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流式细胞术在外周血嗜酸性粒细胞及其相关分子检测中的应用

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第4期20卷 478-480页

作者：曹云新史皆然韩卫宁第四军医大学基础部免疫学教研室陕西西安710032 第四军医大学西京医院呼吸科陕西西安710032

目的 :应用流式细胞术 ,建立一种准确、外周血嗜酸性细胞及其相关分子的快速测定方法。方法 :采集正常人外周血 ,用茶碱 (10 -4mol/L)、地塞米松 (10 -4mol/L)和rhIL 5 (10 -8mol/L)预处理 ,用抗CD16 PEmAb与FITC标记的抗相关细胞分子... 详细信息

目的 :应用流式细胞术 ,建立一种准确、外周血嗜酸性细胞及其相关分子的快速测定方法。方法 :采集正常人外周血 ,用茶碱 (10 -4mol/L)、地塞米松 (10 -4mol/L)和rhIL 5 (10 -8mol/L)预处理 ,用抗CD16 PEmAb与FITC标记的抗相关细胞分子的进行双标记染色 ,并以CD16 FL2辅助设门 ,准确找到嗜酸性粒细胞群 ,然后对其相关分子进行分析。结果 :嗜酸性粒细胞定位准确 ,茶碱和地塞米松能够抑制IL 5引起的Eos的活化并使其表面的CD6 2L脱落。结论 :应用流式细胞术与二色荧光mAbCD16 PE阴性细胞法设门 ,可准确快速地检测外周血中嗜酸性粒细胞及分子的表达率 ,血液用样量小 ,人为影响因素少 ,是免疫学基础研究和临床检验较理想的测定方法。

关键词：流式细胞术外周血嗜酸性细胞免疫分子

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大鼠外周血淋巴细胞FCM的快速测定

细胞与分子免疫学杂志 2000年第4期16卷 S015-S015,S028页

作者：曹云新王曦第四军医大学中心实验室神经生物研究所陕西西安

p38MAPK抑制剂SB-202190对大鼠胶质瘤C6细胞的双重作用

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中国药理学通报 2002年第5期18卷 512-515页

作者：张丰李青曹云新王莉邵秋杰林圣彩第四军医大学西京医院病理科西安710033 第四军医大学免疫学教研室西安7100332 香港科技大学生化教研室香港00852

目的　探讨 p38MAPK抑制剂SB 2 0 2 190对C6细胞生物活性的影响。方法　采用透射电镜的方法和DNA琼脂糖凝胶电泳的方法观察SB 2 0 2 190诱导胶质瘤细胞的凋亡 ;应用流式细胞仪检测细胞周期变化和是否有凋亡发生。结果　浓度分别为 10、... 详细信息

目的　探讨 p38MAPK抑制剂SB 2 0 2 190对C6细胞生物活性的影响。方法　采用透射电镜的方法和DNA琼脂糖凝胶电泳的方法观察SB 2 0 2 190诱导胶质瘤细胞的凋亡 ;应用流式细胞仪检测细胞周期变化和是否有凋亡发生。结果　浓度分别为 10、2 0、4 0 μmol·L-1的SB 2 0 2 190能促进C6细胞的细胞周期从G1期过度到S期 ;但 6 0 μmol·L-1的SB 2 0 2 190却诱导C6细胞凋亡 ,凋亡率与时间呈正相关 ,透射电镜观察结果显示 ,凋亡细胞的体积缩小、细胞核浓聚缩小 ,染色质固缩聚集于核膜下 ,胞质浓缩 ,有的细胞染色质浓缩至核膜下成新月状 ;琼脂糖凝胶电泳呈现出特征性的DNA“梯状”带。结论　SB 2 0 2 190在低浓度时促进C6细胞增殖 ,高浓度时诱导细胞凋亡。

关键词： SB-202190 p38MAPK抑制剂细胞周期细胞凋亡 C6细胞生物活性透射电镜胶质瘤细胞动物实验

金喜素抑制JM细胞增殖并诱导其凋亡的流式细胞术分析

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中国药理学通报 2004年第6期20卷 714-715页

作者：曹云新韩卫宁白庆咸杨安钢第四军医大学免疫学教研室西安710032 第四军医大学第一附属医院血液科西安710032

金喜素(topotecan，TPT)为喜树碱类化疗药物，可以选择性地抑制拓扑异构酶Ⅰ(Topoisomerase Ⅰ，Topo Ⅰ)。以往的研究表明，该药物可以用于慢性粒单细胞白血病、骨髓增生异常综合征(MDS)和实体瘤等的治疗。T淋巴细胞白血病在临床上多... 详细信息

金喜素(topotecan，TPT)为喜树碱类化疗药物，可以选择性地抑制拓扑异构酶Ⅰ(Topoisomerase Ⅰ，Topo Ⅰ)。以往的研究表明，该药物可以用于慢性粒单细胞白血病、骨髓增生异常综合征(MDS)和实体瘤等的治疗。T淋巴细胞白血病在临床上多见于儿童，起病急，病情重，严重危害患儿的健康。JM为急性T淋巴母细胞白血病细胞株。金喜素对JM细胞株作用的研究未见文献报道。本研究旨在观察金喜素对JM细胞株增殖的抑制作用及其诱导该细胞株发生凋亡的作用。

关键词：流式细胞术金喜素 JM细胞增殖凋亡

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Claudin 18在胰腺癌细胞中的表达

细胞与分子免疫学杂志 2009年第12期25卷 1202-1203,1206页

作者：曹云新张松杨安钢第四军医大学免疫学教研室陕西西安710032 第四军医大学药物研究所陕西西安710032

目的:检测人胰腺癌细胞中Claudin 18的表达,为临床诊断胰腺癌提供新的标志物和治疗靶位。方法:采用RT-PCR、免疫印迹和流式细胞术分别从基因、蛋白和细胞整体水平上检测胰腺导管腺癌和胰岛细胞癌细胞表面人源性Claudin 18的mRNA转录和... 详细信息

目的:检测人胰腺癌细胞中Claudin 18的表达,为临床诊断胰腺癌提供新的标志物和治疗靶位。方法:采用RT-PCR、免疫印迹和流式细胞术分别从基因、蛋白和细胞整体水平上检测胰腺导管腺癌和胰岛细胞癌细胞表面人源性Claudin 18的mRNA转录和蛋白的表达。结果:胰腺导管腺癌PANC-1、BX-PC-3和AS-PC-1细胞均可以在mRNA、蛋白和细胞整体的不同水平表达Claudin 18;而胰岛细胞癌RINm5F细胞则不表达Claudin 18。同时,对照细胞胃印戒细胞癌KATOIII也可以大量表达Claudin 18。结论:多数胰腺导管腺癌细胞系均可以在不同水平表达Claudin 18,而胰岛细胞癌细胞系则不能表达Claudin 18,该结果与前期胰腺癌患者的免疫组化检测结果一致。

关键词： Claudin18 胰腺导管腺癌标志物

人骨髓间质干细胞作为骨、软骨组织工程种子细胞的实验研究

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第3期20卷 306-309页

作者：庞永刚崔鹏程陈文弦曹云新第四军医大学唐都医院耳鼻喉科陕西西安710032 第四军医大学基础部免疫学教研室陕西西安710032

目的 :探讨经体外扩增、诱导分化的人骨髓间质干细胞(humanbonemarrowmesenchymalstemcells,hMSC)作为组织工程化骨、软骨种子细胞的可行性。方法 :体外分离、培养、扩增hMSC ,以流式细胞仪检测hMSC的表面抗原。诱导hMSC向成骨细胞、软... 详细信息

目的 :探讨经体外扩增、诱导分化的人骨髓间质干细胞(humanbonemarrowmesenchymalstemcells,hMSC)作为组织工程化骨、软骨种子细胞的可行性。方法 :体外分离、培养、扩增hMSC ,以流式细胞仪检测hMSC的表面抗原。诱导hMSC向成骨细胞、软骨细胞分化。以倒置显微镜和电子显微镜观察细胞的形态 ;以组织化学、免疫组织化学和RT PCR ,检测成骨细胞、软骨细胞的特异性标志物。结果 :分离得到的细胞可表达hMSC的特异抗原 ,在体外扩增 15代以上 ,其形态及表面抗原保持不变。成骨诱导培养的细胞上清液中ALP的含量高于对照组 (P <0 .0 5 )。成骨及成软骨诱导的细胞形态均由成纤维样梭形向多边形转变。透射电镜观察可见大量扩张的粗面内质网、高尔基体及线粒体。扫描电镜观察可见经成骨诱导后的细胞表面有钙盐沉积 ,成软骨诱导的细胞表面有胶原样突起。成骨诱导培养后 ,可见碱性磷酸酶 (ALP)染色、Ca结节染色、胶原 Ⅰ (COL Ⅰ )及骨钙素 (osteocalcin ,OC)免疫组化染色阳性 ,同时RT PCR检测COL Ⅰ、OCmRNA表达阳性。成软骨诱导后 ,甲苯胺蓝染色见细胞周围有大量的异染性基质 ,免疫组化和RT PCR检测COL Ⅱ表达阳性。结论 :hMSC在体外可大量扩增。在特定培养液诱导下 ,可向成骨细胞及软骨细胞转化 ,可作为骨。

关键词：间质干细胞成骨细胞软骨细胞骨髓组织工程

CD3/CD8设门在FCM检测Th1/Th2亚型中的应用

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细胞与分子免疫学杂志 2002年第6期18卷 638-639页

作者：曹云新金伯泉韩卫宁第四军医大学免疫学教研室陕西西安710032

目的　探讨流式细胞术准确、灵敏检测Th1/Th2细胞的新方法。方法　采用荧光mAbCD3和CD8设门 ,准确找到CD4 + T细胞群 ,然后进行Th1/Th2细胞分析 ,并与单用CD4设门进行比较。结果　以CD3/CD8设门较单用CD4设门 ,对靶细胞的定位较为准确 ... 详细信息

目的　探讨流式细胞术准确、灵敏检测Th1/Th2细胞的新方法。方法　采用荧光mAbCD3和CD8设门 ,准确找到CD4 + T细胞群 ,然后进行Th1/Th2细胞分析 ,并与单用CD4设门进行比较。结果　以CD3/CD8设门较单用CD4设门 ,对靶细胞的定位较为准确 ,测量所获图形美观、清楚并有规律。结论　以CD3/CD8设门 ,可提高检测Th1/Th2细胞的准确性 ,同时也可应用于Tc1/Tc2细胞的检测分析。

关键词： Th1/Th2亚型流式细胞术 CD3 CD8 免疫学检测

胆囊腺瘤及腺癌细胞核DNA含量的测定和分析

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实用肿瘤杂志 1994年第3期9卷 153-154页

作者：惠延平曹云新第四军医大学唐都医院病理科第四军医大学中心实验室

本研究应用显微分光光度计对４１例胆囊良、恶性病变的细胞核ＤＮＡ含量进行了定量测定。结果显示：ＤＮＡ含量随病变加重而增高（慢性胆囊炎＜胆囊腺瘤＜胆囊腺瘤癌变＜胆囊腺癌），良、恶性病变之间有显著性差异（Ｐ＜０．０５～０．... 详细信息

本研究应用显微分光光度计对４１例胆囊良、恶性病变的细胞核ＤＮＡ含量进行了定量测定。结果显示：ＤＮＡ含量随病变加重而增高（慢性胆囊炎＜胆囊腺瘤＜胆囊腺瘤癌变＜胆囊腺癌），良、恶性病变之间有显著性差异（Ｐ＜０．０５～０．０１）。重点讨论了胆囊腺瘤与其癌变的细胞核ＤＮＡ含量变化特点，认为胆囊腺癌有癌变趋势。

关键词：分光光度计腺瘤胆囊肿瘤 DNA

蛋白激酶C的激活剂及抑制剂对胃癌耐药细胞系P-糖蛋白功能及表达的影响

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中华消化杂志 2001年第6期21卷 349-352页

作者：韩英时永全曹云新樊代明第四军医大学西京医院消化科西安710032 第四军医大学中心实验室

目的　探讨蛋白激酶C(proteinkinaseC ,PKC)的激活剂及抑制剂对胃癌耐药细胞系P 糖蛋白 (P glycoprotein ,Pgp)功能及表达的影响。方法　用免疫细胞化学及流式细胞仪方法检测Pgp在胃癌耐药细胞系SGC790 1/VCR及其药敏细胞系SGC790 1的... 详细信息

目的　探讨蛋白激酶C(proteinkinaseC ,PKC)的激活剂及抑制剂对胃癌耐药细胞系P 糖蛋白 (P glycoprotein ,Pgp)功能及表达的影响。方法　用免疫细胞化学及流式细胞仪方法检测Pgp在胃癌耐药细胞系SGC790 1/VCR及其药敏细胞系SGC790 1的表达 ,并观察了PKC的激活剂佛波酯 (phor bol 12 myristate 13 acctate ,PMA)和抑制剂H 7作用不同时间Pgp表达的变化。用免疫荧光双标记及共聚焦显微镜技术观察PKC α及Pgp在胃癌耐药细胞系及其药敏细胞系的共同表达。用罗丹明 12 3(Rohdamin 12 3,R12 3)作为荧光探针检测PMA及H 7对细胞内药物浓度的影响。结果　Pgp在耐药细胞系SGC790 1/VCR表达呈阳性 ,在药敏细胞系SGC790 1表达呈弱阳性。PKC α与Pgp在SGC790 1/VCR及SGC790 1细胞系细胞膜均有共同表达 ,以SGC790 1/VCR细胞系共同表达明显。PMA处理细胞 ,细胞内R12 3的平均荧光强度明显减低 ,Pgp的功能增强而表达减少 ,且有时间依赖性 ;H 7处理细胞 ,细胞内R12 3的平均荧光强度明显增加 ,Pgp的功能减弱而表达增加 ,也有时间依赖性。结论　PKC可能通过调节Pgp的功能与表达而参与胃癌细胞多药耐药的形成。

关键词：蛋白激酶C 多药耐药 P-糖蛋白胃癌