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番木瓜籽提取物对白色念珠菌及菌丝特异性基因表达的研究

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海南医学 2019年第1期30卷 19-21页

作者：易国辉张菁芸姚孟霞陈锦萍何小稳海南医学院科学实验中心海南海口571199

目的研究番木瓜籽提取物对游离态白色念珠菌的抑制效果,并探讨对其相关菌丝特异性基因表达的影响。方法采用微量稀释法测定番木瓜籽提取物对白色念珠菌标准株SC5314的最小抑菌浓度(MIC)与最小杀真菌浓度(MFC);采用荧光定量PCR法检测不... 详细信息

目的研究番木瓜籽提取物对游离态白色念珠菌的抑制效果,并探讨对其相关菌丝特异性基因表达的影响。方法采用微量稀释法测定番木瓜籽提取物对白色念珠菌标准株SC5314的最小抑菌浓度(MIC)与最小杀真菌浓度(MFC);采用荧光定量PCR法检测不同浓度的番木瓜籽提取物对白色念珠菌相关菌丝特异性基因Efg1、Als3与Ece1的表达水平。结果番木瓜籽提取物对白色念珠菌的MIC为8μg/mL,MFC为8μg/mL;不同浓度下的番木瓜籽提取物能抑制白色念珠菌相关菌丝基因Efg1、Als3与Ece1的表达,在1μg/mL时,使其分别下调了1.7倍、2.1倍和0.20倍,2μg/mL时,分别下调了3.4倍、2.8倍和1.35倍。结论番木瓜籽提取物能抑制白色念珠菌的生长,并能下调白色念珠菌相关菌丝特异性基因的表达。

关键词：白色念珠菌番木瓜籽荧光定量PCR 最小抑菌浓度最小杀真菌浓度

HSP40基因在伯氏疟原虫哌喹抗性系中的突变及表达

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HSP40基因在伯氏疟原虫哌喹抗性系中的突变及表达

伯氏疟原虫哌喹抗性系小鼠病理学特征与抗性相关性研究

2013海南省第五届生命科学联合学术会议

作者：易国辉周利民黄宪希闵友萱薛伟玲吴金燕郭虹海南医学院科学实验中心

目的:疟原虫抗性问题是疟疾防治的极大障碍及重要研究课题。本文拟通过分析比较伯氏疟原虫(Plasmodium berghei,P.b.)对抗疟药磷酸哌喹(Pireraquine phospate,PQ)敏感系(PQ Sensitive,PQS)及抗性系(PQ resistance,PQR)中热休克蛋白40(Hotshock protein,HSP40)基因序列及表达水平的差异,探讨HSP40与哌喹抗性的相关性。方法:在已建立的***及***小鼠模型及其基因组差异文库筛选的基础上,收集、分离及纯化PQS和PQR感染小鼠的红内期原虫,分别提取PQS和PQR原虫基冈纽DNA,扩增HSP40基因、序列测定:同时刚TRNzol法提取PQS和IPQR原虫的总RNA,合成cDNA模板,荧光定量PCR比较***和PQR HSP40基因的mRNA在表达水平上的差异。结果:PQS与PQR两组间进行比较,*** HSP40基因序列在所扩增的360bp片段中有3个突变位点,(G/T、C/T和CT)相对应的氨基酸发生有义突变(C半胱氨酸→F苯丙氨酸、S丝氨酸→L亮氨酸及S丝氨酸→F苯丙氨酸):实时荧光定量PCR结果显示:PQS与PQR在mRNA表达水平存在显著差异(P<0.05),PQR相对于PQS该基因表达明显上调;而PQR组接种后3d、6d、9d、15d疟原虫体内的HSP40基因mRNA表达水平在感染时间上无明显差异。结论:P.b.哌喹抗性系的HSP40基冈检测到突变位点,该基因的表达水平明显高于敏感系,提示HSP40基冈可能与哌喹抗性相关,具体功能及调节作用将进一步深入研究。

关键词：伯氏疟原虫磷酸哌喹抗性系热休克蛋白40

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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中国热带医学 2016年第3期16卷 197-202页

作者：黄宪希周利民沈笑易国辉薛伟玲郭虹海南医学院科学实验中心海南海口571199

目的观察伯氏疟原虫(Pb)ANKA株哌喹抗性系(PQR)感染小鼠组织病理学变化特征,比较与哌喹敏感系(PQS)的差异,探讨其抗性机制。方法实验小鼠随机分为A(PQS)、B(PQR)及C(正常对照,NC)三组,取肝、脾、脑及肾组织,10%福尔马林固定后石蜡包埋,4... 详细信息

目的观察伯氏疟原虫(Pb)ANKA株哌喹抗性系(PQR)感染小鼠组织病理学变化特征,比较与哌喹敏感系(PQS)的差异,探讨其抗性机制。方法实验小鼠随机分为A(PQS)、B(PQR)及C(正常对照,NC)三组,取肝、脾、脑及肾组织,10%福尔马林固定后石蜡包埋,4μm切片,苏木精一伊红(Haematoxylin-eosin,HE)及吉姆萨(Giemsa)染色,镜下观察其组织病理学改变。结果与PQS组比较,PQR组疟原虫感染红细胞(p RBC)及疟色素(HZ)在各器官组织中出现晚,增殖缓慢,数量明显偏少,在17d增至峰值时仍明显少于PQS组6d时,22d时开始下降。各组织的炎性病变随感染天数的延长而变化:早期较轻,呈渐进性发展,17d时达到高峰,22d时炎症减轻,组织损伤呈恢复趋势,其两组肝、脾组织中炎性细胞的浸润程度在6d时未见明显不同。脑组织的炎性反应、疟原虫浸润及组织损伤程度均显著轻于PQS组。结论 PQR系的毒力下降、致病力降低表象的组织病理学特征为:肝、脾、脑和肾组织中p RBC及HZ浸润量明显偏低,炎性反应、原虫数量的变化呈逐渐增加、降低、趋向恢复的动态过程,未见明显的脑型疟的组织学变化。

关键词：伯氏疟原虫哌喹抗性疟色素组织病理学苏木精-伊红染色法

疟原虫感染组织切片吉姆萨染色法的建立及优化

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中国热带医学 2015年第1期15卷 91-93页

作者：黄宪希周利民易国辉薛伟玲郭虹海南医学院科学实验中心海南海口571199

目的探讨使用吉姆萨(Giemsa)染色法对伯氏疟原虫(Plasmodium berghei,P.b.)ANKA株感染小鼠肝、脾组织标本进行染色的可行性及效果。方法小鼠肝、脾组织用10%福尔马林固定后石蜡包埋,4μm厚切片,60℃烤箱30min烘烤,二甲苯脱蜡,常规乙醇... 详细信息

目的探讨使用吉姆萨(Giemsa)染色法对伯氏疟原虫(Plasmodium berghei,P.b.)ANKA株感染小鼠肝、脾组织标本进行染色的可行性及效果。方法小鼠肝、脾组织用10%福尔马林固定后石蜡包埋,4μm厚切片,60℃烤箱30min烘烤,二甲苯脱蜡,常规乙醇水化至水,用2、3、4倍稀释的吉姆萨工作液分别染色3min、5min、10min;同时做常规苏木精-伊红(Haematoxylin-eosin,HE)染色。结果 3倍稀释Giemsa工作液染色5min的染色效果最佳。镜下观察,疟原虫染色鲜明、虫体胞浆蓝色,胞核粉红、疟色素染为棕褐色,清晰易辨,明显优于HE染色法。结论使用Giemsa染色法对P.b.感染小鼠肝、脾组织标本的染色简单易行,需时短,效果良好,在临床及科研领域中具有应用价值。

关键词：伯氏疟原虫吉姆萨染色法 HE染色法

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疟原虫纯化新方法的研究

海南医学院学报 2014年第5期20卷 592-595,598页

作者：黄宪希易国辉周利民薛伟玲郭虹海南医学院科学实验中心海南海口571199

目的:拟应用去白细胞输血器,建立一种快速简便纯化疟原虫的新方法,以去除宿主白细胞DNA干扰。方法:建立Pb ANKA株鼠疟模型;39只小鼠分为A组(新鲜虫血组,n=18)、B组(冻存虫血组,-80℃保存,n=16)及C组(正常对照组,n=5);应用去白细胞输血... 详细信息

目的:拟应用去白细胞输血器,建立一种快速简便纯化疟原虫的新方法,以去除宿主白细胞DNA干扰。方法:建立Pb ANKA株鼠疟模型;39只小鼠分为A组(新鲜虫血组,n=18)、B组(冻存虫血组,-80℃保存,n=16)及C组(正常对照组,n=5);应用去白细胞输血器对血样进行过滤纯化,观察比较过滤速度及血样处理(新鲜、冻存)对去除白细胞效果的影响;血细胞计数板和血涂片吉姆萨染色法计数各样本过滤前后白细胞、红细胞、原虫率并观察疟原虫形态和疟原虫密度。滤过后的血液提取DNA,PCR验证白细胞滤过效果。结果:经血细胞计数板计数,3组白细胞平均去除率比较,差异无统计学意义(P>0.05);C组红细胞的回收率高于A组,差异具有统计学意义(P<0.05);B组则仅见原虫。白细胞过滤后疟原虫形态及密度无明显改变。PCR鉴定PbGAPDH结果 A、B组均为阳性,而小鼠GAPDH均为阴性。结论:建立了白细胞输血器一步法纯化疟原虫的新方法。该方法简便、快速、廉价,是进行疟原虫分子生物学、免疫学等方面的研究不可或缺的实用技术。

关键词：去白细胞输血器伯氏疟原虫纯化

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模块化轻钢龙骨罩面板隔墙产品研发

住宅产业 2014年第6期 73-76页

作者：姜中天王鹏起娄霓杨建华易国辉张兰英边健党连军中国建筑设计研究院北新集团建材股份有限公司

目前，轻钢龙骨罩面板隔墙，在各类建筑中的应用实例有很多，其产业化基础良好，且有龙骨类隔墙自然中空的特性使其具有较好的扩展性，与各类建筑结构体系间配合良好，并且可以为管线集成化排布、改造拆除、套内灵活隔断、材料回用等提... 详细信息

目前，轻钢龙骨罩面板隔墙，在各类建筑中的应用实例有很多，其产业化基础良好，且有龙骨类隔墙自然中空的特性使其具有较好的扩展性，与各类建筑结构体系间配合良好，并且可以为管线集成化排布、改造拆除、套内灵活隔断、材料回用等提供良好的平台。

关键词：轻钢龙骨产品研发隔墙面板模块化建筑结构体系产业化扩展性

山地丘陵地区农业机械推广的制约因素及应对措施分析

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南方农机 2018年第6期49卷 30-30页

作者：易国辉萍乡市农业机械管理站江西萍乡337000

文章从山地丘陵地区农业机械推广所存在的地理环境、机械质量和后期维护问题等制约因素出发,对需要采用的完善推广体系、建立示范基地和加大政策扶持等措施做出了研究,并进行了相应的说明和阐释。

关键词：山地丘陵地区农业机械推广示范基地

胎儿生长受限大鼠胎盘sFLT-1、PLGF的表达及川芎嗪的干预作用

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海南医学院学报 2014年第5期20卷 596-598页

作者：凌奕金松林叶飞易国辉黄垂灿李勤获海南医学院附属医院妇产科海南海口570201

目的:观察川芎嗪干预下大鼠胎儿生长受限(FGR)胎盘中可溶性血管内皮生长因子受体-1(SFLT-1)、胎盘生长因子(PLGF)的表达及其意义。方法:15只SD大鼠分为川芎嗪(TMP)组(FGR治疗组)、FGR非治疗组、正常对照组,FGR治疗组给予高粱酒灌胃,烟熏... 详细信息

目的:观察川芎嗪干预下大鼠胎儿生长受限(FGR)胎盘中可溶性血管内皮生长因子受体-1(SFLT-1)、胎盘生长因子(PLGF)的表达及其意义。方法:15只SD大鼠分为川芎嗪(TMP)组(FGR治疗组)、FGR非治疗组、正常对照组,FGR治疗组给予高粱酒灌胃,烟熏3次,每次15min,第13天起每天清晨烟熏灌胃后给予TMP 8mg/kg腹腔注射;FGR非治疗组从妊娠第7天起,每日给予高粱酒灌胃,烟熏3次,每次15min;正常对照组从妊娠第7天起,每天9点9mL/kg生理盐水灌胃,每天3次烟熏箱关15min但不烟熏。3组大鼠均于妊娠第20天解剖,比较各组大鼠胎盘PLGF、sFLt-1的表达。结果:FGR治疗组与FGR非治疗组、正常对照组SFLT-1差异无统计学意义(P>0.05);FGR治疗组与FGR非治疗组、正常对照组PLGF差异有统计学意义(P<0.01)。结论:FGR大鼠胎盘SFLT-1升高、PLGF下降,SFLT-1、PLGF可考虑作为胎儿生长受限的筛查指标;经川芎嗪处理后的大鼠胎盘SFLT-1无显著差异,PLGF升高,川芎嗪可考虑作为胎儿生长受限的治疗药物。

关键词：川芎嗪胎儿生长受限(FGR) 可溶性血管内皮生长因子受体-1(SFLT-1) 胎盘生长因子(PLGF) 大鼠

食品级乳酸乳球菌pNZ8149-luc质粒的构建及表达

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现代生物医学进展 2019年第9期19卷 1649-1652,1623页

作者：易国辉姚孟霞张菁芸陈锦萍何小稳彭江龙海南医学院科学实验中心

目的:构建能够稳定表达萤火虫荧光素酶报告基因(luc)的乳酸乳球菌(Lactococcus lactis, ***)食品级表达系统,以便后续研究对目的基因进行示踪。方法:从pGL4.10质粒中PCR扩增萤火虫荧光素酶报告基因,测序,克隆至载体pNZ8149,构建pNZ8149-... 详细信息

目的:构建能够稳定表达萤火虫荧光素酶报告基因(luc)的乳酸乳球菌(Lactococcus lactis, ***)食品级表达系统,以便后续研究对目的基因进行示踪。方法:从pGL4.10质粒中PCR扩增萤火虫荧光素酶报告基因,测序,克隆至载体pNZ8149,构建pNZ8149-luc表达质粒;电击转化宿主乳酸乳球菌NZ3900,采用乳糖筛选法获得重组的乳酸乳球菌,Nisin诱导,采用微孔板发光检测仪检测荧光素酶的存在,Western Blot检测目标蛋白luc的表达。结果:PCR扩增的荧光素酶报告基因成功克隆至pNZ8149质粒,并电击转化宿主乳酸乳球菌NZ3900,得到乳酸乳球菌表达系统NZ3900/pNZ8149-luc。Nisin诱导后,检测到荧光素酶随诱导时间的延长活性逐渐增强,时间超过24 h之后荧光素酶活性逐渐下降。Western Blot检测到目标蛋白luc在胞内表达。结论:成功构建了p NZ8149-luc表达载体,并能够在乳酸乳球菌体内稳定表达。

关键词：乳酸乳球菌食品级荧光素酶基因表达