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LncRNACRNDE、miR-4262、ZEB1在宫颈癌中的表达及与临床病理特征和预后的关系

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中国性科学 2024年第4期33卷 79-84页

作者：林丽慧闫志强任青曾思衡海南西部中心医院妇科海南儋州571700

目的探讨宫颈癌患者中长链非编码RNA(LncRNA)CRNDE、微小RNA(miRNA)-4262、锌指E盒结合同源盒1(ZEB1)表达水平变化及与临床病理特征、预后的关系。方法选取2018年6月至2019年6月海南西部中心医院收治的100例宫颈癌患者作为研究对象,通... 详细信息

目的探讨宫颈癌患者中长链非编码RNA(LncRNA)CRNDE、微小RNA(miRNA)-4262、锌指E盒结合同源盒1(ZEB1)表达水平变化及与临床病理特征、预后的关系。方法选取2018年6月至2019年6月海南西部中心医院收治的100例宫颈癌患者作为研究对象,通过实时荧光定量聚合酶链反应法检测宫颈癌组织与癌旁组织中LncRNA CRNDE、miR-4262、ZEB1 mRNA的表达。通过在线网站预测LncRNA CRNDE与miR-4262的结合位点,miR-4262与ZEB1的结合位点,分析三者表达的相关性及与临床病理特征的关系。根据宫颈癌组织中LncRNA CRNDE、miR-4262、ZEB1 mRNA表达分为高表达组、低表达组,采用Kaplan-Meier法绘制不同LncRNA CRNDE、miR-4262、ZEB1 mRNA表达宫颈癌患者的生存曲线。结果宫颈癌组织中LncRNA CRNDE、ZEB1 mRNA表达高于癌旁组织,miR-4262表达低于癌旁组织(t=13.198、25.123、11.843,P<0.01)。宫颈癌组织中LncRNA CRNDE与miR-4262表达呈负相关,与ZEB1 mRNA表达呈正相关,miR-4262与ZEB1 mRNA表达呈负相关(r=-0.654、0.701、-0.687,P<0.01)。LncRNA CRNDE、miR-4262、ZEB1 mRNA表达与国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。随访6~36个月,失访9例,死亡13例,100例宫颈癌患者3年累积生存率为86.93%。Kaplan-Meier生存曲线结果显示,LncRNA CRNDE高表达组、miR-4262低表达组及ZEB1 mRNA高表达组3年累积生存率均较低(Log-rankχ^(2)=3.899、4.132、3.891,P<0.05)。结论宫颈癌组织中LncRNA CRNDE、ZEB1 mRNA高表达,miR-4262低表达,三者表达变化与FIGO分期、淋巴结转移和预后有关。

关键词：宫颈癌长链非编码RNA CRNDE 微小RNA-4262 锌指E盒结合同源盒1 临床病理特征预后

宫颈癌患者组织和血清外泌体lncRNA DLX6-AS1的表达

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广东医学 2024年第9期45卷 1149-1153页

作者：林丽慧闫志强任青曾思衡海南西部中心医院妇科

目的探究宫颈癌患者组织和血清外泌体中长链非编码RNA DLX6-AS1(lncRNA DLX6-AS1)的表达及临床意义。方法纳入2022年4月至2023年4月在海南西部中心医院妇科收治的82例宫颈癌患者作为观察组，82例子宫肌瘤女性作为对照组，收集患者术... 详细信息

目的探究宫颈癌患者组织和血清外泌体中长链非编码RNA DLX6-AS1(lncRNA DLX6-AS1)的表达及临床意义。方法纳入2022年4月至2023年4月在海南西部中心医院妇科收治的82例宫颈癌患者作为观察组，82例子宫肌瘤女性作为对照组，收集患者术后宫颈癌组织及血清外泌体。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织样本、血清外泌体中lncRNA DLX6-AS1的表达水平；通过受试者工作特征曲线(ROC)分析lncRNA DLX6-AS1对宫颈癌的临床诊断价值。结果观察组患者组织、血清外泌体中lncRNA DLX6-AS1相对表达量显著高于对照组患者(P<0.05)。不同FIGO分期及淋巴结转移情况的观察组患者宫颈癌组织、血清外泌体中lncRNA DLX6-AS1的相对表达量差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组织、血清外泌体中lncRNA DLX6-AS1单独及联合诊断宫颈癌的曲线下面积分别为0.740、0.692和0.781。结论宫颈癌患者组织及血清外泌体中lncRNA DLX6-AS1表达水平较高，且与FIGO分期、淋巴结转移相关，可能作为预测宫颈癌及严重程度的重要生物学标志物。

关键词：宫颈癌长链非编码RNA DLX6-AS1 外泌体生物学标志物

靶向EpCAM抗原的CAR-T对结直肠癌的杀伤作用研究

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靶向EpCAM抗原的CAR-T对结直肠癌的杀伤作用研究

作者：曾思衡山西医科大学

学位级别：硕士

目的:本课题以抗人上皮特异性黏附分子(epithehal cell adhesion molecule,EpCAM)单抗的scFv为胞外单链可变区,其序列包括Kozak序列和CD8α信号肽序列,CD8铰链区、CD28跨膜区、CD28信号区、CD137信号区、CD3ξ信号区。以LV5为慢病毒载体... 详细信息

目的:本课题以抗人上皮特异性黏附分子(epithehal cell adhesion molecule,EpCAM)单抗的scFv为胞外单链可变区,其序列包括Kozak序列和CD8α信号肽序列,CD8铰链区、CD28跨膜区、CD28信号区、CD137信号区、CD3ξ信号区。以LV5为慢病毒载体,构建一种靶向结直肠癌抗原EpCAM的第三代嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR),用于转染T细胞以构建靶向EpCAM抗原的CAR-T细胞(抗EpCAM-CAR-T),同时研究抗EpCAM-CAR在T细胞上的表达情况。探讨抗EpCAM-CAR-T对EpCAM抗原表达阳性和阴性的肿瘤细胞的体外杀伤作用,并观察T细胞杀伤性细胞因子的分泌情况。探讨抗EpCAM-CAR-T细胞对结直肠癌荷瘤裸鼠的体内治疗效果,观察裸鼠血清杀伤性细胞因子分泌情况,并初步分析抗EpCAM-CAR-T治疗后的相关副作用。方法:(1)确定抗人EpCAM单抗的scFv序列及相关的序列信息,通过基因全合成的方法将所有序列合成一个整体序列:CD8α信号肽-抗EpCAM-scfv-CD8铰链区-CD28跨膜区-CD28信号区-CD137信号区-CD3ξ信号区。然后将EpCAM-CAR克隆到LV5慢病毒载体,通过三质粒系统转染293T细胞,制备成慢病毒,DNA测序检测序列是否正确。(2)T细胞的扩增培养,提取外周血单个核细胞,用CD28和CD3激活后,用含有白介素-2(IL-2)的GT-T551完全培养基培养,利用流式细胞术检测CD8+和CD4+的T细胞比例。(3)转染后的EpCAM-CAR-T细胞利用流式细胞术检测EpCAM-CAR是否表达。在EpCAM-CAR-T构建完成后进行体外杀伤实验。(4)将EpCAM-CAR-T细胞与EpCAM表达阳性和阴性的细胞共培养,之后用MTT法检测杀伤效率,并用ELISA法检测杀伤性细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与干扰-γ(IFN-γ)的分泌情况。(5)将BALB/C裸鼠分为四组,每组6只,应用HT-29结直肠癌细胞腹腔种植BALB/C裸鼠的肿瘤模型,研究EpCAM-CAR-T对结直肠癌的体内抑制作用,记录裸鼠死亡率及肿瘤大小,将肿瘤组织行病理切片观察病理变化,并检测裸鼠血清杀伤性因子的分泌情况。(6)同时对荷瘤小鼠的肝肾进行病理切片,观察是否产生相关的副作用。结果:(1)成功构建了靶向EpCAM抗原的嵌合抗原受体LV5-EpCAM-CAR,并进行了慢病毒包装,DNA测序与预想结果符合。(2)提取的外周血单个核细胞,经激活和培养后,T细胞大量扩增,CD3CD8和CD4的T细胞比例在60%以上。(3)转染后,流式细胞仪检测EpCAM-CAR在T细胞膜上的表达率为19.7%。(4)MTT结果发现EpCAM表达阳性组的肿瘤抑制率比阴性组高(P<0.05),ELISA结果提示阳性组的杀伤性细胞因子TNF-α与IFN-γ的分泌量比阴性组高(P<0.05)。(5)裸鼠造瘤七天后,皮下出现结节,腹部稍膨胀,按压腹部可触及大小和数量不等的肿块,病理切片证实为结直肠癌。实验发现空白组从第16天开始出现死亡,对照组在第18天,死亡裸鼠腹部极度膨胀,而CAR-T组第26天时才开始死亡,腹部几乎没有膨胀,肿瘤体积也比空白组和对照组小(P<0.05),空白组与实验组的死亡率有明显差别(P<0.05),但实验组和对照组在第28天的存活率相同。实验组荷瘤裸鼠血清杀伤性细胞因子TNF-α与IFN-γ的分泌量比空白组和对照组高(P<0.05)(6)裸鼠的病理切片观察发现各组肝肾未见明显转移癌出现,但死亡裸鼠的肝组织病理切片可见有色素沉着、细胞萎缩等恶病质变化,说明治疗可能产生脱靶效应造成了细胞因子风暴,实验组裸鼠可能是死于此副作用。结论:成功构建了一种第三代嵌合抗原受体结构EpCAM-CAR,转染EpCAM-CAR后的T细胞可以靶向识别EpCAM阳性的肿瘤细胞,并能分泌大量的杀伤性细胞因子TNF-α与IFN-γ,在体内也可较好地抑制结直肠癌的生长及转移,并改善荷瘤裸鼠的生存质量。EpCAM-CAR同时也会产生脱靶效应而引起细胞因子风暴,需要在治疗中结合免疫抑制剂和丙球蛋白等手段来降低副作用。

关键词：嵌合抗原受体T细胞上皮特异性黏附分子结直肠癌细胞免疫治疗

二胎孕妇产后出血的危险因素及预测模型的建立

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中国妇产科临床杂志 2019年第5期20卷 458-459页

作者：沈婕任青林元薛万兴林丽慧闫志强邓森灵曾思衡海南省儋州市西部中心医院妇产科上海市交通大学第九人民医院妇产科

目的探讨二胎孕妇产后出血(PPH)的危险因素并建立COX比例风险回归模型。方法回顾性分析2016年12月至2018年10月于海南省儋州市西部医院产科分娩的6 950例二胎孕产妇的临床资料,观察PPH的发生率,应用COX比例风险回归模型对影响PPH的危险... 详细信息

目的探讨二胎孕妇产后出血(PPH)的危险因素并建立COX比例风险回归模型。方法回顾性分析2016年12月至2018年10月于海南省儋州市西部医院产科分娩的6 950例二胎孕产妇的临床资料,观察PPH的发生率,应用COX比例风险回归模型对影响PPH的危险因素进行分析,构建预测PPH的指数方程。结果 6 950例二胎孕妇发生PPH 200例,占2.88%。COX比例风险回归模型显示:年龄、孕周、宫缩乏力、胎盘粘连、软产道损伤和分娩方式,说明年龄(X1)(RR=1.242;95%CI:1.031~1.521)、孕周(X2)(RR=1.264;95%CI:1.068~1.964)、宫缩乏力(X3)(RR=1.320;95%CI:1.120~2.121)、胎盘粘连(X4)(RR=1.124;95%CI:1.001~1.647)、软产道损伤(X5)(RR=1.094;95%CI:0.689~1.345)和分娩方式(X6)(RR=1.332;95%CI:1.111~1.675)是影响PPH的危险因素(P <0.05)。建立PPH指数(PI)方程:PI=0.265X1+0.425X2+0.408X3+0.462X4+0.412X5+0.501X6。结论本研究建立了PPH模型,对于筛查PPH高危人群并采取个体化和规范化的预防性治疗措施具有重要意义。

关键词：二胎产后出血危险因素预测模型

CIN病变程度及HPV感染与宫颈组织MTA1、Bcl-2表达的相关性

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中华医院感染学杂志 2023年第10期33卷 1559-1563页

作者：林丽慧闫志强任青陈真曾思衡海南西部中心医院妇科海南詹州571700 上海市第九人民医院妇科上海200000

目的探究宫颈上皮内瘤样病变(CIN)程度及人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈组织肿瘤转移相关因子-1(MTA1)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)表达的相关性。方法选取2018年1月-2021年3月于海南西部中心医院妇科行各项检查的107例CIN患者为病例组,并... 详细信息

目的探究宫颈上皮内瘤样病变(CIN)程度及人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈组织肿瘤转移相关因子-1(MTA1)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)表达的相关性。方法选取2018年1月-2021年3月于海南西部中心医院妇科行各项检查的107例CIN患者为病例组,并根据CIN病变程度分为鳞癌组(宫颈鳞癌)31例、高级别病变组(CINⅡ~Ⅲ)27例、低级别病变组(CINⅠ)49例,30例慢性宫颈炎患者为对照组,分析宫颈组织MTA1、Bcl-2水平与CIN病变程度及HPV感染的关系。结果病例组与对照组患者首次性生活年龄、孕次、避孕方式、性伴侣数比较差异有统计学意义(P<0.05);病例组MTA1和Bcl-2阳性率高于对照组(P<0.05),且随着病变程度加重阳性率升高(P<0.05);病例组高危HPV感染患者宫颈组织MTA1、Bcl-2阳性率显著高于低危HPV感染患者(P<0.05)。结论HPV感染与CIN患者宫颈癌病变相关,其可能通过影响组织MTA1、Bcl-2上调表达促进癌变进展,临床还需进一步验证。

关键词：宫颈上皮内瘤样病变人乳头瘤病毒肿瘤转移相关因子-1 B淋巴细胞瘤-2基因

输卵管性不孕患者支原体感染药物敏感性和H_(2)O_(2)与b-FGF检测意义

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中华医院感染学杂志 2022年第20期32卷 3141-3145页

作者：林丽慧闫志强任青陈真曾思衡海南西部中心医院妇科海南儋州571700 上海市第九人民医院妇科上海200000

目的输卵管性不孕患者支原体感染药敏分析和过氧化氢(H_(2)O_(2))与重组人碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)对其预测价值。方法选取2018年1月-2021年3月海南西部中心医院收治的50例输卵管性不孕患者设为研究组,另选取同期健康育龄女性体检... 详细信息

目的输卵管性不孕患者支原体感染药敏分析和过氧化氢(H_(2)O_(2))与重组人碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)对其预测价值。方法选取2018年1月-2021年3月海南西部中心医院收治的50例输卵管性不孕患者设为研究组,另选取同期健康育龄女性体检者50名作为对照组,采用液体培养法检测人型支原体(Mh)和解脲支原体(Uu),分析两组支原体检出情况以及输卵管性不孕患者支原体药敏试验结果;采用酶联免疫吸附法检测两组人输卵管上皮细胞上清液中H_(2)O_(2)、b-FGF含量,并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析人输卵管上皮细胞上清液中H_(2)O_(2)、b-FGF含量对支原体感染导致输卵管性不孕的诊断效能,分析H_(2)O_(2)与b-FGF的相关性。结果研究组Uu、Mh、Uu+Mh感染率高于对照组(P80%);Mh对交沙霉素、四环素、强力霉素敏感性较高(敏感率>85%);Uu+Mh对四环素、强力霉素、交沙霉素敏感性较高(敏感率≥75%);研究组人输卵管上皮细胞上清液中H_(2)O_(2)、b-FGF高于对照组(P<0.001);ROC曲线分析显示,人输卵管上皮细胞上清液中H_(2)O_(2)、b-FGF含量联合预测支原体感染导致输卵管性不孕的曲线下面积(AUC)为0.925,敏感度为96.00%高于单独检测(P<0.05);Spearman相关分析显示,H_(2)O_(2)与b-FGF呈正相关(r=0.379,P=0.015);研究组OD值低于对照组,细胞抑制率高于对照组(P<0.001)。结论支原体感染引起的输卵管性不孕患者输卵管上皮细胞上清液中H_(2)O_(2)、b-FGF含量较高,对输卵管性不孕预测价值较高,临床应对其水平进行监测;同时进行支原体感染的常规检查和药敏试验,以减少输卵管性不孕发生。

关键词：输卵管性不孕支原体感染药物敏感性检测过氧化氢重组人碱性成纤维细胞生长因子

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分子靶向药物在肝癌中的研究进展

分子靶向药物在肝癌中的研究进展

分子靶向药物A联合分子靶向药物B抗肝癌作用研究

2017第七届泛环渤海生物化学与分子生物学会学术交流会

作者：袁洋洋姚志坚曾思衡于保锋山西医科大学生物化学与分子生物学教研室

肝癌(HCC)是世界第三大致死癌症,也是中国乃至亚洲最广泛的一种癌症。临床上通常采用肝移植、手术切除、肝动脉化疗栓塞等方法治疗肝癌,但术后复发率和转移率偏高。癌症的发生是细胞内生化反应和信号转导网络紊乱的结果。信号转导治疗... 详细信息

肝癌(HCC)是世界第三大致死癌症,也是中国乃至亚洲最广泛的一种癌症。临床上通常采用肝移植、手术切除、肝动脉化疗栓塞等方法治疗肝癌,但术后复发率和转移率偏高。癌症的发生是细胞内生化反应和信号转导网络紊乱的结果。信号转导治疗的兴起吸引科研人员开始关注靶向药物治疗肝癌。相比传统的肿瘤辅助治疗,分子靶向治疗更能选择性地有效杀灭肿瘤细胞,对机体的损伤较小。本文就与肝癌分子靶向治疗相关的信号通路、药物及研究进展做一综述。

关键词：分子靶向药物肝癌

来源： cnki会议评论

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分子靶向药物A联合分子靶向药物B抗肝癌作用研究

应用CRISPR/Cas9技术对HepG2细胞S基因的靶向敲除研究

2017第七届泛环渤海生物化学与分子生物学会学术交流会

作者：袁洋洋姚志坚曾思衡于保锋山西医科大学生物化学与分子生物学教研室

研究背景:肝癌(HCC)是世界第三大致死癌症,也是中国乃至亚洲最广泛的一种癌症。临床上通常采用肝移植、手术切除、肝动脉化疗栓塞等方法治疗肝癌,但术后复发率和转移率偏高。癌症的发生是细胞内生化反应和信号转导网络紊乱的结果。信号... 详细信息

研究背景:肝癌(HCC)是世界第三大致死癌症,也是中国乃至亚洲最广泛的一种癌症。临床上通常采用肝移植、手术切除、肝动脉化疗栓塞等方法治疗肝癌,但术后复发率和转移率偏高。癌症的发生是细胞内生化反应和信号转导网络紊乱的结果。信号转导治疗的兴起吸引科研人员开始关注靶向药物治疗肝癌。通过前期作用于不同信号通路的分子靶向药物敏感性筛选,筛选出敏感性药物A与B。目的:研究分子靶向药物A联合分子靶向药物B对肝癌细胞sk-hep-1活力、克隆形成能力、侵袭迁移、凋亡,探讨药物联合对肝癌细胞凋亡的潜在机制。材料和研究方法:利用MTT实验,测定IC50数值,药物联合测定q值;利用平板克隆实验检测细胞的克隆形成能力;利用Transwell实验和划痕实验,探究肝癌细胞侵袭、转移能力;利用流式细胞分析技术,检测细胞凋亡情况;利用RT-PCR、WB检测Chk1、p-Src、p-Abl、Cl eaved caspase3的表达。预期研究结果:相比单药处理,药物联合更能使sk-hep-1的活力、克隆形成能力、侵袭和转移能力显著下降(P<0.05);使sk-hep-1凋亡率显著增加(P<0.05);使Chk1、p-Src和p-Ab1的表达水平明显下降;Cleaved-caspase3的表达水平明显增加。结论:相比单药处理,药物联合更能降低sk-hep-1细胞的活力、克隆形成能力、侵袭迁移能力,增加凋亡率。药物A作用靶点为Chk1,药物B作用靶点为Src、Ab1;药物联合通过活化Caspase3促进Sk-hep-1的凋亡。

关键词：分子靶向药物A 分子靶向药物B 肝癌凋亡

来源： cnki会议评论

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应用CRISPR/Cas9技术对HepG2细胞S基因的靶向敲除研究