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4种笛鲷属鱼类随机扩增多态性DNA及遗传多样性研究

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水产科学 2005年第1期24卷 9-12页

作者：易乐飞刘楚吾淮海工学院海洋学院江苏连云港222042 湛江海洋大学水产学院广东湛江524025

使用RAPD技术分析了红鳍笛鲷、紫红笛鲷、勒氏笛鲷和约氏笛鲷的种内遗传多样性、种间遗传多样性和种间亲缘关系。在120个随机引物中筛选出扩增效果好的引物36个,平均每个引物在每个个体上产生7 7个条带。种内遗传多样性研究结果显示:遗... 详细信息

使用RAPD技术分析了红鳍笛鲷、紫红笛鲷、勒氏笛鲷和约氏笛鲷的种内遗传多样性、种间遗传多样性和种间亲缘关系。在120个随机引物中筛选出扩增效果好的引物36个,平均每个引物在每个个体上产生7 7个条带。种内遗传多样性研究结果显示:遗传距离(D)分别为0 2257,0 2228,0 2679和0 2247;遗传多样性指数(H)分别为0 1854,0 1904,0 2015和0 1865。说明目前湛江近海这4种笛鲷的遗传多样性比较丰富,它们的种质资源仍处于一个良好的水平。种间遗传多样性结果显示:勒氏笛鲷与约氏笛鲷遗传距离(Dpq)最小,亲缘关系最密切,勒氏笛鲷与红鳍笛鲷种间Dpq最大,亲缘关系最远。

关键词：遗传多样性亲缘关系 RAPD 红鳍笛鲷紫红笛鲷勒氏笛鲷约氏笛鲷

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海水鱼苗种二次培育技术

中国水产 2005年第10期 48-49页

作者：周向红易乐飞淮海工学院海洋学院 222005

苗种二次培育的概念最早在1985年的文献中提出,是室内外结合培育苗种的方式.单纯的室内水泥池育苗方式不受天气影响,可进行高密度育苗,前期仔鱼存活率较高单纯的室外海水池塘育苗方式能提供仔稚鱼各发育阶段的适口饵料生物,鱼苗活动的... 详细信息

苗种二次培育的概念最早在1985年的文献中提出,是室内外结合培育苗种的方式.单纯的室内水泥池育苗方式不受天气影响,可进行高密度育苗,前期仔鱼存活率较高单纯的室外海水池塘育苗方式能提供仔稚鱼各发育阶段的适口饵料生物,鱼苗活动的空间大,生长快,体质健壮,育苗成本低.

关键词：培育技术海水池塘鱼苗种育苗方式室内水泥池天气影响饵料生物发育阶段室内外

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向日葵BADH基因部分序列的克隆与分析

安徽农业科学 2008年第32期36卷 14003-14004页

作者：易乐飞王萍周向红淮海工学院海洋学院江苏连云港222005

[目的]为进一步利用向日葵BADH基因提供理论和实践依据。[方法]以电子克隆技术为基础,通过RT-PCR获取向日葵BADH基因的部分序列,并进行测序。[结果]通过RT-PCR获得了一段基因序列。该PCR产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳呈现出一条长为1584bp... 详细信息

[目的]为进一步利用向日葵BADH基因提供理论和实践依据。[方法]以电子克隆技术为基础,通过RT-PCR获取向日葵BADH基因的部分序列,并进行测序。[结果]通过RT-PCR获得了一段基因序列。该PCR产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳呈现出一条长为1584bp左右的特异性条带,与预期设计的1581 bp的扩增片段相符;与电子克隆得到的相应序列比对结果表明,两者一致性高达99.22%。其编码蛋白含有与酶功能密切相关的保守氨基酸序列,与其他物种的BADH具有较高的一致性。[结论]成功克隆了向日葵BADH基因的部分序列。

关键词：向日葵甜菜碱醛脱氢酶 BADH基因基因克隆

向日葵BADH基因表达的定量PCR检测方法建立与初步应用

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作物杂志 2013年第5期 70-74页

作者：易乐飞周科峰王萍淮海工学院海洋学院江苏连云港222005

向日葵不是盐生作物,但具有较强的耐盐和耐旱能力。甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)是植物重要的抗逆基因之一。检测BADH基因表达有助于研究向日葵对逆境胁迫的响应机制。因此本文以真核延伸因子1A(eEF1A)为内参,采用SYBR Green I荧光染料法,... 详细信息

向日葵不是盐生作物,但具有较强的耐盐和耐旱能力。甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)是植物重要的抗逆基因之一。检测BADH基因表达有助于研究向日葵对逆境胁迫的响应机制。因此本文以真核延伸因子1A(eEF1A)为内参,采用SYBR Green I荧光染料法,建立向日葵BADH基因表达的定量PCR检测方法。BADH和eEF1A的扩增曲线基线平整、指数区明显,熔解曲线上仅显示单一特异峰,扩增效率分别为1.90和1.96,Cq值平均变异系数分别为0.51%和0.65%。这些数据表明检测方法特异性强、重复性好、结果可靠。应用建立的检测方法初步检测了盐和干旱胁迫对向日葵BADH基因表达的影响,结果显示BADH受盐和干旱胁迫的诱导表达。

关键词：向日葵甜菜碱醛脱氢酶 BADH基因定量PCR 盐胁迫干旱胁迫

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向日葵保守性microRNA的预测与分析

作物杂志 2012年第6期 38-41页

作者：周向红易乐飞王萍淮海工学院海洋学院江苏连云港222005

microRNA是一类非编码的小分子RNA,通过与靶mRNA的互补来抑制靶mRNA的翻译或者降解靶mRNA,从而在转录后水平对基因表达发挥调控作用。为了快速挖掘向日葵microRNA及其靶基因的相关信息,根据microRNA序列及其前体结构的保守性,在向日葵... 详细信息

microRNA是一类非编码的小分子RNA,通过与靶mRNA的互补来抑制靶mRNA的翻译或者降解靶mRNA,从而在转录后水平对基因表达发挥调控作用。为了快速挖掘向日葵microRNA及其靶基因的相关信息,根据microRNA序列及其前体结构的保守性,在向日葵核酸数据库中预测并分析了向日葵microRNA及其靶基因。经过筛选最终获得了7个向日葵microRNA,其成熟microRNA的长度为18～21nt,前体长度为72～148nt,最小折叠自由能系数为0.90～1.19。获得了向日葵mi-croRNA的靶基因16条,这些靶基因参与了转录调控、营养阶段转换调控、种子萌发调控、花发育调控、信号传递以及环境刺激的响应等过程。

关键词：向日葵 microRNA 生物信息学

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向日葵甜菜碱醛脱氢酶的电子克隆与分析

作物杂志 2007年第6期 45-47页

作者：易乐飞王萍孟鹏淮海工学院海洋生物技术重点建设实验室

采用电子克隆技术获得了向日葵甜菜碱醛脱氢酶基因的cDNA序列(HaBADH)。该序列长1901bp,编码一个由503个氨基酸残基组成的蛋白质。HaBADH与其他物种的BADHs在蛋白质水平上表现较高的相似性,在进化上与同科的甘菊BADH蛋白距离较近。HaBAD... 详细信息

采用电子克隆技术获得了向日葵甜菜碱醛脱氢酶基因的cDNA序列(HaBADH)。该序列长1901bp,编码一个由503个氨基酸残基组成的蛋白质。HaBADH与其他物种的BADHs在蛋白质水平上表现较高的相似性,在进化上与同科的甘菊BADH蛋白距离较近。HaBADH蛋白具有醛脱氢酶家族高度保守的十肽和与酶功能有关的氨基酸残基Cys。

关键词：向日葵甜菜碱醛脱氢酶 BADH 电子克隆

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凡纳滨对虾总RNA完整性的正确评估

浙江农业学报 2016年第12期28卷 2007-2013页

作者：易乐飞穆亮亮仲改淮海工学院海洋生命与水产学院江苏连云港222005

凝胶电泳技术通常被用于总RNA完整性检测,一般认为28S和18S rRNA条带亮度的比值大于等于2表示总RNA完整性良好,该比值越小表明总RNA降解越严重。为了检测这一标准在水产虾蟹类中是否继续适用,分别对凡纳滨对虾rRNA和mRNA的完整性进行了... 详细信息

凝胶电泳技术通常被用于总RNA完整性检测,一般认为28S和18S rRNA条带亮度的比值大于等于2表示总RNA完整性良好,该比值越小表明总RNA降解越严重。为了检测这一标准在水产虾蟹类中是否继续适用,分别对凡纳滨对虾rRNA和mRNA的完整性进行了分析。用TRIzol分离纯化的凡纳滨对虾总RNA经凝胶电泳检测,发现其28S∶18S rRNA的比值远小于2;但是以同样的总RNA为模板进行RT-PCR,能顺利扩增出长约1 100 bp的ACT和e EF1A基因序列。进一步的3'∶5'分析显示这2个内参基因mRNA的3'∶5'ratio分别为2.79和1.53,直接表明被测mRNA完整性良好。因此,凝胶电泳低估了水产虾蟹类总RNA的完整性,建议采用3'∶5'分析技术对水产虾蟹类总RNA完整性进行检测。

关键词：凡纳滨对虾总RNA完整性定量PCR 3'∶5'分析隐裂

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基于转录组西施舌微卫星标记开发及隐种鉴定

水产科学 2022年第2期41卷 289-295页

作者：王雨吉孟学平易乐飞江苏海洋大学海洋科学与水产学院江苏连云港222005

近10年的遗传研究表明,我国沿海西施舌可分为2个隐种,即北方西施舌和南方西施舌。为辅助鉴别这2种西施舌以及准确评估其种质资源,以转录组数据为基础,分别挖掘并分析这2种西施舌转录组上的微卫星序列以及直系同源基因上的微卫星序列,并... 详细信息

近10年的遗传研究表明,我国沿海西施舌可分为2个隐种,即北方西施舌和南方西施舌。为辅助鉴别这2种西施舌以及准确评估其种质资源,以转录组数据为基础,分别挖掘并分析这2种西施舌转录组上的微卫星序列以及直系同源基因上的微卫星序列,并随机选取4组直系同源基因上的微卫星进行试验验证。结果表明,北方西施舌每16.6个unigene含有1个微卫星,出现频率为6.0%,含63种重复基元。南方西施舌每10.5个unigene含有1个微卫星,出现频率为8.2%,含89种重复基元。在2个隐种的转录组中,除单碱基重复外,优势重复类型均为三碱基重复。在北方西施舌和南方西施舌的转录组中,三碱基重复的优势基元分别为AAC/GTT和ATC/ATG,最常见的微卫星长度均为15 bp。在2个隐种的转录组中,微卫星的重复次数主要为5~10次。有409组直系同源基因在2个隐种中所含微卫星序列长度不同,可以作为潜在的物种特异性分子标记。验证结果表明,4对荧光标记微卫星引物的PCR扩增产物清晰、明确,无杂峰,组合使用2对引物可以初步区分北方西施舌和南方西施舌。

关键词：西施舌微卫星标记转录组直系同源基因物种鉴定

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桑椹总RNA抽提方法的比较

食品科学 2011年第12期32卷 209-212页

作者：周向红易乐飞王萍淮海工学院海洋学院江苏连云港222005

为对比CTAB改良法、***总RNA抽提试剂盒Ⅱ、EZ-10柱式总RNA抽提试剂盒和异硫氰酸胍法4种方法抽提桑椹总RNA的效果,对该4种方法抽提后的总RNA进行纯度、得率和完整性检测以及进一步的RT-PCR检测。结果显示:CTAB改良法和***总RNA抽提试剂... 详细信息

为对比CTAB改良法、***总RNA抽提试剂盒Ⅱ、EZ-10柱式总RNA抽提试剂盒和异硫氰酸胍法4种方法抽提桑椹总RNA的效果,对该4种方法抽提后的总RNA进行纯度、得率和完整性检测以及进一步的RT-PCR检测。结果显示:CTAB改良法和***总RNA抽提试剂盒Ⅱ均适用于桑椹总RNA抽提,获得的总RNA纯度高、得率高、完整性好,完全可用于后续的分子生物学实验;但两者相比,CTAB改良法成本更低,操作更简单。

关键词：桑椹总RNA 抽提方法比较多酚多糖