓度二氧化硫反应后产生的颜色差异,尝试采用比色法建立中药中二氧化硫残留量的快速检测方法。(3)以粉葛药材为例,基于探针I和Ⅱ与二氧化硫反应的紫外-可见光光谱和荧光光谱变化特性,采用荧光光谱法,建立荧光探针I用于检测中药中的二氧化硫残留量的测定方法。采用紫外-可见光吸收光谱,建立荧光探针Ⅱ用于检测中药中的二氧化硫残留量的测定方法,并进行方法学研究。(4)以酸碱滴定法和气相色谱法对12批中药中二氧化硫残留检测结果为对照,判断所建立二氧化硫荧光检测法(探针I),紫外-可见光检测法(探针Ⅱ)的准确性。(5)将荧光探针用于细胞和机体内SO的检测,采用激光共聚焦显微镜检测荧光探针与Hep G2、A549细胞和斑马鱼中不同浓度SO反应后荧光变化情况,考察探针的荧光强度变化与机体内SO的浓度的线性相关性,判断荧光探针是否能够良好的应用于检测生物体内的SO。结果:(1)成功合成了荧光探针I(1-benzyl-4-((1E,3E)-4-(4-(dimethylamino)phenyl)buta-1,3-dien-1-yl)quinolin-1-ium)和荧光探针Ⅱ(3-ethyl-1,1-dimethyl-2-(4-(4-methylpiperazin-1-yl)styryl)-1H-benzo[e]indol-3-ium),并通过H-NMR、C-NMR、LC-MS、红外光谱进行化学结构确认。(2)近红外荧光探针I可与溶液中SO化学反应后,由于探针结构中的共轭键发生变化后,其荧光光谱和紫外-可见光吸收光谱均发生明显变化,其中荧光探针I在550 nm激发光下,具有发射波长位于690 nm荧光发射光谱峰,与溶液中SO反应后,其荧光值随着反应液中SO浓度的升高而逐渐减弱,荧光变化值与样品中SO呈正比线性关系,线性范围为3.13-200μmol/L(以二氧化硫浓度计),最低检测限为0.46μmol/L。该反应在p H 6-10中能够稳定进行,反应时间30 min。荧光探针I对二氧化硫具有较好的选择性,不受常见生物硫醇(Hcy,GSH,Cys)以及阴离子(PO,CN,I,S,SO,HPO,Cl,HPO,Br,F,Ac,NO,HCO,N.)的干扰。(3)荧光探针Ⅱ为比率型荧光探针,在不同波长激发光下(366 nm,495 nm),分别具有不同的荧光发射波长(473 nm,595 nm)荧光发射光谱峰,荧光探针Ⅱ可与溶液中SO发生化学反应后,探针Ⅱ结构中的共轭键发生变化,473 nm处的荧光发射光强度增强,595 nm的发射光强度减弱,荧光发射比值I/I与溶液中SO浓度呈现良好线性关系,线性范围为5-50μmol/L,最低检测限为51 n M。该反应可在2 min内完成,且能在p H 7.4-10中稳定进行。荧光探针Ⅱ对二氧化硫的响应具有较好的选择性,不受常见生物硫醇(Hcy,GSH,Cys)以及阴离子(PO,CN,I,S,SO,HPO,Cl,HPO,Br,F,Ac,NO,HCO,N)对检测的干扰。(4)采用荧光探针I建立中药中二氧化硫含量的荧光定量方法,对荧光探针I通过690 nm处荧光发射值变化检测中药中残留二氧化硫,方法学考察结果显示在粉葛提取液中,荧光探针I检测二氧化硫的残留量的精密度(RSD≤4.20%)、重复性(RSD≤7.06%)、稳定性(RSD≤8.14%)、加样回收率(104.76-108.7%),检测范围以二氧化硫浓度计:10-640 mg/kg,最低检测限为1.47 mg/kg,表明该方法可用于中药中二氧化硫的定量测定。(5)由于探针Ⅱ于473 nm处的荧光发射受部分中药如粉葛、党参内在物质的干扰,导致检测结果偏高,而探针Ⅱ的紫外-可见光吸收光谱同样随着探针Ⅱ与二氧化硫的特异性反应而变化,故采用探针Ⅱ建立中药中二氧化硫残留的紫外-可见光吸收光谱定量方法,方法学考察实验结果:精密度(RSD≤0.49%)、重复性(RSD≤4.09%)、稳定性(60 min,RSD≤1.10%)、加样回收率(96.57-104.48%%)均良好,检测范围以二氧化硫浓度

关键词：荧光探针二氧化硫中药材生物成像

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基于反相高效液相的方法研究心衰心阳虚证患者血浆氨基酸指纹图谱

基于反相高效液相的方法研究心衰心阳虚证患者血浆氨基酸指纹图谱

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作者：曾瑞峰广州中医药大学

学位级别：硕士

背景心力衰竭(Heart Failure, HF)也称充血性心力衰竭,是由心肌炎、冠心病、高血压病等病因使心功能减退、心排血量下降而出现的一种复杂的临床综合征,是大多数心血管疾病的最终归宿,也是最主要的死亡原因。心衰严重影响着患者的生活质... 详细信息

背景心力衰竭(Heart Failure, HF)也称充血性心力衰竭,是由心肌炎、冠心病、高血压病等病因使心功能减退、心排血量下降而出现的一种复杂的临床综合征,是大多数心血管疾病的最终归宿,也是最主要的死亡原因。心衰严重影响着患者的生活质量和寿命,且医疗费用高,给家庭、社会造成了沉重的医疗负担,因此心衰的防治一直是现代医学界中的研究热点。近年来,随着中医药现代化研究逐渐成为焦点问题,学者们力图用现代科学方法论来衡量中医,而中医证型的量化、中医辨证的标准化则为热点之一。目的探讨应用反相高效液相色谱(Reversed-phase High performance Liquid Chromatography, RP-HPLC)的方法研究心衰心阳虚证患者血浆中氨基酸如缬氨酸(Valine, Val),苯丙氨酸(Phenylalanine, Phe)、异亮氨酸(Isoleucine, Ile)、亮氨酸(Leucine, Leu)、半胱氨酸(Cysteine, Cys)的图谱特点,以及此证型患者的B-型尿钠肽(B-type natriuretic peptide, BNP)、二氧化碳分压(Partial Pressure of Carbon Dioxide, PaCO2)、氧分压(Partial Pressure of Oxygen, PaO2)、射血分数(Ejection Fractions, EF),A峰E峰流速比值(E／A)等指标水平的特点。方法本研究为横断面研究,自2009年12月到2010年4月,从广东省中医院门诊、急诊、留观、综合病区、心血管内科选取28例心衰证型为心阳虚型的病人。纳入后行相关理化检查,并留取受试者血液样本并使用RP-HPLC法得出受试者血浆氨基酸的图谱,观察其特点,并寻找患者的图谱指标、BNP与心阳虚证候积分的相关性。结果纳入的28例心衰心阳虚患者中,有1名患者症状较重,处于昏迷状态,无法对其进行中医证候评分,故剔除,共观察心衰心阳虚患者27例(男9例,女18例,男女间各项一般资料无统计显著性差异)。患者心阳虚证候积分与氧分压(80.22±33.40mmHg)、二氧化碳分压(37.45±15.55mmHg)、射血分数(45.18±19.20%),A峰E峰流速比值无明显关系(r≈0);但有随BNP水平增加而增加的且呈直线的趋势。回归方程为Y=15.169 +0.000864XBNP (P峰面积为自变量,心阳虚证候积分为应变量作散点图,可见心阳虚证积分有随缬氨酸和亮氨酸峰面积增加而减少,随苯丙氨酸及异亮氨酸增加面减少的趋势,但只有苯丙氨酸具有统计学意义(P<0.05,Y=12.112+0.0000254Xphe),余3种氨基酸与心阳虚证积分的线性关系在统计学上不成立。结论基于反相高效液相的方法测定氨基酸的代谢指纹图谱,具有选择性高、分析速度快和灵敏度高等优点。因血浆中半胱氨酸含量极低,未能够识别,需进一步深入研究其原因。其余4种氨基酸中苯丙氨酸与心阳虚证候积分存在明确的直线关系;心阳虚证候积分与缬氨酸、亮氨酸存在正相关的趋势,与异亮氨酸存在负性相关的趋势。在此研究基础上,氨基酸代谢指纹图谱有望可用于找出心衰心阳虚患者的证候特点。

关键词：心力衰竭心阳虚反相高效液相色谱氨基酸 B-型尿钠肽

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改良早期预警评分对转诊患者转运途中所采取的干预措施及结局的预测价值分析

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中华急诊医学杂志 2020年第12期29卷 1646-1648页

作者：刘青艳曾瑞峰郭艳枫邓秋迎广州中医药大学第二附属医院广东省中医院广州510120

2001年,由英国Subbe提出的改良早期预警评分(modified early warning score,MEWS)是通过对患者的意识及生命体征(体温、心率、呼吸频率和收缩压)进行综合评分,将病情危重程度进行分类[1]。院间转运目标是为了得到进一步检查和更有效的治... 详细信息

2001年,由英国Subbe提出的改良早期预警评分(modified early warning score,MEWS)是通过对患者的意识及生命体征(体温、心率、呼吸频率和收缩压)进行综合评分,将病情危重程度进行分类[1]。院间转运目标是为了得到进一步检查和更有效的治疗[2],某些患者因为下级医院医疗条件限制,需要转诊至上级医院进一步诊疗,这些患者具有病情较重,转运距离较长的特点[3],转运过程存在一定的风险[4],且对于某些疾病,时间是异常宝贵的[5,6]。

关键词：改良早期预警评分病情危重程度干预措施医院医疗呼吸频率转运过程院间转运综合评分

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论针刺水沟改善心搏骤停患者神经功能预后的可能性

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中国中西医结合急救杂志 2017年第4期24卷 337-339页

作者：刘相圻曾瑞峰丁邦晗广州中医药大学第二临床医学院广东广州510006 广州中医药大学第二附属医院急诊科广东省中医院急诊科广东省中医急症研究重点实验室广东广州510120

以心搏骤停（CA）后全脑缺血为研究对象,从传统中医理论与现代针灸角度分析水沟穴改善神经功能预后的原理,强调针刺干预的环节、作用机制、优化刺激参数等基础;以及临床研究的注意事项,明确针刺水沟穴改善CA患者神经功能恢复的方向.

关键词：心搏骤停心肺复苏水沟穴神经功能恢复

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基于28例心衰心阳虚证患者的证候积分与苯丙氨酸代谢指纹图谱的相关性研究

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时珍国医国药 2014年第3期25卷 762-763页

作者：吴晓新曾瑞峰梁国荣李俊广东省中医院广东广州510120

目的探讨应用反相高效液相色谱(Reversed-phase High performance Liquid Chromatography,RP-HPLC)的方法研究心衰心阳虚证患者血浆中苯丙氨酸(Phenylalanine,Phe)的图谱特点。方法选取28例心衰证型为心阳虚型的病人。纳入使用RP-HPLC... 详细信息

目的探讨应用反相高效液相色谱(Reversed-phase High performance Liquid Chromatography,RP-HPLC)的方法研究心衰心阳虚证患者血浆中苯丙氨酸(Phenylalanine,Phe)的图谱特点。方法选取28例心衰证型为心阳虚型的病人。纳入使用RP-HPLC法得出受试者血浆苯丙氨酸的图谱,观察其特点,并寻找患者的图谱指标与心阳虚证候积分的相关性。结果以苯丙氨酸峰面积为自变量,心阳虚证候积分为应变量作散点图,可见心阳虚证积分有随苯丙氨酸面积增加而增加,并具有统计学意义(P=0.006)。结论基于反相高效液相的方法测定氨基酸的代谢指纹图谱,具有选择性高、分析速度快和灵敏度高等优点。心阳虚证候积分与苯丙氨酸存在正相关的趋势。氨基酸代谢指纹图谱有望可用于找出心衰心阳虚患者的证候特点。

关键词：心力衰竭心阳虚反相高效液相色谱苯丙氨酸

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中医药防治危重症患者院内感染的临床思路

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广州中医药大学学报 2013年第3期30卷 294-295页

作者：赖芳曾瑞峰刘林艳徐艳韩云广东省中医院芳村分院ICU 广东广州510145

院内感染是严重的公共卫生问题之一,危重症患者容易合并院内感染。通过整理相关文献并结合临床实践,提出了中医药防治危重症患者院内感染的临床思路。认为通过中药整体辨治、中药制剂的局部使用及应用穴位针刺、穴位贴敷等外治法的多种... 详细信息

院内感染是严重的公共卫生问题之一,危重症患者容易合并院内感染。通过整理相关文献并结合临床实践,提出了中医药防治危重症患者院内感染的临床思路。认为通过中药整体辨治、中药制剂的局部使用及应用穴位针刺、穴位贴敷等外治法的多种治疗方法结合可更好地防治院内感染。

关键词：院内感染中医疗法危重症

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心衰心阳虚证血浆氨基酸(缬、苯丙、异亮、亮氨酸)代谢指纹图谱研究

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中华中医药杂志 2013年第12期28卷 3735-3738页

作者：梁国荣曾瑞峰温丹婷李俊广州中医药大学第二附属医院急诊科广州510120 广州中医药大学第二临床医学院广州510000

目的:探讨应用高效液相色谱(HPLC)的方法研究心衰心阳虚证患者血浆中氨基酸(缬、苯丙、异亮、亮氨酸)的代谢指纹图谱,为心衰心阳虚证患者的中医证候量化研究提供客观数据支持。方法:纳入研究患者心衰40例,非心衰27例,用HPLC法得出受试... 详细信息

目的:探讨应用高效液相色谱(HPLC)的方法研究心衰心阳虚证患者血浆中氨基酸(缬、苯丙、异亮、亮氨酸)的代谢指纹图谱,为心衰心阳虚证患者的中医证候量化研究提供客观数据支持。方法:纳入研究患者心衰40例,非心衰27例,用HPLC法得出受试者血浆氨基酸(缬、苯丙、异亮、亮氨酸)的代谢指纹图谱,寻找心衰组与非心衰组代谢图谱指标的相关性,以及各组的氨基酸代谢指纹图谱指标、BNP与Boston积分、心阳虚中医证候积分的相关性。结果:心阳虚中医证候积分随B型尿钠肽(BNP)水平增加而增加的且呈线性相关(P<0.001);心阳虚证积分与缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸浓度变化没有明显趋势关系,与苯丙氨酸呈正相关趋势,构成线性关系(P<0.05)。结论:应用HPLC测定氨基酸的代谢指纹图谱,具有选择性高、分析速度快和灵敏度高等优点,4种氨基酸中苯丙氨酸与心阳虚证候积分存在明确的直线关系;在此研究基础上,氨基酸代谢指纹图谱有望可用于找出心衰心阳虚患者的证候特点。

关键词：心力衰竭心阳虚高效液相色谱氨基酸 B-型尿钠肽

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急性虚证与脓毒症

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中国中西医结合急救杂志 2015年第3期22卷 225-226页

作者：李俊曾瑞峰奚小土刘云涛唐光华丁邦晗广东省中医院广东广州510120

中医虽无脓毒症的病名，但临床采用中西医结合治疗脓毒症可以取长补短，提高治愈率，降低病死率，达到最佳疗效。提高脓毒症疗效的前提是正确认识脓毒症的病机。我们在临床实践中发现，“急性虚证”是脓毒症的重要病机，“扶正”应贯穿... 详细信息

中医虽无脓毒症的病名，但临床采用中西医结合治疗脓毒症可以取长补短，提高治愈率，降低病死率，达到最佳疗效。提高脓毒症疗效的前提是正确认识脓毒症的病机。我们在临床实践中发现，“急性虚证”是脓毒症的重要病机，“扶正”应贯穿于脓毒症治疗的全过程。

关键词：急性虚证脓毒症中西医结合治疗最佳疗效临床实践高治愈率病死率病机

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心衰心阳虚证候积分与缬氨酸代谢指纹图谱的相关性研究

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中国中医药现代远程教育 2010年第18期8卷 169-171页

作者：曾瑞峰李俊广东省中医院急诊科

目的探讨应用反相高效液相色谱（Reversed-phase High performance Liquid Chromatography, RP-HPLC）的方法研究心衰心阳虚证患者血浆中缬氨酸（Valine，Val）的图谱特点，结果以缬氨酸峰面积为自变量，心阳虚证候积分为应变量作散点... 详细信息

目的探讨应用反相高效液相色谱（Reversed-phase High performance Liquid Chromatography, RP-HPLC）的方法研究心衰心阳虚证患者血浆中缬氨酸（Valine，Val）的图谱特点，结果以缬氨酸峰面积为自变量，心阳虚证候积分为应变量作散点图，可见心阳虚证积分有随缬氨酸面积增加而减少，但在统计学上不成立。结论基于反相高效液相的方法测定氨基酸的代谢指纹图谱，具有选择性高、分析速度快和灵敏度高等优点。心阳虚证候积分与缬氨酸存在正相关的趋势。氨基酸代谢指纹图谱有望可用于找出心衰心阳虚患者的证候特点。

关键词：心力衰竭心阳虚反相高效液相色谱缬氨酸

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代谢组学方法及其在中医药研究的现状与展望

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中国中医药现代远程教育 2010年第18期8卷 205-206页

作者：曾瑞峰李俊广东省中医院急诊科

20世纪90年代中期发展起来的代谢组学是继基因组学、转录组学和蛋白质组学之后的又一门新兴的组学技术，是系统生物学研究不可或缺的重要基础学科之一。代谢组学之父Jeremy K Nicholson教授基于长期对生物体液的研究，于1999年提出了代... 详细信息

20世纪90年代中期发展起来的代谢组学是继基因组学、转录组学和蛋白质组学之后的又一门新兴的组学技术，是系统生物学研究不可或缺的重要基础学科之一。代谢组学之父Jeremy K Nicholson教授基于长期对生物体液的研究，于1999年提出了代谢组学概念：定量测量生物系统对病生理刺激和基因修改所做的与时间相关的多参数代谢应答^[1]。

关键词：代谢组学中医药客观化

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