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sTNFRI基因修饰的未成熟树突细胞对异基因骨髓移植小鼠移植物抗宿主病和移植物抗白血病作用的研究

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中华血液学杂志 2012年第2期33卷 88-93页

作者：王淑华李德鹏张艳君张璞曾令宇潘秀英徐开林黄一虹济宁医学院附属医院血液科 272029 徐州医学院附属医院血液科 221002 徐州市市级机关医院

目的探讨可溶性肿瘤坏死因子受体I（sTNFRI）基因修饰的未成熟树突细胞（DC）对白血病小鼠异基因骨髓移植（allo-BMT）后移植物抗宿主病（GVHD）和移植物抗白血病（GVL）效应的影响及其机制。方法以BALB／c（H-2^d）小鼠为供鼠，C57BL／... 详细信息

目的探讨可溶性肿瘤坏死因子受体I（sTNFRI）基因修饰的未成熟树突细胞（DC）对白血病小鼠异基因骨髓移植（allo-BMT）后移植物抗宿主病（GVHD）和移植物抗白血病（GVL）效应的影响及其机制。方法以BALB／c（H-2^d）小鼠为供鼠，C57BL／6（H-2^b）小鼠为受鼠，建立小鼠T细胞白血病BMT模型。受鼠全身照射（TBI）后4h内，将供鼠骨髓细胞和脾细胞按1：1混合，经尾静脉输注于受鼠体内，同时输注T细胞白血病／淋巴瘤细胞株EIA细胞。实验分组：①A组：单纯照射组；②B组：白血病发病组；③C组：allo-BMT组（移植物未做任何处理）；④D组：pXZ9-DC组（未经修饰的未成熟DC组）；⑤E组：sTNFRI-DC组（sTNFRI修饰的未成熟DC组）。观察移植小鼠GVHD典型症状、病理分级、白血病细胞浸润情况、存活时间、生存率等，采用ELISA法测定IFN-y和IL4浓度，采用流式细胞术（FCM）检测异基因嵌合率。结果①A组小鼠均于10d内死于骨髓衰竭。B组小鼠均死于淋巴瘤／白血病。C组小鼠出现明显急性GVHD表现，而D组和E组小鼠只有部分出现GVHD表现，且GVHD评分及病理表现均较C组明显减低或减轻（P值均〈0．05），其中E组小鼠GVHD评分较c和D组均降低（P值均〈0．05），病理学改变最轻。C、D和E组小鼠存活时间分别为（11．50±3．50）、（21．70±5．80）和（25．80±5．20）d，D、E组小鼠存活时间均较C组明显延长（P值均〈0．05），其中E组小鼠平均存活时间最长。B组小鼠18d内均死于白血病，C、D和E组小鼠白血病的发病率分别为10％、20％、10％，各组发病率比较差异无统计学意义（P〉0．05）。②移植后C、D和E组小鼠血清IFN-1浓度在＋12d时达高峰，后逐渐下降，＋18d时IFN一1的浓度E组较C和D组降低（P〈0．05），D组较C组低（P〈0．05）。C组小鼠血清IL-4降低，而D和E组浓度渐升高，＋12d达高峰，三组间两两比较差异均有统计学意义（P值均〈0．05）。③＋30d，C、D和E组存活受鼠骨髓异基因嵌合率为95％-100％，证实为完全供鼠型植入。结论未成熟DC可诱导***免疫耐受，输注sTNFRI基因修饰的未成熟DC可延长移植小鼠的存活时间，在一定程度上减轻GVHD的同时又保留GVL效应。

关键词：树突细胞肿瘤坏死因子受体可溶性移植物抗白血病效应移植物抗宿主病

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韶钢宽板坯连铸机浸入式水口优化与改进

连铸 2012年第2期37卷 31-34页

作者：黄回亮杨帆曾令宇广东省韶关钢铁集团有限公司第三炼钢厂广东韶关512123

通过分析韶钢宽板坯连铸机浸入式水口在生产过程中出现的各种问题,改进浸入式水口的材质、尺寸结构,优化结晶器内钢水的流动状态和温度分布,规范水口烘烤,不仅提高水口使用寿命,减少了生产事故,还提高铸坯质量,取得了显著的效果。

关键词：连铸板坯浸入式水口

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轴承钢大方坯凝固末端重压下工艺研究与实践

轴承钢大方坯凝固末端重压下工艺研究与实践

NANOG基因表达下调对急性T淋巴细胞白血病细胞凋亡的影响

第十三届中国钢铁年会

作者：孙忠权曾令宇谭奇峰宝武集团广东韶关钢铁有限公司

连铸重压下技术是改善轴承钢铸坯中心疏松、缩孔和中心偏析的一种最有效的方法。韶钢与东北大学合作研发大方坯连铸机重压下工艺控制技术,在轻压下工艺装备和拉矫机控制系统基础上,将8号、9号拉矫辊改造成渐变曲率凸型辊,形成轻压下和... 详细信息

连铸重压下技术是改善轴承钢铸坯中心疏松、缩孔和中心偏析的一种最有效的方法。韶钢与东北大学合作研发大方坯连铸机重压下工艺控制技术,在轻压下工艺装备和拉矫机控制系统基础上,将8号、9号拉矫辊改造成渐变曲率凸型辊,形成轻压下和重压下两段式压下技术。本文依据320mm×425mm断面轴承钢连铸坯凝固末端重压下工艺实践,研究在不同拉速和重压下工艺参数对铸坯内部质量的影响。实践表明,轴承钢在拉速0.58m/min时实施重压下工艺后,铸坯中心缩孔改善明显,中心疏松宽度由125mm缩减至110mm,碳偏析由0.85～1.09降至0.95～1.04,圆钢探伤合格率提升了8.34%。实践结果为韶钢开发高质量、高性能、高附加值的特钢产品提供了重要的技术支撑。

关键词：大方坯连铸轴承钢重压下技术中心疏松碳偏析

来源： cnki会议评论

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中华血液学杂志 2013年第12期34卷 1001-1005页

作者：曹江李莉吕超孟凡静周俊陈翀曾令宇李振宇徐开林徐州医学院附属医院血液科 221002 徐州医学院附属医院消化科 221002

目的探讨NANOG基因在人急性T淋巴细胞白血病（WALL）细胞株中的表达及下调该基因表达对细胞凋亡的影响及可能机制。方法利用RT-PCR及Westernblot方法检测T-ALL细胞系MOLT-4、CCRF—HSB2、Jurkat细胞NANOG基因表达情况。通过构建携带NANO... 详细信息

目的探讨NANOG基因在人急性T淋巴细胞白血病（WALL）细胞株中的表达及下调该基因表达对细胞凋亡的影响及可能机制。方法利用RT-PCR及Westernblot方法检测T-ALL细胞系MOLT-4、CCRF—HSB2、Jurkat细胞NANOG基因表达情况。通过构建携带NANOG特异性shRNA的慢病毒载体包装病毒颗粒，感染MOLT-4细胞后经分选获得稳定表达株，并在基因及蛋白水平检测NANOG干扰效率。用流式细胞术检测各组细胞早期凋亡（Annexin VV7-AAD-）及晚期凋亡（Annexin V＋/7-AAD＋）率，并利用实时定量PCR技术检测凋亡相关基因的表达情况。结果MOLT-4和CCRF—HSB2细胞NANOGmRNA及蛋白表达阳性。构建慢病毒干扰质粒***-1、pLB—shNANOG-2及***对照，包装病毒颗粒超速离心后病毒滴度达（1．83～3．12）×10^8IU／ml。病毒感染MOLT-4细胞后经实时定量PCR及Wesmmblot方法证实两种shRNA可有效下调NANOGmRNA及蛋白的表达。流式细胞术检测显示shNANOG．1及shNANOG。2组细胞早期凋亡率分别为（8．06±1．61）％及（5．67±1．59）％，较MOLT-4组[（1．13±0．40）％]及对照shRNA组[（1．15±0．49）％]明显升高（P〈0．05）。而各组细胞晚期凋亡率无明显变化（P〉0．05）。实时定量PCR法证实shNANOG-1及shNANOG．2转染的细胞中TP53、PMAIPl、CASP9等基因表达较未转染组及转染非特异shRNA组显著升高（P〈0．05），而Bcl-2基因表达则明显下降（P〈0．05）。结论NANOG在多种人T-ALL细胞系中表达，下调NANOG的表达可引发T_ALL细胞凋亡。

关键词：基因 NANOG 白血病淋巴样细胞凋亡 RNA干扰

血小板输注对^(60)Co照射所致小鼠骨髓造血龛损伤修复和骨髓移植后造血重建的影响

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中华血液学杂志 2023年第8期44卷 635-641页

作者：刘云丁爽孙静芳李朋朋李晓倩曾令宇徐开林乔建林徐州医科大学附属医院检验科徐州221000 徐州医科大学血液病研究所江苏省骨髓干细胞重点实验室徐州医科大学附属医院血液科徐州221000

目的观察血小板输注对60Co照射所致小鼠骨髓造血龛损伤修复和骨髓移植后造血重建的影响。方法①以8~10周雄性C57BL/6小鼠为研究对象,接受60Co全身照射后分为单独照射组和照射输注组(经尾静脉输注1×10^(8)个表达GFP荧光蛋白的血小板)。... 详细信息

目的观察血小板输注对60Co照射所致小鼠骨髓造血龛损伤修复和骨髓移植后造血重建的影响。方法①以8~10周雄性C57BL/6小鼠为研究对象,接受60Co全身照射后分为单独照射组和照射输注组(经尾静脉输注1×10^(8)个表达GFP荧光蛋白的血小板)。②建立小鼠异基因造血干细胞移植模型,分为单纯移植组(BMT组)和移植+血小板输注组(BMT+PLT组)。BMT组仅通过尾静脉输注5×10^(6)个骨髓细胞,BMT+PLT组在输注骨髓细胞的同时输注1×10^(8)个血小板。检测外周血血细胞和骨髓细胞计数,流式细胞术检测骨髓造血干细胞(HSC)和造血祖细胞(HPC)比例、骨髓细胞增殖率和凋亡率,病理观察造血龛的损伤与修复。结果①在照射后第3、7、14和21天,照射输注组骨髓细胞计数和外周血细胞计数均高于单纯照射组(P值均<0.05),第21天输注组白细胞计数高于单纯照射组,第7天血小板计数高于单纯照射组(P值均<0.05)。在观察周期内照射输注组骨髓细胞增殖率较高,而凋亡率较低;②免疫荧光结果显示照射输注组造血龛的连续性更好;③在移植后,BMT+PLT组嵌合率始终高于BMT组;④BMT+PLT组在移植后第7、28天的骨髓细胞计数和骨髓细胞增殖率均高于BMT组,第14天骨髓细胞凋亡率低于BMT组(P值均<0.05),骨髓细胞中HSC、HPC占比在第14天以后均高于BMT组(P值均<0.05);⑤骨髓组织的免疫组化染色结果显示BMT+PLT组血管内皮连续性更好。结论输注血小板可减轻60Co照射所致小鼠骨髓造血龛的损伤,有利于骨髓移植后造血重建。

关键词：血小板输注骨髓移植小鼠造血微环境

轴承钢中大尺寸夹杂物的特征、来源及改进工艺

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中国冶金 2020年第9期30卷 53-59页

作者：龙鹄成国光丘文生曾令宇余大华刘栋宝武集团广东韶关钢铁有限公司技术中心广东韶关512123 北京科技大学钢铁冶金新技术国家重点实验室北京100083 宝钢特钢韶关有限公司广东韶关512123

以韶钢BOF-ARS(氩站)-LF-RH-CC工艺路线生产GCr15轴承钢为研究背景,采用水浸超声探伤缺陷定位解剖、夹杂物金相显微镜与扫描电镜检验、全冶炼-连铸过程跟踪取样相结合的方法,研究了大尺寸夹杂物的特征和来源,并提出改进工艺。研究结果表... 详细信息

以韶钢BOF-ARS(氩站)-LF-RH-CC工艺路线生产GCr15轴承钢为研究背景,采用水浸超声探伤缺陷定位解剖、夹杂物金相显微镜与扫描电镜检验、全冶炼-连铸过程跟踪取样相结合的方法,研究了大尺寸夹杂物的特征和来源,并提出改进工艺。研究结果表明,大尺寸夹杂物主要有两类,一类是含6%~7%SiO2(质量分数)的低熔点CaO-MgO-Al2O3-SiO2类大颗粒微观夹杂,尺寸分布在50~500μm范围,另一类是不含SiO2的CaO-MgO-Al2O3类宏观夹杂,尺寸不小于500μm。前者的主要来源为出钢的过程采用高黏度的低碱度渣与高熔点的石灰混加所引起的化渣不均匀而导致的卷渣;后者主要因为LF精炼工序添加的大量的铝钙精炼渣难以及时熔化而被卷入到钢液内部所导致。因此,精炼渣的设计和造渣工艺优化是改进上述大尺寸夹杂物的关键。改进后造渣工艺为,出钢过程中用钙铝精炼渣取代低碱度渣,并减少LF精炼工序外加的渣料,控制炉渣二元碱度(w(CaO)/w(SiO2))在5~9范围,Al2O3质量分数为23%~28%。改进后炉渣流动性好,水口结瘤现象得到改善,轧材中主要为细小的MgO-Al2O3尖晶石及复合硫化物类夹杂,成品探伤合格率得到有效提升。

关键词：轴承钢超声探伤夹杂物精炼渣洁净度

猪血细胞表面多糖抗原α-Gal与人ABO血型抗原的比较

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徐州医学院学报 2005年第6期25卷 495-498页

作者：曾令宇李幼平李胜富程惊秋徐州医学院附属医院血液科江苏徐州221002 四川大学华西医院移植工程与移植免疫卫生部重点实验室四川成都610041

目的探讨猪血细胞表面多糖抗原α-Gal与人ABO血型抗原的相似性。方法人全血A、B、O、AB 4种血型的健康人的新鲜血,肝素抗凝,1 800 r/min离心,取白细胞富集层,利用confocal及流式细胞技术(FCM)检测猪及人ABO 4种血型血细胞与BSI-B4-FITC... 详细信息

目的探讨猪血细胞表面多糖抗原α-Gal与人ABO血型抗原的相似性。方法人全血A、B、O、AB 4种血型的健康人的新鲜血,肝素抗凝,1 800 r/min离心,取白细胞富集层,利用confocal及流式细胞技术(FCM)检测猪及人ABO 4种血型血细胞与BSI-B4-FITC结合的情况。结果以A型血细胞为阴性对照,4种血型血小板、RBC、单个核细胞均为阴性,而粒细胞,B型有14%为(+),AB型约有8%为(+),O型约有2%为(+)。结论4种ABO血型抗原中B抗原与α-Gal的结构最为相似。

关键词： α-Gal 多糖抗原血型抗原

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长链非编码RNA在表观遗传学中的研究进展

国际遗传学杂志 2015年第2期38卷 93-96页

作者：秘红岭曾令宇徐州医学院附属医院血液科徐州医学院移植免疫实验室

表观遗传学是基于遗传学基础之上发展起来的生物学分支,研究发现人类很多疾病与表观遗传调控相关,其主要机制包括:染色质重塑、组蛋白修饰,基因组印记及非编码RNA(ncRNA)调控。而长链非编码RNA(lncRNA)是非编码RNA中的一类,不仅可以通... 详细信息

表观遗传学是基于遗传学基础之上发展起来的生物学分支,研究发现人类很多疾病与表观遗传调控相关,其主要机制包括:染色质重塑、组蛋白修饰,基因组印记及非编码RNA(ncRNA)调控。而长链非编码RNA(lncRNA)是非编码RNA中的一类,不仅可以通过与靶基因直接结合调控靶基因的转录,还能募集调控因子,参与基因的沉默,在表观遗传调控中起着重要作用。

关键词：长链非编码DNA 表观遗传学表观调控

靶向AATF基因shRNA表达载体的构建及其稳定表达的白血病U937细胞系的建立

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中国实验血液学杂志 2013年第3期21卷 567-570页

作者：吕超曹江孟凡静曾令宇潘彬陈翀吴庆运宋旭光李振宇潘秀英徐开林徐州医学院移植免疫实验室江苏徐州221002 徐州医学院附属医院血液科

本研究旨在构建靶向AATF基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的人白血病U937细胞系。根据GenBank数据库提供的AATF mRNA序列,以228～249、303～324、443～464位序列作为RNA干扰位点,排除同源可能,合成3对互补并编... 详细信息

本研究旨在构建靶向AATF基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的人白血病U937细胞系。根据GenBank数据库提供的AATF mRNA序列,以228～249、303～324、443～464位序列作为RNA干扰位点,排除同源可能,合成3对互补并编码mRNA基因的特异性shRNA序列的寡核苷酸,克隆至经BamHⅠ、HindⅢ双酶切线性化的pSilencer 3.1人H1启动子干扰载体中,利用测序鉴定所构建的重组载体是否正确,经电穿孔将3个重组载体(pSA-1、pSA-2、pSA-3)转染人白血病U937细胞系,G418(500 mg/L)有限稀释法持续筛选8周后,扩增获得稳定表达的细胞系;RT-PCR、Western blot分别检测稳定转染细胞系的AATF mRNA和AATF蛋白表达。结果表明,AATF干扰序列及读码框完全正确。稳定转染细胞AATF mRNA表达下调,AATF蛋白表达量下降(P<0.05)。结论:成功地构建AATF shRNA真核表达载体及AATF表达稳定抑制的白血病U937细胞系,为以AATF基因为靶点的人白血病进一步研究奠定了实验基础。

关键词： AATF 短发夹RNA 白血病基因表达载体构建