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树突状细胞负载肝癌抗原肽疫苗体外诱导特异性免疫学反应的研究

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第4期19卷 406-408页

作者：曲萍隋延仿郭爱林曹云新董海龙禄韶英叶菁张秀敏第四军医大学病理学教研室陕西西安710032 第四军医大学免疫学教研室陕西西安710032 西安交通大学第一医院普外科陕西西安710061

目的 :研究树突状细胞 (dendriticcell,DC)负载肝癌抗原肽EPVTKAEML体外诱导特异性CTL的能力及其抑癌效果。方法 :用顺序特异引物聚合酶链反应技术 (PCR SSP)选择HLA B7表型供者 ,从脾组织中分离、培养DC EPVTKAEML特异性CTL。用51Cr释... 详细信息

目的 :研究树突状细胞 (dendriticcell,DC)负载肝癌抗原肽EPVTKAEML体外诱导特异性CTL的能力及其抑癌效果。方法 :用顺序特异引物聚合酶链反应技术 (PCR SSP)选择HLA B7表型供者 ,从脾组织中分离、培养DC EPVTKAEML特异性CTL。用51Cr释放法检测CTL的杀伤活性 ,并用抗HLA I分子单抗 (mAb)进行杀伤抑制实验。结果 :找到 4例HLA B7杂合子供者 ,用DC负载HLA B7限制的抗原肽EPVTKAEML可诱导特异性CTL反应 ,对肝癌细胞HHCC有较强的杀伤作用。结论

关键词：树突状细胞疫苗抗原肽肝癌 HLA-B7

超抗原对NK细胞CD226分子表达与功能的调节

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第1期22卷 4-6页

作者：张赟程光韩卫宁曹云新金伯泉第四军医大学免疫学教研室陕西西安710032 第四军医大学西京医院神经外科陕西西安710032

目的研究超抗原对NK细胞CD226分子表达与功能的调节。方法以超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A/B(SEA/B)活化PBMC为模型,应用双重免疫荧光染色和流式细胞术分析,观察CD226分子在NK细胞上的变化;采用51Cr释放实验,观察NK细胞在超抗原作用下杀... 详细信息

目的研究超抗原对NK细胞CD226分子表达与功能的调节。方法以超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A/B(SEA/B)活化PBMC为模型,应用双重免疫荧光染色和流式细胞术分析,观察CD226分子在NK细胞上的变化;采用51Cr释放实验,观察NK细胞在超抗原作用下杀伤功能的改变;利用激光共聚焦显微镜,观察CD226分子在NK细胞杀伤相的分布。结果在静止PBMC中,CD56+NK细胞的百分率为12.3%,CD56+CD226+细胞仅为1.4%。当效靶比为5∶1时,NK细胞对K562细胞的杀伤率为(3.2±0.2)%。当0.1mg/LSEA或SEB刺激PBMC1d后,CD56+NK细胞的百分率分别为13.5%和14.1%,CD226在NK细胞上的表达水平明显升高,且主要表达在CD56dim细胞上。在刺激第2天,SEA组CD56+CD226+占CD56+细胞69.1%,SEB组CD56+CD226+占CD56+细胞64.3%。刺激第3天,CD226在NK细胞上的表达水平均较第2天明显下降。在超抗原0.1mg/L作用3d中,SEA组和SEB组NK细胞杀伤率均明显高于同期未刺激组NK细胞的杀伤率及新鲜分离NK细胞的杀伤率(P<0.05),在作用的第2天,SEA组和SEB组杀伤率均达到峰值分别为(82.3±6.9)%和(80.6±7.5)%。激光共聚焦结果显示,CD226分子与LFA-1分子共定位于NK细胞与K562细胞的接触部位。结论超抗原SEA和SEB可提高NK细胞杀伤活性,可能与其促进CD226分子在NK细胞上的表达相关,CD226分子可能参与NK细胞免疫突触的形成。

关键词： CD226 NK细胞亚群超抗原

肾综合征出血热患者T_H1/T_H2、Tc1/Tc2亚群比例及有关细胞因子变化的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2002年第6期22卷 610-613页

作者：刘京梅刘雪松欧阳为明朱勇李琦曹云新金伯泉第四军医大学免疫学教研室西安710032

目的　探讨肾综合征出血热 (HFRS)患者TH1样和TH2样细胞平衡状态以及血清中细胞因子的变化。方法　收集HFRS患者和健康个体血清 ,采用夹心ELISA方法测定IFN γ、IL 4和TNF α的水平。分离PBMC ,采用三色流式细胞术分析HFRS患者CD4 + T... 详细信息

目的　探讨肾综合征出血热 (HFRS)患者TH1样和TH2样细胞平衡状态以及血清中细胞因子的变化。方法　收集HFRS患者和健康个体血清 ,采用夹心ELISA方法测定IFN γ、IL 4和TNF α的水平。分离PBMC ,采用三色流式细胞术分析HFRS患者CD4 + T细胞和CD8+ T细胞中IFN γ+ 和IL 4 + 细胞的百分率 ,观察HFRS患者TH1 TH2、Tc1 Tc2比例的变化 ,比较了不同病程和病情HFRS患者血清中上述指标的变化。结果　HFRS患者血清中TH1类和TH2类细胞因子水平均明显升高 ,其中IFN γ和IL 4的平均水平显著高于健康个体 (P =0 .0 16 ,P =0 .0 19)。HFRS患者PBMC中TH1、TH2、Tc1、Tc2细胞的平均百分率均高于健康个体 ,Tc细胞比例的改变较TH 细胞明显 ,TH1样细胞的比例较TH2样细胞变化明显。发热期患者血清中IFN γ、IL 4和TNF α的水平明显高于恢复期患者。发热期的重症患者的IFN γ水平升高较轻症明显。结论　HFRS患者血清中IFN γ和IL 4水平以及PBMC中TH1、TH2、Tc1和Tc2细胞的比例均有所升高 ,发热期的患者和重症HFRS患者上述参数变化更明显。

关键词：肾综合征出血热 TH1/TH2 Tc1/Tc2 细胞因子 HFRS 夹心ELISA法三色流式细胞术

IL-15对人外周血NK细胞内TNF-α表达的促进作用

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第4期22卷 452-453页

作者：董茜张赟赵学辉周福波蔡培曹云新第四军医大学口腔医学系陕西西安710032 第四军医大学基础部免疫学教研室陕西西安710032

目的:探讨IL-15对人外周血NK细胞胞内TNF-α表达的调节作用。方法:以密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,在加入IL-15(培养3d)条件下,以双重免疫荧光染色和流式细胞术分析,检测TNF-α在NK细胞胞内表达水平的变化。结果:流式细胞术分... 详细信息

目的:探讨IL-15对人外周血NK细胞胞内TNF-α表达的调节作用。方法:以密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,在加入IL-15(培养3d)条件下,以双重免疫荧光染色和流式细胞术分析,检测TNF-α在NK细胞胞内表达水平的变化。结果:流式细胞术分析显示,在静止CD56+NK细胞的胞内TNF-α表达率为65.0%;加入终浓度为100000U/L的IL-15,培养3d后,NK细胞胞内TNF-α表达率为85.9%。结论:IL-15可明显促进人外周血NK细胞胞内TNF-α水平。

关键词： NK细胞胞内 TNF-α IL-15

FAP-1反义寡核苷酸联合卡铂对卵巢癌细胞SKOV3凋亡的作用

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癌症 2004年第8期23卷 885-889页

作者：王滨郑维国辛晓燕齐荣义于月成曹云新中国人民解放军第254医院妇产科天津300142 第四军医大学附属西京医院妇产科陕西西安710032 第四军医大学免疫学教研室陕西西安710032

背景与目的实验已证明,Fas相关磷酸酯酶-1(FAP-1)在卵巢癌细胞SKOV3中有高表达,可能对卵巢癌的发病与耐药具有重要意义。本研究应用反义核酸技术探讨FAP-1反义寡核苷酸(FAP-1ASODN)联合卡铂对SKOV3细胞凋亡的作用。方法反义核苷酸技术将... 详细信息

背景与目的实验已证明,Fas相关磷酸酯酶-1(FAP-1)在卵巢癌细胞SKOV3中有高表达,可能对卵巢癌的发病与耐药具有重要意义。本研究应用反义核酸技术探讨FAP-1反义寡核苷酸(FAP-1ASODN)联合卡铂对SKOV3细胞凋亡的作用。方法反义核苷酸技术将FAP-1ASODN转染SKOV3细胞。采用逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)检测转染前后FAP-1mRNA的表达,采用流式细胞术(FCM)分析细胞周期与细胞凋亡率,噻唑蓝法(MTT法)测定FAP-1ASODN与40μg/ml卡铂共同作用后对SKOV3细胞生长的影响。结果经FAP-1ASODN处理24h后,与对照组及FAP-1正义寡核苷酸(SODN)组比较,反义组的FAP-1mRNA表达明显减弱。FCM结果显示,卡铂+FAP-1ASODN组在24～72h的细胞凋亡率明显高于单用ASODN组及单用卡铂组,差异有显著性(P0.05)。结论FAP-1ASODN转染可以有效抑制FAP-1基因的表达,同时可以增强卵巢癌细胞对卡铂诱导凋亡的敏感性。

关键词： Fas相关磷酸酯酶-1 反义寡核苷酸卵巢肿瘤卡铂凋亡

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流式细胞术细胞周期分析样品保存条件的研究

细胞与分子免疫学杂志 1999年第4期15卷 317-318页

作者：曹云新刘智广张晓楠第四军医大学中心实验室西安710032

氟他胺耐受性前列腺癌细胞系LNCaP-flu的建立

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中华实验外科杂志 2005年第3期22卷 341-343页

作者：汪涌邵晨曹云新师长宏张运涛刘凡第四军医大学西京医院泌尿外科西安710032 第四军医大学免疫学教研室第四军医大学动物实验中心第四军医大学唐都医院泌尿外科

目的建立氟他胺耐受前列腺癌细胞系LNCaPflu,并初步研究其细胞特性。方法在体外氟他胺作用下,连续培养LNCaP细胞,得到可在10-7mol/L氢化氟他胺中稳定生长的LNCaP亚系,LNCaPflu。使用相差显微镜,电子显微镜,流式细胞仪,四甲基偶氮唑蓝(M... 详细信息

目的建立氟他胺耐受前列腺癌细胞系LNCaPflu,并初步研究其细胞特性。方法在体外氟他胺作用下,连续培养LNCaP细胞,得到可在10-7mol/L氢化氟他胺中稳定生长的LNCaP亚系,LNCaPflu。使用相差显微镜,电子显微镜,流式细胞仪,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、放免法和transwell穿膜实验对细胞特性进行鉴定。结果建立氟他胺耐药细胞系LNCaPflu,与普通LNCaP细胞相比,在氟他胺作用下,此细胞株(65.0±1.7)%处于G1期,明显少于对照组的(82.7±2.3)%(P0.05);穿膜侵袭能力未受氢化氟他胺明显影响,LNCaP穿膜数为(35.21±4.52)个/高倍视野,LNCaPflu为(26.15±3.69)个/高倍视野,(P>0.05)。结论LNCaP细胞经长时间体外培养可在氟他胺中稳定生长,LNCaPflu细胞可在体外模拟前列腺癌细胞由氟他胺敏感转化为氟他胺不敏感的过程。

关键词：氟他胺前列腺癌细胞 LNCaP细胞细胞特性耐受性视野放免法连续培养分泌生长

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人脾脏树突状细胞的培养及鉴定

第四军医大学学报 2005年第10期26卷 881-883页

作者：曹云新曲萍杨安钢第四军医大学基础部免疫学教研室陕西西安710033 第四军医大学基础部教学实验中心陕西西安710033

目的: 探讨从手术切除脾脏分离、培养树突状细胞(dendriticcell,DC)的方法.方法: 采用Ficoll淋巴细胞分离液分离脾淋巴细胞, 4h后弃悬浮细胞,加入含rhGM- CSF和rhIL- 4的RPMI- 1640完全培养液,用流式细胞仪(flowcytome ter,FCM)检测细... 详细信息

目的: 探讨从手术切除脾脏分离、培养树突状细胞(dendriticcell,DC)的方法.方法: 采用Ficoll淋巴细胞分离液分离脾淋巴细胞, 4h后弃悬浮细胞,加入含rhGM- CSF和rhIL- 4的RPMI- 1640完全培养液,用流式细胞仪(flowcytome ter,FCM)检测细胞表型.在光镜和电镜下观察细胞形态.结果: 所获脾脏DC与文献[1]报道的血液中DC有相同的表型特征.细胞表面CD80,CD83,CD1a,HLA -DR分子表达较高;扫描电镜观察发现,细胞呈不规则形状,膜表面向外伸出许多树枝样细长突起.结论: 我们建立了一种从人脾脏中分离、培养树突状细胞的方法,可从脾脏中获得数量较多、纯度较高的DC.为人脾脏DC的研究提供了实用的技术方法,为进一步研究人脾脏DC的功能奠定了基础,同时为DC瘤苗的来源开创了一条新途径.

关键词：树突细胞脾脏细胞培养

磁场暴露对兔血液流变特性及血脂水平的影响(英文)

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中国临床康复 2004年第18期8卷 3670-3671页

作者：罗二平焦李成申广浩吴小明曹云新西安电子科技大学电子工程学院智能信息处理研究所陕西省西安市710033 解放军第四军医大学生物医学工程系军队卫生装备与计量学教研室陕西省西安市710033

背景:目前许多关于磁场生物效应的研究指出,低强度脉冲电磁场(low-intensitypulsedelectromagneticfields,LPEF)能改善血液流变学的指标、对心血管病能起到预防作用,但对其机制的阐述尚不明确。目的:探讨低强度脉冲电磁场暴露对兔血液... 详细信息

背景:目前许多关于磁场生物效应的研究指出,低强度脉冲电磁场(low-intensitypulsedelectromagneticfields,LPEF)能改善血液流变学的指标、对心血管病能起到预防作用,但对其机制的阐述尚不明确。目的:探讨低强度脉冲电磁场暴露对兔血液流变特性及血脂水平的影响,研究LPEF预防心血管疾病的机制。设计:随机对照的实验研究。地点、材料和干预:本实验的全过程在解放军第四军医大学实验动物中心完成。实验动物采用24只雌性5月龄新西兰大耳白兔(解放军第四军医大学实验动物中心提供)。动物被随机分为正常组、模型组、磁场组,正常组用正常饲料,模型组、磁场组用高胆固醇饲料饲养。其中磁场组饲养于磁场环境中,暴磁时间为10h/d,所采用激励磁场的强度为4×10-4T,频率为15Hz。饲养8周后测定其血液流变特性和血脂水平等指标。主要观察指标:LPEF对兔血液流变学各项指标(血细胞比容、血浆黏度、全血高切黏度、全血低切黏度、高切还原黏度、低切还原黏度、红细胞聚集指数)以及血脂水平(胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白等指标)的影响。结果:模型组与正常组比较,血液流变学各项指标及血脂水平差异具有显著性意义(t=2.147～2.859,P<0.05);磁场组与模型组比较,血清中胆固醇犤模型组:(14.71±0.22)mmol/L,磁场组:(8.75±1.

关键词：电磁场电刺激疗法脑血管意外/预防和控制心血管疾病/预防和控制血液流变学/辐射效应红细胞聚集血细胞比容血液黏度/辐射效应