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三种常用非甾体类抗炎滴眼液对人角膜上皮细胞的毒性研究

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中华实验眼科杂志 2015年第7期33卷 627-632页

作者：曲明俐段豪云王瑶王茜周庆军山东省眼科研究所山东省眼科学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地青岛266071

背景双氯芬酸钠滴眼液、普拉洛芬滴眼液和溴芬酸钠滴眼液是眼科临床常用的非甾体类抗炎药（NSAIDs）,长期应用可导致人角膜上皮细胞（HCECs）的损伤,但3种滴眼液导致HCECs的损伤程度及滴眼液中添加物的细胞毒性尚不清楚. 目的评价双... 详细信息

背景双氯芬酸钠滴眼液、普拉洛芬滴眼液和溴芬酸钠滴眼液是眼科临床常用的非甾体类抗炎药（NSAIDs）,长期应用可导致人角膜上皮细胞（HCECs）的损伤,但3种滴眼液导致HCECs的损伤程度及滴眼液中添加物的细胞毒性尚不清楚. 目的评价双氯芬酸钠滴眼液、普拉洛芬滴眼液和溴芬酸钠滴眼液及其相应原料药对HCECs的毒性,明确其细胞毒性的主要来源. 方法常规培养HCECs,分别在培养液中添加1∶1、1∶2、1∶5、1∶10稀释的滴眼液或原料药,使最终质量分数分别为0.10％、0.05％、0.02％和0.01％.采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组药物处理后HCECs的增生率;3种滴眼液均稀释至质量浓度0.002％（1∶50）,以Transwell法检测各组药物处理后HCECs迁移率;采用乳酸脱氢酶（LDH）检测法测定各组药物处理后HCECs损伤程度.结果 3种滴眼液对HCECs的毒性作用具有剂量依赖性,差异均有统计学意义（均P=0.00）,其中双氯芬酸钠滴眼液对HCECs增生、迁移和损伤影响最大,溴芬酸钠滴眼液对HCECs损伤程度最小,差异均有统计学意义（增生：F药物=20.25,P=0.00;迁移：F=103.43,P=0.00;损伤：F药物=164.16,P=0.00）.与滴眼液相比,原料药的细胞毒性作用普遍较小,其中普拉洛芬原料药对HCECs增生、迁移和损伤影响最小,差异均有统计学意义（增生：F药物=332.27,P=0.00;迁移：F=23.02,P=0.00;损伤：F药物=154.83,P=0.00）. 结论双氯芬酸钠滴眼液、普拉洛芬滴眼液和溴芬酸钠滴眼液中以双氯芬酸钠对角膜上皮的毒性作用最大;3种药物的细胞毒性来源是添加物本身或原料药与添加物综合作用的结果.

关键词：非甾体抗炎滴眼液细胞毒性原料药添加物

ROCK抑制剂Y-27632在角膜保存时对角膜缘干细胞活性的促进作用

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中华实验眼科杂志 2015年第9期33卷 787-792页

作者：王瑶段豪云杨玲玲曲明俐周庆军山东省眼科研究所山东省眼科学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地青岛266071

背景角膜缘干细胞（LSCs）对维持角膜上皮的稳定和角膜组织透明性有重要作用.Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶（ROCK）抑制剂Y-27632能够促进人胚胎干细胞、角质上皮细胞等的增生,减少细胞凋亡.目的探讨Y-27632对离体兔角膜保存和体外LSCs扩... 详细信息

背景角膜缘干细胞（LSCs）对维持角膜上皮的稳定和角膜组织透明性有重要作用.Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶（ROCK）抑制剂Y-27632能够促进人胚胎干细胞、角质上皮细胞等的增生,减少细胞凋亡.目的探讨Y-27632对离体兔角膜保存和体外LSCs扩增能力的影响. 方法在细胞培养基MEM中加入质量分数12.5％硫酸软骨素、质量分数10.0％低分子右旋糖酐、20.0 mg/L地塞米松、100 mg/L妥布霉素注射液、9.5 g/L Hepes,使用时添加0.375 mg/L L-谷氨酰胺,制备成角膜活性保存液.将新西兰大白兔的角膜组织片分别置于含或不含Y-27632的角膜活性保存液中保存4、7、14d,采用质量分数0.25％锥虫蓝和质量分数0.2％茜素红染色法观察角膜内皮细胞密度及形态,采用Giemsa染色法并使用Image J图像分析软件计数克隆球数量和LSCs活性,计算LSCs存活率和克隆形成效率. 结果角膜片保存4d时,Y-27632保存液组和单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞形态无明显差别,角膜片保存7d时,Y-27632保存液组角膜内皮细胞形态仍保持规则的六边形,而单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞的细胞膜轻微皱缩,少数细胞体积变大.角膜片保存14 d时单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞可见较多的茜素红斑.单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞计数为（2 262±75）/mm2,Y-27632保存液组角膜内皮细胞计数为（2 425 ±95）/mm2,差异有统计学意义（P＜0.001）.新鲜角膜片和角膜片保存4d时,Y-27632保存液组和单纯角膜中期保存液组LSCs的克隆球均较大,其内细胞数较多,而保存7d和14 d时,与Y-27632保存液组比较,单纯角膜中期保存液组LSCs克隆球直径明显缩小.新鲜分离的角膜片和角膜片保存4d时,Y-27632保存液组与单纯角膜中期保存液组LSCs的克隆形成率和角膜上皮细胞存活率的差异均无统计学意义（均P＞0.05）;角膜片保存7d和14d时,角膜缘上皮细胞的活性率分别为（73.00±2.12）％和（56.00±0.71）％,明显高于单纯角膜中期培养液组的（66.00±4.00）％和（49.00±0.71）％,差异均有统计学意义（t=3.098,P=0.018;t=9.798,P=0.000）;角膜片保存7d和14 d时,Y-27632保存液组与单纯角膜中期保存液组LSCs的克隆形成效率分别为（11.05±0.21）％和（3.10±1.97）％,明显高于单纯角膜中期保存液组中的（2.05±1.20）％和（0.40±0.14）％,差异均有统计学意义（t=18.107,P=0.000;t=3.184,P=0.017）.结论角膜保存液中添加Y-27632可明显提高离体角膜保存的效果,同时可维持LSCs的活性及克隆形成能力.Y-27632可作为角膜保存液的有效添加成分。

关键词： Rho相关激酶/拮抗剂& 抑制剂细胞培养角膜缘/细胞学干细胞角膜上皮细胞生存/药物作用角膜保存兔

角膜基质细胞Nrf2-ARE信号通路活化缺陷在圆锥角膜发病中的作用

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中华实验眼科杂志 2015年第2期33卷 109-114页

作者：边江曲明俐王瑶杨玲玲史伟云周庆军青岛大学医学院 266071 山东省眼科研究所山东省眼科学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地青岛266071

背景氧化应激在圆锥角膜发病过程中具有重要的作用,核因子E2相关因子2-抗氧化反应元件（Nrf2-ARE）信号通路是介导细胞氧化应激反应的关键通路,但其在圆锥角膜发病中的作用及其机制鲜见报道. 目的研究正常角膜与圆锥角膜基质细胞中Nrf... 详细信息

背景氧化应激在圆锥角膜发病过程中具有重要的作用,核因子E2相关因子2-抗氧化反应元件（Nrf2-ARE）信号通路是介导细胞氧化应激反应的关键通路,但其在圆锥角膜发病中的作用及其机制鲜见报道. 目的研究正常角膜与圆锥角膜基质细胞中Nrf2-ARE信号通路活化的区别及Nrf2-ARE通路对角膜基质降解酶表达水平的影响,探讨圆锥角膜发病的具体机制.方法于2012年11月至2013年6月在青岛眼科医院收集圆锥角膜患者术中的角膜组织样本和正常供体角膜样本,采用中性蛋白酶和胶原蛋白酶联合消化法分离角膜基质细胞并用含质量分数10％胎牛血清的DMEM/F12培养基培养细胞,待细胞80％融合后在培养基中加入200 μmol/L H2O2处理1h以模拟氧化应激微环境.采用DCFH-DA荧光底物孵育法检测细胞内活性氧簇（ROS）含量,分别采用Western blot和实时定量PCR法检测细胞核内Nrf2mRNA及其蛋白、Nrf2-ARE信号通路下游抗氧化蛋白、尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）、uPA受体（uPAR） mRNA及其蛋白的相对表达水平,采用明胶酶谱法检测细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）活性.结果正常培养条件下,圆锥角膜基质细胞中ROS荧光强于正常角膜基质细胞,细胞核内Nrf2蛋白表达水平均明显高于正常角膜基质细胞,差异有统计学意义（t=18.155,P＜0.01）,但在H2O2处理条件下,圆锥角膜基质细胞中ROS荧光强度明显强于正常角膜基质细胞,且圆锥角膜基质细胞核内Nrf2表达水平明显低于正常培养条件下的圆锥角膜基质细胞,差异有统计学意义（t=62.123,P＜0.01）.正常培养条件下,圆锥角膜基质细胞间还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化还原酶1（NQO-1）、血红素氧合酶1（HO-1）、超氧化物歧化酶2（SOD2） mRNA及其蛋白的相对表达量明显低于正常角膜基质细胞,差异均有统计学意义（均P＜0.01）;但在H2O2培养条件下2种细胞间未见明显变化（NQO-1：t=2.209,P=0.092;HO-1：t=0.293,P=0.784;SOD2：t=0.749,P=0.495）;圆锥角膜基质细胞uPA、uPAR表达量和MMP-2活性均明显高于正常角膜基质细胞,差异均有统计学意义（t=19.164、15.458、4.818,均P＜0.01）. 结论圆锥角膜基质细胞在Nrf2-ARE信号通路活化方面存在缺陷,且这种缺陷与其表达基质降解酶的水平密切相关,说明该通路异常可能是圆锥角膜发病的机制之一.

关键词：圆锥角膜核因子E2相关因子2-抗氧化反应元件信号通路角膜基质细胞氧化应激

导入野生种染色体片段玉米的获得和细胞学鉴定

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导入野生种染色体片段玉米的获得和细胞学鉴定

谁是下一个西布曲明曲美退市引发的关于药品质量安全评估体系的思考

全国作物生物技术与诱变技术学术研讨会

作者：王灵芝曲明俐张举仁山东大学生命科学学院山东大学生命科学学院山东大学生命科学学院

＜正＞导入野生种的优质抗性基因是拓宽玉米种质资源的重要途径之一,创制含有目的外源基因的渐渗系是选育玉米育种新材料的有效途径。墨西哥类玉米（Zea mesicana）具有高分蘖性和分枝性、籽粒蛋白质含量高、对多种病毒病和真菌类病害...

＜正＞导入野生种的优质抗性基因是拓宽玉米种质资源的重要途径之一,创制含有目的外源基因的渐渗系是选育玉米育种新材料的有效途径。墨西哥类玉米（Zea mesicana）具有高分蘖性和分枝性、籽粒蛋白质含量高、对多种病毒病和真菌类病害免疫或高抗等特点,是玉米育种可利用的优质基因源。本工作以玉米骨干自交系掖515为母本。墨西哥类玉米为父本获得F1植株,再以掖515为轮回亲本,采用不同自交及回交相组合并组织培养促进染色体结构变异等方式获得了一系列杂交后代及其组织培养再生的植株,从中选育出一批具有不同优异性状的玉米自交材料。采用基因组原位杂交的方法,

关键词：

来源： cnki会议评论

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中国质量万里行 2010年第12期 60-61页

作者：安俐

还没等到庆祝被批准上市的第13个生日，一度风靡世界的“减肥圣品”西布曲明就已经离开了。

关键词：西布曲明安全评估体系药品质量引发批准上市

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西布曲明对肥胖的2型糖尿病患者血糖的影响

重庆医学 2005年第8期34卷 1180-1181,1183页

作者：任伟李启富刘凤英龚俐琳吴豪杰李蓉何军粟绍初李萍重庆医科大学附属第一医院内分泌科 400016

目的评价西布曲明对肥胖的2型糖尿病患者血糖的影响及安全性。方法为随机、双盲、安慰剂对照的临床研究。完成观察病例31例,其中西布曲明组15例,安慰剂组16例。结果西布曲明组的A1C用药第6个月末(7.08±1.69)%明显低于试验初期(7.69±1.... 详细信息

目的评价西布曲明对肥胖的2型糖尿病患者血糖的影响及安全性。方法为随机、双盲、安慰剂对照的临床研究。完成观察病例31例,其中西布曲明组15例,安慰剂组16例。结果西布曲明组的A1C用药第6个月末(7.08±1.69)%明显低于试验初期(7.69±1.26)%。在用药第5个月末的空腹血糖水平(7.81±1.55)mmol/L明显低于对照组(9.79±3.55)mmol/L。在用药第2个月末和第4个月末西布曲明组的体重〔分别为(69.04±8.78)?和(68.65±8.44)?〕明显低于对照组〔分别为(74.03±15.34)?和(74.07±15.44)?〕。西布曲明组在用药第3个月末甘油三酯〔(0.43±0.58)mmol/L〕和低密度脂蛋白〔(2.28±0.65)mmol/L〕明显低于安慰剂组〔分别为(0.80±0.72)mmol/L和(2.50±0.35)mmol/L〕。两组不良反应发生率没有显著差异。结论盐酸西布曲明可以进一步改善肥胖的2型糖尿病患者的血糖,糖尿病患者使用盐酸西布曲明安全有效。

关键词：西布曲明肥胖 2型糖尿病血糖