检索结果-南通市图书馆

基于牛白血病病毒gp51蛋白建立间接ELISA检测方法

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中国口岸科学技术 2021年第11期3卷 4-10页

作者：曹丙蕾刘敏张群王飞王群济南海关技术中心济南250014 青岛海关技术中心青岛266114

本研究通过扩增gp51蛋白基因,与pET-32a连接构建重组表达载体,经表达、纯化获得重组gp51蛋白。利用该蛋白为包被抗原,通过优化反应条件,建立牛血清中BLV抗体的间接ELISA方法。SDS-PAGE鉴定表明,成功表达纯化了预期大小为47 kDa的重组gp5... 详细信息

本研究通过扩增gp51蛋白基因,与pET-32a连接构建重组表达载体,经表达、纯化获得重组gp51蛋白。利用该蛋白为包被抗原,通过优化反应条件,建立牛血清中BLV抗体的间接ELISA方法。SDS-PAGE鉴定表明,成功表达纯化了预期大小为47 kDa的重组gp51蛋白。Western blot鉴定表示该蛋白具有较好的抗原性,与无关血清样本无反应原性。建立的间接ELISA方法中抗原的最佳包被量为200 ng/孔,待检牛血清的最佳稀释比例为1:100,结果表明,该方法具有较好的敏感性和特异性,重复性高,与进口ELISA试剂盒的结果符合率达97.8%以上,具有较好的应用前景。

关键词：牛白血病病毒牛地方流行性白血病 gp51蛋白表达 ELISA

金黄色葡萄球菌聚集因子A基因与牛IL-18基因真核共表达载体的构建与表达

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中国兽医学报 2010年第6期30卷 766-769,788页

作者：陈智刘少宁曹丙蕾孔娜李宏梅胡敬东赵宏坤山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 青岛农业大学食品科学与工程学院山东青岛266109

参照聚集因子A(Clumping factor A,ClfA)和牛白介素18(BoIL-18)cDNA序列分别设计引物进行扩增,将ClfA基因和BoIL-18基因分别插入到真核双表达载体pBUDCE4.1的CMV和EF-1α2个启动子的下游,构建携带2个目的基因的重组真核双表达载体pBUDCE... 详细信息

参照聚集因子A(Clumping factor A,ClfA)和牛白介素18(BoIL-18)cDNA序列分别设计引物进行扩增,将ClfA基因和BoIL-18基因分别插入到真核双表达载体pBUDCE4.1的CMV和EF-1α2个启动子的下游,构建携带2个目的基因的重组真核双表达载体pBUDCE/ClfA/BoIL-18。在Cellfectin Reagent的作用下转染293T细胞,用间接免疫荧光试验检测ClfA和BoIl-18蛋白。结果表明,重组质粒pBUDCE/ClfA/BoIL-18在293T细胞中同时表达了ClfA和BoIL-18蛋白。该重组载体的成功构建为研究ClfA和BoIL-18重组共表达产物的生物学活性及其防治奶牛金黄色葡萄球菌性乳腺炎的作用奠定基础。

关键词：金黄色葡萄球菌乳腺炎聚集因子A 牛白介素18 真核表达

PRRSV SD-TA变异毒株的分离及序列分析

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西南农业学报 2010年第5期23卷 1698-1702页

作者：邱洪凯曹丙蕾肖一红周恩民山东农业大学动物医学院山东泰安271018

从猪＂高热病＂病料中分离到一株猪繁殖与呼吸综合征病毒（SD-TA株）,该病毒能够被抗PRRSV N蛋白单克隆抗体所识别。根据GenBank PRRSV经典株（VR-2332）和变异株（JXA1）基因序列分别设计合成了10对引物,利用RT-PCR扩增其基因序列,分... 详细信息

从猪＂高热病＂病料中分离到一株猪繁殖与呼吸综合征病毒（SD-TA株）,该病毒能够被抗PRRSV N蛋白单克隆抗体所识别。根据GenBank PRRSV经典株（VR-2332）和变异株（JXA1）基因序列分别设计合成了10对引物,利用RT-PCR扩增其基因序列,分别得到了预期的基因片段,将扩增的cDNA片段克隆入pMD18-T载体并测序。应用DNASTAR软件分析,与国内外已发表毒株的序列进行比较。结果显示,与美洲型相比,PRRSV SD-TA株相应基因核苷酸同源性为89.3%-99.1%,并且在Nsp2上缺失了30个氨基酸;与欧洲型代表毒株LV株相比同源性为59.9%。遗传关系表明：SD-TA株属于高致病性变异株。

关键词： PRRSV 间接免疫荧光序列分析基因变异分析

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仔猪流行性腹泻综合防控方案

猪业科学 2015年第7期32卷 71-72页

作者：邱洪凯曹丙蕾闫文娟胡顺娜王涛临沂新程金锣牧业有限公司山东临沂276000 济南出入境检验检疫局山东济南250014 蒙阴联城兽医站山东临沂276200

猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的以仔猪高发病率、高死亡率为主要特征的急性高度接触性传染病[1]。2011年猪流行性腹泻病毒在全国大流行，导致许多大规模养殖公司的仔猪均出现流行性腹泻症状，其临床表现为呕吐... 详细信息

猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的以仔猪高发病率、高死亡率为主要特征的急性高度接触性传染病[1]。2011年猪流行性腹泻病毒在全国大流行，导致许多大规模养殖公司的仔猪均出现流行性腹泻症状，其临床表现为呕吐、水样腹泻和最终脱水死亡，给整个养猪业带来巨大的经济损失。因此，对仔猪流行性腹泻病毒的防控成为当务之急。为此笔者根据对猪场仔猪发病的调查及与实验室诊断相结合，谈谈当前猪流行性腹泻的综合防控对策，供同行参考。

关键词：猪流行性腹泻病毒综合防控接触性传染病大规模养殖腹泻症状临床表现水样腹泻经济损失

猪传染性胃肠炎病毒山东分离株SD-LY6的N蛋白基因序列分析及其表达纯化

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畜牧与兽医 2018年第11期50卷 83-87页

作者：姜焱曹丙蕾王凯民龙云凤王毅谦姜珊唐泰山江苏出入境检验检疫局江苏南京210001 济南出入境检验检疫局山东济南250014

为了获得能够用于猪传染性胃肠炎（TGE）鉴别诊断的抗原蛋白,本研究以猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）山东分离株SD-LY6核衣壳蛋白（N）基因为研究对象,对其进行引物设计并进行RT-PCR扩增,经克隆测序后对N蛋白基因序列进行分析;同时对N蛋白... 详细信息

为了获得能够用于猪传染性胃肠炎（TGE）鉴别诊断的抗原蛋白,本研究以猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）山东分离株SD-LY6核衣壳蛋白（N）基因为研究对象,对其进行引物设计并进行RT-PCR扩增,经克隆测序后对N蛋白基因序列进行分析;同时对N蛋白基因进行克隆,构建重组质粒pET-15b-TGEV-N,并进行IPTG诱导表达及纯化,利用SDS-PAGE和Western-blot进行检测。研究表明,TGEV SD-LY6株N蛋白基因序列高度保守,核苷酸以及氨基酸序列同源性均在97. 0%以上;获得了大小约为47 ku的纯化重组N蛋白,该重组N蛋白可以与猪传染性胃肠炎阳性血清发生特异性反应,具有较好的反应原性,与无关血清样本无交叉反应,可以作为TGE的诊断抗原,为下一步高效快速诊断方法的研究提供坚实的基础。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒核衣壳蛋白序列分析表达纯化

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草鱼冷冻鱼糜抗冻剂的复配研究

中国食品添加剂 2021年第12期32卷 82-88页

作者：潘洪民员艳苓曹丙蕾杜国辉范维江贾旭妹唐佳佳山东商业职业技术学院济南250103 济南海关技术中心济南250100

以草鱼冷冻鱼糜为研究对象,研究聚葡萄糖、乳糖醇和丙二醇对冷冻鱼糜的凝胶特性的影响,并通过正交试验筛选了抗冻剂的最佳复配配方。研究结果表明:冻藏15天之后,聚葡萄糖添加量为6%、乳糖醇添加量为0.5%、丙二醇添加量8%时抗冻效果最好... 详细信息

以草鱼冷冻鱼糜为研究对象,研究聚葡萄糖、乳糖醇和丙二醇对冷冻鱼糜的凝胶特性的影响,并通过正交试验筛选了抗冻剂的最佳复配配方。研究结果表明:冻藏15天之后,聚葡萄糖添加量为6%、乳糖醇添加量为0.5%、丙二醇添加量8%时抗冻效果最好,复配抗冻剂对冷冻鱼糜能够产生正向的、有益的影响。

关键词：草鱼冷冻鱼糜正交试验抗冻剂复配

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乳品中蜡样芽孢杆菌孢子检测技术的研究进展

中国口岸科学技术 2021年第12期3卷 68-72页

作者：刘敏薛燕飞曹丙蕾张群济南海关技术中心济南250014 青岛大港海关青岛266011

随着乳制品行业迅速发展,蜡样芽孢杆菌导致的乳品污染引起广泛关注。蜡样芽孢杆菌在自然界中无处不在,可在食物中只以孢子形式存在,因此需要直接检测或定量乳品中的孢子。本文综述了传统和新兴微生物法检测乳品中蜡样芽孢杆菌孢子的优缺... 详细信息

随着乳制品行业迅速发展,蜡样芽孢杆菌导致的乳品污染引起广泛关注。蜡样芽孢杆菌在自然界中无处不在,可在食物中只以孢子形式存在,因此需要直接检测或定量乳品中的孢子。本文综述了传统和新兴微生物法检测乳品中蜡样芽孢杆菌孢子的优缺点,涉及平板法、分子生物学、光学和生物传感器等方法。传统方法耗时、耗力,新型方法灵敏度高,简易性强,但特异性针对蜡样芽孢杆菌孢子检测的方法商业化程度低,基于新识别元素、分析技术和新材料的组合技术有待推广应用。

关键词：蜡样芽孢杆菌孢子检测乳品

猪流行性腹泻与猪传染性胃肠炎二重液相芯片检测方法的建立

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农业技术与装备 2021年第11期 144-145,147页

作者：曹丙蕾张群刘敏王群尹伟力济南海关技术中心山东济南250014 青岛海关技术中心山东青岛266114

为了鉴别猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎,研究建立了猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的二重液相芯片检测技术。结果表明,该检测方法特异性好,可同时区分诊断PEDV和TGEV,与荧光RT-PCR检测方法的符合率为100%,可有效区... 详细信息

为了鉴别猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎,研究建立了猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的二重液相芯片检测技术。结果表明,该检测方法特异性好,可同时区分诊断PEDV和TGEV,与荧光RT-PCR检测方法的符合率为100%,可有效区分诊断2种混合感染的疾病。

关键词：猪流行性腹泻猪传染性胃肠炎液相芯片杂交

焦磷酸测序技术在猪繁殖与呼吸综合征诊断检测中的应用

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农业技术与装备 2021年第12期 142-143,145页

作者：曹丙蕾张群刘敏王群尹伟力济南海关技术中心山东济南250014 青岛海关技术中心山东青岛264001

为建立高效准确的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)快速确诊的检测方法,基于RT-PCR的焦磷酸测序检测方法,采用PSQ Assay Design SW软件分析PRRSV N蛋白基因的保守序列,设计扩增引物和测序引物,经过RT-PCR扩增和焦磷酸测序后,通过直观的序列结... 详细信息

为建立高效准确的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)快速确诊的检测方法,基于RT-PCR的焦磷酸测序检测方法,采用PSQ Assay Design SW软件分析PRRSV N蛋白基因的保守序列,设计扩增引物和测序引物,经过RT-PCR扩增和焦磷酸测序后,通过直观的序列结果显示,可直接进行PRRSV的确证,所建立的焦磷酸测序检测方法特异性好,且提高了检出率和准确性,避免了假阳性的出现,为猪繁殖与呼吸综合征的快速确诊提供了技术支撑,建立了PRRSV N蛋白基因的焦磷酸测序方法。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒焦磷酸测序 PCR 鉴定