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结晶诱导不对称转化在拆分手性化合物中的研究进展

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有机化学 2010年第7期30卷 951-957页

作者：熊文说王鸿易喻梅建凤应国清浙江工业大学药学院杭州310014

结晶诱导动态拆分(CIDR)是对映异构体(或非对映异构体)的原位外消旋作用和选择性结晶过程的耦合.结晶诱导不对称转化(CIAT)包括了CIDR过程,也包括了结晶诱导分离具有单个或多个非对映异构体中心的异构体、顺反式烯烃的过程.概述了CIAT和... 详细信息

结晶诱导动态拆分(CIDR)是对映异构体(或非对映异构体)的原位外消旋作用和选择性结晶过程的耦合.结晶诱导不对称转化(CIAT)包括了CIDR过程,也包括了结晶诱导分离具有单个或多个非对映异构体中心的异构体、顺反式烯烃的过程.概述了CIAT和CIDR在拆分手性化合物中的研究进展.

关键词：结晶诱导动态拆分结晶诱导不对称转化手性化合物拆分

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壳聚糖吸附剂的制备及性能

化工进展 2007年第2期26卷 230-233页

作者：应国清卢霞易喻浙江工业大学药学院浙江杭州310032

通过以壳聚糖为原料,经交联、羟丙基氯化及胺基化,制备了壳聚糖胺基吸附剂。经红外光谱和扫描电镜测定其结构,研究了不同的胺化试剂及其用量对壳聚糖吸附剂胺基含量的影响及对中药液中黄酮化合物的吸附性能。结果表明,改性壳聚糖微球胺... 详细信息

通过以壳聚糖为原料,经交联、羟丙基氯化及胺基化,制备了壳聚糖胺基吸附剂。经红外光谱和扫描电镜测定其结构,研究了不同的胺化试剂及其用量对壳聚糖吸附剂胺基含量的影响及对中药液中黄酮化合物的吸附性能。结果表明,改性壳聚糖微球胺基含量比壳聚糖高,对游离黄酮的吸附量随着胺基含量增加而增加。

关键词：壳聚糖吸附剂胺化

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聚乙二醇修饰鼠抗人CD3单克隆抗体

细胞与分子免疫学杂志 2008年第11期24卷 1096-1098,1101页

作者：马杭圣王鸿孙汉栋易喻应国清浙江工业大学药学院浙江杭州310032 杭州九源基因工程有限公司浙江杭州310018

目的:确定一条聚乙二醇化鼠抗人CD3单克隆抗体(mAb)和抗体片段的制备工艺路线。方法:以胃蛋白酶酶解并通过凝胶柱分离和纯化得到抗体Fab′,利用PEG-SPA修饰抗体和抗体片段Fab′上的氨基,通过体内和体外T细胞增殖实验,考查修饰后的抗体... 详细信息

目的:确定一条聚乙二醇化鼠抗人CD3单克隆抗体(mAb)和抗体片段的制备工艺路线。方法:以胃蛋白酶酶解并通过凝胶柱分离和纯化得到抗体Fab′,利用PEG-SPA修饰抗体和抗体片段Fab′上的氨基,通过体内和体外T细胞增殖实验,考查修饰后的抗体和抗体片段的免疫活性。结果:较佳的修饰工艺条件为:在pH9.0硼酸缓冲液,反应温度25℃,抗体浓度0.2g/L,抗体和聚乙二醇摩尔比为1∶20,反应3h。修饰后抗CD3mAb全抗,对T淋巴细胞增殖抑制活性下降了32.3%,抗体Fab′下降了8.0%,PEG化Fab′下降了19.9%。利用ELISA检测血液中修饰后的抗体和抗体片段的半衰期。结果显示mPEG修饰后抗体和抗体片段血药浓度降低明显减缓,修饰后抗CD3抗体半衰期从2.66h延长到8.72h,延长了3.28倍。而修饰后抗体Fab′片段半衰期从2.21h延长到4.17h,延长了1.90倍。结论:利用聚乙二醇修饰抗体和抗体片段,提高了抗体半衰期,且无细胞毒性,活性损失较小,该技术具有较高的可行性,可极大地提高mAb尤其是非人源性抗体在临床上的应用。

关键词：单克隆抗体 CD3 聚乙二醇化学修饰免疫活性

疏水作用层析法纯化抗乙肝病毒核心抗原单克隆抗体

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第6期26卷 560-562页

作者：吴银飞祝骥李敏易喻应国清艾博生物医药有限公司浙江杭州310018 浙江工业大学药学院浙江杭州310014

目的:采用疏水作用层析法纯化小鼠腹水来源的抗乙肝核心抗原(HBcAg)单克隆抗体(mAb),并对分离条件进行优化。方法:采用不同疏水层析介质、溶液pH和NaCl浓度,研究其对抗体吸附的影响,以及分析不同的洗脱方式和洗脱体积对抗体洗脱的影响,... 详细信息

目的:采用疏水作用层析法纯化小鼠腹水来源的抗乙肝核心抗原(HBcAg)单克隆抗体(mAb),并对分离条件进行优化。方法:采用不同疏水层析介质、溶液pH和NaCl浓度,研究其对抗体吸附的影响,以及分析不同的洗脱方式和洗脱体积对抗体洗脱的影响,并用ELISA法检测纯化后抗体的活性。结果:疏水作用层析法纯化小鼠腹水来源的抗HB-cAgmAb(IgG1)的最适条件是以pH7.0、20mmol/LPB+1.2mol/L(NH4)2SO4为上样缓冲液,采用1.2～0mol/L(NH4)2SO4,12CV梯度进行洗脱,获得的mAb纯度大于75%,回收率达80%,纯化后mAb的活性保持良好。结论:采用疏水作用层析对mAb进行纯化,并优化了各步实验条件,为建立具有抗体纯度高、生物学活性好、易于放大的抗HBcAg的mAb的纯化方法提供了必要的实验基础。

关键词：层析疏水作用单克隆抗体乙肝核心抗原

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一种新型壳聚糖分离介质的制备

化工进展 2011年第9期30卷 2049-2054页

作者：易喻崔国艳王鸿李敏朱克寅应国清浙江工业大学药学院浙江杭州310032 杭州博林生物技术有限公司浙江杭州310018

以壳聚糖为载体、液体石蜡为分散介质、戊二醛为交联剂、Span80为乳化剂,采用反相悬浮法制备壳聚糖微球,以环氧氯丙烷为活化剂、亚氨基二乙酸为螯合配基制备新型壳聚糖分离介质,并研究分离介质制备过程中各参数对壳聚糖分离介质性能的... 详细信息

以壳聚糖为载体、液体石蜡为分散介质、戊二醛为交联剂、Span80为乳化剂,采用反相悬浮法制备壳聚糖微球,以环氧氯丙烷为活化剂、亚氨基二乙酸为螯合配基制备新型壳聚糖分离介质,并研究分离介质制备过程中各参数对壳聚糖分离介质性能的影响。确定最佳活化工艺为:40%DMSO/NaOH(0.6 mol/L)、ECH体积分数10%、反应温度40℃、反应时间4 h,测得环氧基修饰密度可达到0.15 mmol/g(gel);最佳螯合工艺:IDA(0.6 mol/L)/NaOH(2.0 mol/L)混合液,反应时间为6 h,制备的新型壳聚糖分离介质对Cu2+吸附量达到172.787 g/g gel,壳聚糖分离介质含水率为45.60%,孔隙率为69.45%,得到一种新型金属螯合层析填料。

关键词：壳聚糖金属螯合层析填料环氧氯丙烷

马克斯克鲁维酵母羰基还原酶基因的克隆与表达

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微生物学通报 2013年第8期40卷 1393-1402页

作者：应国清杨岳微梅建凤易喻金志华浙江工业大学药学院浙江杭州310014 浙江大学宁波理工学院生物与化学工程学院浙江宁波315100

【目的】研究羰基还原酶基因的克隆、表达及其在不对称生物催化中的应用。【方法】对羰基还原酶氨基酸序列进行BLAST推导出核苷酸序列,设计引物,以马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyce marxianus)CGMCC 2.1977全基因组为模板,通过PCR扩增目... 详细信息

【目的】研究羰基还原酶基因的克隆、表达及其在不对称生物催化中的应用。【方法】对羰基还原酶氨基酸序列进行BLAST推导出核苷酸序列,设计引物,以马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyce marxianus)CGMCC 2.1977全基因组为模板,通过PCR扩增目的片段,与载体pET-28a连接,转化大肠杆菌获得重组菌BL21(DE3)-(pET28a-cMCR)和Rosetta(DE3)-(pET28a-cMCR)。【结果】扩增的序列与已报道的mer序列有100%同源性,全长1 038 bp,共编码345个氨基酸。目的蛋白在Rosetta(DE3)-(pET28a-cMCR)得到了高效表达,大小为42 kD。该酶最适反应温度为40°C,最适反应pH是8,热稳定性与pH稳定性较差。Ca2+对酶活具有明显的激活作用,且浓度为0.5 mmol/L时效果最好。重组菌可还原4-氯乙酰乙酸乙酯(COBE)为(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯[(S)-CHBE],光学纯度为100%,转化率为81.0%。重组菌在制备度洛西汀关键中间体(S)-氮,氮-二甲基-3-羟基-(2-噻吩)-l-丙胺[(S)-DHTP]中也得到初步应用。【结论】从菌株马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyce marxianus)CGMCC 2.1977中克隆获得了羰基还原酶基因,在大肠杆菌中成功表达,并可应用于不对称还原。

关键词：羰基还原酶马克斯克鲁维酵母不对称还原

单甲氧基聚乙二醇修饰蚓激酶的制备及性质研究

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高校化学工程学报 2005年第4期19卷 527-531页

作者：应国清易喻石陆娥王普胡妙申浙江工业大学药学院浙江杭州310032 杭州杭康生物制药有限公司浙江杭州310016

采用以三聚氯氰活化的单甲氧基聚乙二醇(mPEG-5000),对从赤子爱胜蚓体内提取的抗血栓酶——蚓激酶进行了化学修饰,以期降低其抗原性及增加它的稳定性。实验表明,在37℃下,15.0mL,pH9.2,0.1mol?L?1的硼酸缓冲液中,按每1.0mg的蚓激酶加入2... 详细信息

采用以三聚氯氰活化的单甲氧基聚乙二醇(mPEG-5000),对从赤子爱胜蚓体内提取的抗血栓酶——蚓激酶进行了化学修饰,以期降低其抗原性及增加它的稳定性。实验表明,在37℃下,15.0mL,pH9.2,0.1mol?L?1的硼酸缓冲液中,按每1.0mg的蚓激酶加入25.5mg活化的mPEG,水浴保温1h,经透析、超滤浓缩、冻干得mPEG修饰酶,测得蚓激酶的修饰率为63.2%,酶活回收率为56.6%。在此基础上,对修饰蚓激酶的性质进行了研究。结果显示,修饰后的蚓激酶对底物的亲和力有所增加(天然酶表观米氏常数Km值为***?1,修饰酶Km'值为***?1);修饰蚓激酶的抗胰蛋白酶水解能力、热稳定性均优于天然酶;同时修饰酶的抗原性有了较大程度的降低,与抗血清的结合能力大约是天然酶的25.0%左右。

关键词：蚓激酶化学修饰单甲氧基聚乙二醇抗原性

不同培养时间海洋来源真菌Penicillium spp.701挥发性成分分析

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中国药学杂志 2010年第1期45卷 11-13页

作者：王鸿沈丽丽梅建凤易喻陈建澍应国清浙江工业大学药学院杭州310014

目的对海洋来源真菌Penicilliumspp.701在不同培养时间下产生的挥发性成分进行对比研究。方法用人工海水GYT培养基分别发酵6,10,14,18,22,26,30 d,抽滤后得到的培养液经乙酸乙酯萃取制备萃取物浸膏,用GC-MS对其挥发性成分进行检测,结合... 详细信息

目的对海洋来源真菌Penicilliumspp.701在不同培养时间下产生的挥发性成分进行对比研究。方法用人工海水GYT培养基分别发酵6,10,14,18,22,26,30 d,抽滤后得到的培养液经乙酸乙酯萃取制备萃取物浸膏,用GC-MS对其挥发性成分进行检测,结合计算机检索技术对分离化合物进行结构鉴定,应用色谱峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量。结果萃取物中挥发性成分较复杂,主要有芳香族、长链烷烃、生物碱类、香豆素和酯类等化合物。培养不同的时间,其产生的挥发性成分各异。结论海洋真菌在不同的培养时间下挥发性成分组成和含量不尽相同,为其综合利用和特定化合物的分离提供参考数据。

关键词：海洋真菌挥发性成分气相色谱-质谱

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8株海洋真菌的抗氧化和抗肿瘤活性筛选

中国海洋药物 2012年第2期31卷 1-6页

作者：陈霞易喻赵美蓉应国清芦斌王鸿浙江工业大学药学院浙江杭州310014 浙江工业大学生物与环境工程学院浙江杭州310014

目的通过抗氧化和抗肿瘤活性双生物活性筛选模型评估来源于东海海洋的8株海洋真菌提取物的生物活性。方法对8株海洋真菌菌体甲醇提取物和发酵液乙酸乙酯提取物进行体外抗氧化活性(DPPH法)和抗肿瘤(MTT法)双生物活性模型筛选研究。结果菌... 详细信息

目的通过抗氧化和抗肿瘤活性双生物活性筛选模型评估来源于东海海洋的8株海洋真菌提取物的生物活性。方法对8株海洋真菌菌体甲醇提取物和发酵液乙酸乙酯提取物进行体外抗氧化活性(DPPH法)和抗肿瘤(MTT法)双生物活性模型筛选研究。结果菌株251#,28#,111#的发酵液提取物在剂量为***-1时,对DPPH的清除率大于90%;当剂量为50μ***-1时,菌株28#,111#,21#发酵液提取物对HeLa和H460肿瘤细胞的抑制率均大于50%。结论菌株28#,111#发酵液提取物在体外具有较强的清除自由基的能力,对HeLa和H460肿瘤细胞具有较高的细胞毒性。提示菌株28#,111#的活性代谢产物可能来源于菌株生长过程中产生的胞外物。同时,表明海洋真菌是潜在的活性代谢产物的重要来源。

关键词：海洋真菌抗氧化活性抗肿瘤活性