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乳酪中病原微生物安全性的研究进展

食品科技 2021年第10期46卷 311-315页

作者：刘敏张群曹丙蕾王飞中华人民共和国莱芜海关山东济南271100 济南海关技术中心山东济南250014

乳酪是世界各地广泛食用的传统乳制品,经常引发食源性疾病爆发。文章简要概述了乳酪中已识别的主要目标微生物。单核细胞增生李斯特氏菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、芽孢形成细菌等被认为是常见微生物病原体。综合分析了生产和贮藏过... 详细信息

乳酪是世界各地广泛食用的传统乳制品,经常引发食源性疾病爆发。文章简要概述了乳酪中已识别的主要目标微生物。单核细胞增生李斯特氏菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、芽孢形成细菌等被认为是常见微生物病原体。综合分析了生产和贮藏过程中影响微生物行为的各种内在和外在因素对乳酪中微生物的影响,pH值、a;、乳酸浓度、温度、原料乳等常被当作是生长预测模型中独立变量因子。为乳酪制作、熟化或储存条件下如何应对病原污染提供理论参考,有助于拓展乳酪生产和储存相关的预测微生物学领域知识,以达到提高食品公共卫生水平,保证食品质量安全的目的。

关键词：食品安全食源性病原体乳制品

重组酶聚合酶扩增技术在动物源性食品检测中的应用

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食品科技 2022年第8期47卷 312-316页

作者：曹丙蕾王群刘敏张群济南海关技术中心山东济南250014 青岛海关技术中心山东青岛266114

重组酶聚合酶扩增技术(RPA)是近几年发展起来的应用较广的新型恒温核酸扩增技术,特异性强、操作便捷、反应时间短。文章从RPA技术的工作原理、优势、存在问题、应用等方面进行了综合阐述,着力展开探讨了RPA技术在动物源性食品快速检测,... 详细信息

重组酶聚合酶扩增技术(RPA)是近几年发展起来的应用较广的新型恒温核酸扩增技术,特异性强、操作便捷、反应时间短。文章从RPA技术的工作原理、优势、存在问题、应用等方面进行了综合阐述,着力展开探讨了RPA技术在动物源性食品快速检测,尤其是在肉类掺假鉴定、微生物检测、病毒检测和寄生虫检测等领域的研究现状、应用情况以及发展前景等,为今后RPA技术在动物源性食品的快检中的应用,以及RPA快检设备的研发提供了大量的数据参考。

关键词：重组酶聚合酶扩增核酸检测动物源性食品

乳制品中肠炎沙门氏菌Salmonella enteritidis(CMCC 50041)生长预测模型的建立

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食品科技 2021年第5期46卷 290-295页

作者：刘敏张群曹丙蕾李国鹏中华人民共和国莱芜海关山东济南271100 济南海关技术中心山东济南250014

为研究乳制品中肠炎沙门氏菌Salmonella enteritidis(CMCC 50041)的生长规律,选用3种乳制品(液体乳、奶油、乳酪)作为实验对象,比较了4、8、15、25、35 ℃条件下肠炎沙门氏菌的生长数据。利用5种常用的一级模型(Gompertz模型、Baranyi... 详细信息

为研究乳制品中肠炎沙门氏菌Salmonella enteritidis(CMCC 50041)的生长规律,选用3种乳制品(液体乳、奶油、乳酪)作为实验对象,比较了4、8、15、25、35 ℃条件下肠炎沙门氏菌的生长数据。利用5种常用的一级模型(Gompertz模型、Baranyi模型、Logistic模型、Richards模型和MMF模型)对实验数据进行拟合,通过比较相关系数和均方误差,确定最适一级模型为Gompertz模型。用平方根模型方程描述温度、pH值和水分活度与比生长速率和延滞期的关系,得到肠炎沙门氏菌生长二级模型,并通过偏差值Bf和准确值Af进行了外部验证。结果表明,构建的一级和二级生长模型能够较好地描述乳制品中肠炎沙门氏菌的生长动态,从而为有效监控乳制品中肠炎沙门氏菌污染提供一定的参考。

关键词：乳制品肠炎沙门氏菌生长模型

A型禽流感病毒通用型核酸检测标准样品的研制及不确定度分析

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中国兽医学报 2014年第9期34卷 1471-1475,1506页

作者：孙涛雷质文邓明俊王群郑小龙梁成珠曹丙蕾凌宗帅山东出入境检验检疫局山东青岛266002 济南出入境检验检疫局山东济南250014

利用基因克隆和体外转录技术,制备A型禽流感病毒通用核酸检测阳性标准样品。根据禽流感基质蛋白基因M的序列,设计全长开放阅读框的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至pGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品,初步定量稀释后,混... 详细信息

利用基因克隆和体外转录技术,制备A型禽流感病毒通用核酸检测阳性标准样品。根据禽流感基质蛋白基因M的序列,设计全长开放阅读框的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至pGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品,初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准样品候选物。采用实时荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验,并委托外部实验室采用外标实时定量RT-PCR方法对转录的RNA片段进行定值。通过绘制荧光定量标准扩增曲线和协作标定的方式,计算标准物质含量（拷贝）,并进行不确定度的估算。均一性结果显示瓶间差异小于5%,稳定性试验表明室温20~25℃（相对湿度20%~50%）14d,2~8℃3个月以及-20℃保存1年的含量均无明显变化。核酸标准物质定值为（3.120±0.345）×10^8拷贝数,可用作禽流感病毒通用核酸检测的标准质控品。

关键词：计量学禽流感病毒荧光定量RT-PCR 标准样品

金黄色葡萄球菌聚集因子A蛋白的原核表达及抗血清活性分析

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中国兽医学报 2010年第1期30卷 29-31,46页

作者：陈智刘少宁牟凯曹丙蕾赵宏坤山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

采用PCR方法对金黄色葡萄球菌山东分离株ZFB1的聚集因子A(Clumping factor A,ClfA)基因进行扩增,并将其克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中获得重组克隆pGEX/ClfA,使ClfA与GST进行融合表达,然后利用原核表达的蛋白免疫小鼠制备抗血清,并采... 详细信息

采用PCR方法对金黄色葡萄球菌山东分离株ZFB1的聚集因子A(Clumping factor A,ClfA)基因进行扩增,并将其克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中获得重组克隆pGEX/ClfA,使ClfA与GST进行融合表达,然后利用原核表达的蛋白免疫小鼠制备抗血清,并采用黏附与黏附抑制试验对抗血清的活性进行分析。在SDS-PAGE和Western-blot试验中,表达产物相对分子质量(约67 000)同预期结果相符,与兔源抗ZFB1全价血清有特异的抗体结合活性。在黏附与黏附抑制试验中发现ClfA抗体能够抑制金黄色葡萄球菌在细胞表面的黏附。结果表明,ClfA可以作为保护性抗原,有助于动物抵抗金黄色葡萄球菌的侵入、定植和感染,从而为奶牛金黄色葡萄球菌性乳腺炎的防治提供了科学的试验依据。

关键词：金黄色葡萄球菌乳腺炎聚集因子A 原核表达抗血清活性

新城疫病毒中强毒株核酸检测用标准样品的研制

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中国预防兽医学报 2014年第6期36卷 462-466页

作者：孙涛周世良邓明俊郑小龙王群雷质文曹丙蕾凌宗帅梁成珠山东出入境检验检疫局山东青岛266002 潍坊市畜牧兽医局山东潍坊261041 济南出入境检验检疫局山东济南250014

为制备新城疫病毒（NDV）中强毒株核酸检测阳性标准参考样品，本研究以NDV中强毒株RNA为模板，设计NDV融合蛋白F基因特异性引物，通过RT-PCR扩增全长F基因，克隆于pGEM-T载体中，采用体外转录方法制备RNA纯品，初步定量稀释后，混合分... 详细信息

为制备新城疫病毒（NDV）中强毒株核酸检测阳性标准参考样品，本研究以NDV中强毒株RNA为模板，设计NDV融合蛋白F基因特异性引物，通过RT-PCR扩增全长F基因，克隆于pGEM-T载体中，采用体外转录方法制备RNA纯品，初步定量稀释后，混合分装作为核酸标准样品候选物。采用荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验，并委托其他实验室采用外标定量RT-PCR方法对转录的RNA片段进行定值。通过绘制荧光定量标准扩增曲线计算标准物质含量（拷贝），并根据委托单位的定值结果进行不确定度的估算。均一性结果显示瓶间差异小于5 %，稳定性试验表明室温20 ℃～25 ℃ 14 d，2 ℃～8 ℃ 3个月以及 -20 ℃保存一年RNA的含量均无明显变化。核酸标准样品定值为（1.632±0.029）×10^7拷贝，可以用作NDV中强毒株核酸检测的标准质控品。

关键词：新城疫病毒荧光定量RT-PCR 标准样品

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O型口蹄疫病毒核酸检测标准样品的制备

动物医学进展 2014年第2期35卷 45-50页

作者：孙涛梁成珠邓明俊郑小龙王群雷质文曹丙蕾凌宗帅山东出入境检验检疫局山东青岛266002 济南出入境检验检疫局山东济南250014

利用基因克隆和体外转录技术制备O型口蹄疫病毒（FMDV）核酸检测标准样品.设计O型FMDV 3D基因的全长开放阅读框的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至PGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品,初步定量稀释后,混合分装作为核酸标... 详细信息

利用基因克隆和体外转录技术制备O型口蹄疫病毒（FMDV）核酸检测标准样品.设计O型FMDV 3D基因的全长开放阅读框的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至PGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品,初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准样品候选物.采用实时荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验,并委托外部实验室采用外标实时定量RT-PCR方法对转录的RNA片段进行定值.通过绘制荧光定量标准扩增曲线计算标准物质含量（拷贝数）,并根据委托单位的定值结果进行不确定度的估算.均一性结果显示瓶间差异小于5％,稳定试验表明室温20℃～25℃（相对湿度20％～50％）14 d,2℃～8℃3个月及-20℃保存1年的含量均无明显变化.核酸标准物质定值为（1.260士0.485）×108 copies,可用作O型FMDV通用核酸检测的标准质控品.

关键词：定值 O型口蹄疫病毒实时定量RT-PCR 标准样品

山羊IL-18成熟蛋白在昆虫细胞／杆状病毒中的表达及其活性分析

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第2期27卷 173-176页

作者：王婷婷王希辉范忠玲陈金龙曹丙蕾孔娜胡敬东赵宏坤青岛农业大学食品科学与工程学院山东省肉类食品质量控制工程技术研究中心山东青岛266109 山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

目的:在昆虫细胞/杆状病毒中表达山羊白介素18(gIL-18)成熟蛋白,并对其生物学活性进行分析。方法:将编码山羊白介素18(gIL-18)成熟蛋白的基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBac Dual上,构建重组质粒pFastBac Dual-gIL18,将该重组质粒转化... 详细信息

目的:在昆虫细胞/杆状病毒中表达山羊白介素18(gIL-18)成熟蛋白,并对其生物学活性进行分析。方法:将编码山羊白介素18(gIL-18)成熟蛋白的基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBac Dual上,构建重组质粒pFastBac Dual-gIL18,将该重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,经三重抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-gIL18,在Cellfectin作用下,将Bacmid-gIL18转染昆虫细胞sf9,收获感染后不同时间段的细胞,进行SDS-PAGE、Western blot检测和生物学活性分析。结果:重组蛋白获得正确表达具有良好的免疫原性;生物学活性分析表明,重组蛋白能够促进淋巴细胞增殖、诱导淋巴细胞分泌IFN-γ。结论:用昆虫细胞/杆状病毒系统成功表达了gIL-18成熟蛋白,且具有良好的免疫原性和生物学活性,从而为进一步研究gIL-18作为免疫调节剂和免疫佐剂在生产上的应用奠定了基础。

关键词：山羊IL-18 杆状病毒昆虫细胞生物学活性

猪繁殖与呼吸综合征病毒山东分离株N蛋白基因的原核表达及其单克隆抗体的制备与鉴定

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西南农业学报 2014年第4期27卷 1772-1776页

作者：曹丙蕾张群凌宗帅邱洪凯杨超然济南出入境检验检疫局山东济南250014 山东正邦养殖有限公司山东济南250010 山东省实验中学山东济南250010

采集某发病猪场病料进行疑似PRRSV分离鉴定,经克隆测序获得一株美洲型的高致病性PRRSV SD-TA株分离株,并对其N蛋白(核衣壳蛋白)基因设计引物进行克隆转化,构建重组质粒pET-30a-ORF7,鉴定后经诱导表达纯化获得大小约为21KD(含6×His标签... 详细信息

采集某发病猪场病料进行疑似PRRSV分离鉴定,经克隆测序获得一株美洲型的高致病性PRRSV SD-TA株分离株,并对其N蛋白(核衣壳蛋白)基因设计引物进行克隆转化,构建重组质粒pET-30a-ORF7,鉴定后经诱导表达纯化获得大小约为21KD(含6×His标签蛋白)的重组N蛋白。将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA检测后取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,并对融合细胞上清进行抗体检测,通过有限稀释法,获得了2株能稳定分泌抗N蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为6D10和3H5,经鉴定后两者均为IgG1型,且识别于不同的抗原位点,经Western-blot和IFA检测,单抗6D10和3H5均能与N蛋白发生特异性反应,与无关蛋白无交叉反应,且均能与PRRSV经典株(VR株)和高致病性变异株(SD-TA株)感染的Marc-145细胞产生特异性反应。

关键词： PRRSV 单克隆抗体抗原位点 Western-blot IFA