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鸡cGAS对禽腺病毒4型复制的影响及稳定表达DF-1细胞系的建立

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鸡cGAS对禽腺病毒4型复制的影响及稳定表达DF-1细胞系的建立

作者：曹影丽安徽农业大学

学位级别：硕士

血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)是属于腺病毒科(Adenoviridea)腺病毒属(genus Aviadenovirus)的一种基因组大小为43～45kb的无囊膜双链DNA病毒,主要表现的临床特征为肝炎-心包积水综合征(HHS),具有强传播性和高死... 详细信息

血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)是属于腺病毒科(Adenoviridea)腺病毒属(genus Aviadenovirus)的一种基因组大小为43～45kb的无囊膜双链DNA病毒,主要表现的临床特征为肝炎-心包积水综合征(HHS),具有强传播性和高死亡率,严重威胁家禽业发展。chcGAS(Chicken cyclic GMP-AMP synthase,chcGAS)是一种在鸡中发现的天然免疫调节蛋白,在抗病毒感染,特别是DNA病毒感染中发挥着重要作用,它可以感知DNA病毒的存在从而激活先天免疫反应参与抗病毒感染。FAdV-4作为一种DNA病毒,是否能够被chcGAS识别并发挥抗病毒功能还尚待解析。因此,本研究旨在探索chcGAS通过激活抗病毒天然免疫从而产生免疫应答诱导下游级联免疫反应抵御FAdV-4的感染,同时构建了稳定表达chcGAS的DF-1细胞系,为后续深入研究chcGAS参与天然免疫的精细调控作用机制提供了细胞模型。主要研究内容及结果如下:***基因的克隆表达、生物特性分析及FAdV-4感染后亚细胞定位本研究首先利用PCR技术成功克隆了鸡的cGAS基因、分析其生物学特性。利用生物信息学软件预测该基因编码的蛋白的理化性质、信号肽、跨膜结构域等。其次利用构建的原核表达载体p ET-32a-chcGAS、p Cold-TF-chcGAS通过大肠杆菌表达系统表达蛋白,蛋白表达后进行Western blot鉴定。最后利用构建的真核表达载体pm Cherry-C1-chcGAS、p CAGGS-HA-chcGAS在LMH细胞中FAdV-4感染前后进行细胞定位。结果显示,chcGAS基因全长1317bp,编码438个氨基酸;生物信息学分析表明该蛋白为稳定亲水性蛋白,无信号肽区域和跨膜结构域,可能存在40个磷酸化位点,二级结构预测该蛋白包含α螺旋、β转角、无规卷曲及延伸链4种类型。分析发现cGAS在物种间同源性虽然不高,但由于其结构域中含有Mab-21使鸡cGAS在进化上比较保守并且鸡cGAS与鸭亲缘关系较近,与鱼类亲缘关系最远;组织分布表达量显示chcGAS在各个组织中均有表达,且在回肠、盲肠、胸腺中具有高表达量,在脑、气管、肾中表达量较低;成功表达出chcGAS蛋白且主要以上清液的形式表达;观察其定位在FAdV-4感染前后的变化情况,当未感染时chcGAS主要定位于细胞核膜上,但当感染后chcGAS定位从细胞核膜转移至细胞质中。***在FAdV-4感染复制中的作用研究为探究chcGAS对FAdV-4复制的影响,本研究将真核表达载体p CMV-3×FlagchcGAS转染至LMH细胞中再用FAdV-4感染,收取感染后的细胞样品,利用RTq PCR测定IFN-β、炎症因子及一些抗病毒蛋白基因的表达水平,结果表明,chcGAS可以增强IFN-β启动子活性,并促进IL-6、IL-8、IFN-α、IRF7、TBK1、NF-κB、Mx-1、IFITM1、IFITM3的表达量,此外,将chcGAS过表达至LMH细胞中,转染24h用FAdV-4感染细胞,通过RT-q PCR、Westren blot及IFA技术分别检测FAdV-4病毒的拷贝数、蛋白表达水平及FAdV-4的复制,分析结果发现chcGAS的表达在不同水平都表现出对FAdV-4具有一定的抑制作用。3.稳定表达chcGAS的DF-1细胞系的筛选与鉴定为了后续深入研究chcGAS参与天然免疫的相关作用,通过慢病毒包装系统构建稳定表达chcGAS的DF-1细胞系,首先利用同源重组技术构建chcGAS基因重组慢病毒表达载体,然后将该慢病毒表达质粒与另外两个辅助质粒(p MD2.G、ps PAX2)共转染到293T细胞中进行慢病毒包装获得慢病毒液,感染DF-1细胞,感染48h后用嘌呤霉素持续加压筛选待所有细胞均出现绿色荧光则表明细胞系筛选完成,并对筛选的细胞系进行Westren blot鉴定,结果表明,成功构建了稳定表达chcGAS的细胞系。综上所述,本研究成功克隆表达出鸡cGAS基因并对该蛋白的基本特性进行了分析,分析其定位发现当DNA病毒FAdV-4感染过表达chcGAS后可从细胞核膜转移到细胞质中;探明chcGAS在FAdV-4感染诱导IFN-β、炎症因子、抗病毒蛋白的产生及病毒复制中的作用,明确了chcGAS可以调控抗病毒天然免疫反应从而对FAdV-4的复制具有一定的抑制作用,为研究FAdV-4与cGAS-STING信号通路的关联调控机制提供了重要科学依据;最后本研究构建了稳定表达chcGAS的DF-1细胞系,为深入研究chcGAS在禽类中的免疫调控机制以及其在疫苗研发中的应用提供了有价值的信息。

关键词：血清4型禽腺病毒鸡cGAS Ⅰ型干扰素 DF-1细胞系抗病毒天然免疫

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变压器冷却器控制箱N线互通问题改造

电工技术 2016年第8期 62-63,105页

作者：曹影丽三门核电有限公司技术支持处浙江台州317100

三门核电主变、厂变及辅变冷却器控制箱两路电源N线在箱内并接,造成TN-S制低压接线N线互通,当一路电源的下游馈线出现接地故障时,系统出现接地环流,可能引起另一路电源保护装置误动或拒动。以三门核电主变冷却器控制箱改造为例,提出可... 详细信息

三门核电主变、厂变及辅变冷却器控制箱两路电源N线在箱内并接,造成TN-S制低压接线N线互通,当一路电源的下游馈线出现接地故障时,系统出现接地环流,可能引起另一路电源保护装置误动或拒动。以三门核电主变冷却器控制箱改造为例,提出可行改造方案。

关键词：变压器 TN—S制 N线连通换流误动

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核电厂1E级UPS系统短路故障分析

电气应用 2020年第9期39卷 18-22页

作者：陶果曹影丽上海核工程研究设计院有限公司上海200233 三门核电有限公司浙江三门317100

分析了核电站1E级UPS系统结构,研究了系统供电特性,建立了系统供电和短路电流分析模型,计算了线路故障情况下的故障电流和动作时间,分析了保护设备的有效性和选择性。

关键词： 1E级 UPS系统短路

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案例教学法在呼吸内科护理教学中的应用

中国继续医学教育 2023年第7期15卷 108-112页

作者：曹影丽张海丽赤峰市医院呼吸与危重症医学科内蒙古赤峰024000

目的探讨案例教学法在呼吸内科护理教学中的应用效果。方法选取2019年6—12月于赤峰市医院呼吸内科实习的47名护理专业学生作为观察对象,按随机数表法将其分为观察组(n=24)、参考组(n=23)。观察组予以案例教学法,参考组予以传统教学法... 详细信息

目的探讨案例教学法在呼吸内科护理教学中的应用效果。方法选取2019年6—12月于赤峰市医院呼吸内科实习的47名护理专业学生作为观察对象,按随机数表法将其分为观察组(n=24)、参考组(n=23)。观察组予以案例教学法,参考组予以传统教学法,对比两组单元测试成绩;对比两组教学查房效果评分;对比两组护士行为实践量表(nursing practice inventor,NPI)评分;对比两组对教学方式的满意度。结果两组单元测试中的基础部分成绩差异无统计学意义(P> 0.05);观察组案例部分成绩与总成绩均较参考组高,差异有统计学意义(P <0.05)。观察组教学查房效果评分均较参考组高,差异有统计学意义(P <0.05)。观察组NPI中六个维度评分均较参考组高,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组对教学方式的满意度为95.83%,较参考组的73.91%高,差异有统计学意义(P <0.05)。结论案例教学法应用于呼吸内科护理教学中,有助于提高护理专业学生的案例分析成绩与总理论成绩,提高其教学查房效果,还有助于增强学生的护士实践能力,学生对该教学方式较为满意。

关键词：传统教学法案例教学法呼吸内科护理护理教学护士实践能力教学查房效果教学方式满意度

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沉管隧道土建结构数字化设计系统研发与应用

隧道建设(中英文) 2024年

作者：曹影峰刘洪洲王勇刘曦中交公路规划设计院有限公司

为填补沉管隧道在数字化技术标准和专用软件工具方面的空白，提高沉管隧道数字化设计质量和效率，本文采用标准编制和软件编程相结合的方式开展沉管隧道土建结构数字化设计系统的研发。首先，总结分析了沉管隧道设计实践经验并提炼数字... 详细信息

为填补沉管隧道在数字化技术标准和专用软件工具方面的空白，提高沉管隧道数字化设计质量和效率，本文采用标准编制和软件编程相结合的方式开展沉管隧道土建结构数字化设计系统的研发。首先，总结分析了沉管隧道设计实践经验并提炼数字化设计需求，编制形成了《沉管隧道数字化设计交付标准》。然后，以《沉管隧道数字化设计交付标准》为参考研发了沉管隧道土建结构数字化设计系统并在多个工程项目中应用验证。作者按数字化设计过程将软件系统划分为数字化设计、计算分析和信息添加三大模块，数字化设计模块解析用户录入的设计参数后，自动生成模型、图纸和工程量表；计算分析模块内置了抗浮、干舷计算等公式验算功能，并将数字化设计模块中的设计参数与现有沉管隧道有限元计算软件建立数据联动关系，从而提高计算效率；信息添加模块将模型的分类编码和信息添加规则内置于软件中，实现分类编码、信息的快速化添加，为模型和数据的全生命周期传递打下基础。本文通过沉管隧道土建结构数字化设计系统的研究，构建了一套贯穿标准编制、建模、出图、算量、计算分析和信息添加的数字化软件研发技术方法体系，不仅为沉管隧道数字化设计提供了有力支撑，也为其他专业领域的数字化研究与开发提供重要借鉴。

关键词：沉管隧道土建结构数字化设计系统研发

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问题导向式自主学习的小幼衔接课程开发

上海课程教学研究 2024年第9期 3-8页

作者：曹影梵上海外国语大学附属外国语学校松江云间小学 201600

立足儿童视角,上海外国语大学附属外国语学校松江云间小学开发小幼衔接“云间自然·湿地生存探究”校本课程,提出问题导向式的课程设计和实施,激发儿童的好奇心和探索欲望,促进儿童展现、发展天然本能的学习品质和能力,从而实现小幼衔... 详细信息

立足儿童视角,上海外国语大学附属外国语学校松江云间小学开发小幼衔接“云间自然·湿地生存探究”校本课程,提出问题导向式的课程设计和实施,激发儿童的好奇心和探索欲望,促进儿童展现、发展天然本能的学习品质和能力,从而实现小幼衔接阶段学习适应方面的有效衔接,并培育儿童自主学习力和核心素养的全面发展。

关键词：小幼衔接学习适应问题导向自主学习校本课程

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编写路线图的几点反思

新课程(中) 2015年第10期 132-132页

作者：曹影丽安徽省太和县城关中心校

路线图(又称导学案)是用来引导学生如何自主学习的指南针,是高效课堂的必备工具,所以,一节课的成与败,路线图起着非常关键的作用。因此,在新课改进行中,路线图的编写与设计自然就要慎之又慎。

关键词：路线图编写高效课改引导

2019年至2021年周口市中小学生常见病监测分析

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临床研究 2024年第6期32卷 195-198页

作者：曹影蒋文张正尧周口市疾病预防控制中心传染病科河南周口466000

目的掌握2019年至2021年周口市中小学生常见病检出情况,为制定科学防控措施提供依据。方法对2019年至2021年中小学生的常见病进行筛查,按年龄、监测点、性别、学段对常见病检出情况进行分析。结果2019年至2021年共监测学生16539人,其中2... 详细信息

目的掌握2019年至2021年周口市中小学生常见病检出情况,为制定科学防控措施提供依据。方法对2019年至2021年中小学生的常见病进行筛查,按年龄、监测点、性别、学段对常见病检出情况进行分析。结果2019年至2021年共监测学生16539人,其中2019年监测4399人,2020年监测4587人,2021年监测7553人;城区7904人、郊县8635人;男生8013人、女生8526人,男女比例为1∶1.06;2019年至2021年学生视力不良、龋齿、营养不良、肥胖和脊柱弯曲检出率分别为60.85%、16.94%、4.63%、15.21%和1.03%。不同年龄组视力不良、龋齿、肥胖和脊柱弯曲检出率差异有统计学意义(P<0.05)。城区视力不良、营养不良和脊柱弯曲检出率均高于郊县,差异均有统计学意义(P<0.05);郊县龋齿和肥胖检出率均高于城区,差异均有统计学意义(P<0.05)。女生视力不良和龋齿检出率高于男生,差异均有统计学意义(P<0.05);男生营养不良和肥胖检出率高于女生,差异均有统计学意义(P<0.05)。视力不良和脊柱弯曲检出率随学段升高而上升,差异均有统计学意义(P<0.05);龋齿和肥胖检出率随学段升高而下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论视力不良是周口市学生常见病的高发类型,应予以重点关注。

关键词：中小学生常见病监测视力不良龋齿

内科护理管理中绩效考核体系的应用效果及对护理质量的影响

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中国卫生产业 2023年第4期20卷 1-4,22页

作者：曹影丽张桂艳赤峰市医院呼吸与危重症医学科内蒙古赤峰024099

目的探讨呼吸内科护理管理中绩效考核体系的应用效果及对护理质量的影响。方法选取2020年1月—2021年12月赤峰市医院呼吸内科护理管理工作的17名护理人员为研究对象,于2020年1—10月实施常规护理管理(对照组),于2020年11月—2021年12月... 详细信息

目的探讨呼吸内科护理管理中绩效考核体系的应用效果及对护理质量的影响。方法选取2020年1月—2021年12月赤峰市医院呼吸内科护理管理工作的17名护理人员为研究对象,于2020年1—10月实施常规护理管理(对照组),于2020年11月—2021年12月实施绩效考核体系管理(观察组)。对比两种管理模式下护理人员培训考核成绩、护理服务质量、护理满意度及护理纠纷发生率。结果观察组培训考核分数显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05),观察组服务态度、工作效率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组护理纠纷事件发生率(11.76%)低于对照组(47.06%),差异有统计学意义(χ^(2)=29.451,P<0.001)。结论通过在呼吸内科护理管理中有效应用绩效考核体系,能够显著提升护理人员的护理水平,提高培训考核成绩与合格率,提升护理质量,提高护理满意度,值得在临床上推广。

关键词：呼吸内科护理管理绩效考核应用效果护理质量