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幽门螺杆菌内毒素的化学组成和结构的初步分析

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中国人兽共患病杂志 1995年第1期11卷 2-4页

作者：方平楚严杰浙江医科大学微生物学教研室

幽门螺杆菌内毒素的主要化学成份为糖类和脂类,其戊糖、己糖、庚糖和氨基糖的含量分别为13.2％、25.6％、9.3％和5.2％(w/w)。幽门螺杆菌内毒素中所含的2—酮—3—脱氧—D—甘露糖—辛酮糖酸(KDO)含量高达7.2％(W/W)。该内毒素的红外光... 详细信息

幽门螺杆菌内毒素的主要化学成份为糖类和脂类,其戊糖、己糖、庚糖和氨基糖的含量分别为13.2％、25.6％、9.3％和5.2％(w/w)。幽门螺杆菌内毒素中所含的2—酮—3—脱氧—D—甘露糖—辛酮糖酸(KDO)含量高达7.2％(W/W)。该内毒素的红外光谱和超微结构与大肠杆菌内毒素十分相似。电镜下,幽门螺杆菌内毒素呈细长的条索状结构。实验结果表明,幽门螺杆菌内毒素的化学组成和超微结构与大肠杆菌内毒素基本相同。

关键词：幽门螺杆菌内毒素化学组成超微结构

Biological activity of the virulence factor cagA of Helicobacter pylori

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Chinese Medical Journal 2004年第9期117卷 1330-1333页

作者：朱永良郑树钱可大方平楚 Gastroenterological Department Second Affiliated Hospital of Zhejiang University College of MedicineHangzhou 310009China Cancer Institute of Zhejiang University Hangzhou 310009 China Microbiological Department Zhejiang University College of Medicine Hangzhou 310003 China

Background China is one of the countries with the highest incidence of H. pylori and more than 9090 isolates possessed the cagA gene. This study was to evaluate the biological activity of the *** virulence factor cagA isolated from Chinese patients. Methods cagA DNA fragments were amplified from the genomic DNA and subsequently cloned into the mammalian expression vector for cell transfection and DNA sequencing. cagA protein, phosphorylated-tyrosine cagA and the complex of cagA precipitated with SHP-2 were identified respectively by western blot in the crude cell lysate from conditionally immortalized gastric epithelial cells at 48 hours after transfection with cagA DNA. In addition, the ability of induction of scattering phenotype was examined after transient expression of cagA in AGS cells. Results The C-terminal half of cagA contained only one repeated sequence and three tandem five-amino-acid motifs glutamic acid-proline-isoleucine-tyrosine-alanine (EPIYA). Moreover, the amino acid sequence of D2 region in repeated sequence was aspartic acid-phenylanaline-aspartic acid (D-F-D) which was significantly distinguished from the three repeated sequences and aspartic acid-aspartic adid-leucine (D-D-L) in the western standard strain NCTC11637. Western blot revealed that cagA became phosphorylated in tyrosine site and bound with SHP-2 after transient expression of cagA DNA in gastric epithelial cells. Transient expression of cagA in AGS cells showed that cagA was able to induce the elongation phenotype although to a lesser extent than western *** cagA perturbs cell signaling pathways by binding with SHP-2. However, significant difference exists in amino acid sequence and biological function of cagA in Chinese compared with those of western countries.

关键词： Helicobacter pylori cagA tyrosine phosphorylation tyrosine phosphatase 2 containing src homology 2 pathogenesis

SLISA幽门螺旋菌抗体定量检测及其临床应用价值

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中华消化杂志 1993年第6期13卷 366-367页

作者：吴佩娟方平楚

幽门螺杆菌全长cagA基因和霍乱毒素B亚单位基因的克隆与表达

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中华微生物学和免疫学杂志 2002年第2期22卷 211-214页

作者：方平楚周林福陈智叶少菁浙江大学医学院杭州310006

目的　构建表达幽门螺杆菌 (Hp)细胞毒素相关蛋白 (CagA)及粘膜免疫佐剂霍乱毒素B亚单位 (CTB)的重组质粒 ,并在大肠杆菌中表达获得基因重组蛋白。方法　用PCR方法从幽门螺杆菌扩增CagA基因片段 ,从霍乱弧菌扩增CTB基因片段 ,将它们转... 详细信息

目的　构建表达幽门螺杆菌 (Hp)细胞毒素相关蛋白 (CagA)及粘膜免疫佐剂霍乱毒素B亚单位 (CTB)的重组质粒 ,并在大肠杆菌中表达获得基因重组蛋白。方法　用PCR方法从幽门螺杆菌扩增CagA基因片段 ,从霍乱弧菌扩增CTB基因片段 ,将它们转入原核载体质粒pGEMEX 1,在大肠杆菌DH5α中克隆 ,并在JM10 9DE3中表达。结果　重组质粒pGEMEX CTB的全长序列经分析与Gen Bank公布的序列相符 ;各表达蛋白经SDS PAGE分析 ,相对分子量与文献相符 ;重组蛋白经Westernblot检测有较强的抗原性。

关键词：幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白霍乱毒素B亚单位基因表达克隆胃炎胃癌防治

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幽门螺杆菌脂多糖生物学活性的研究

中华微生物学和免疫学杂志 1994年第3期14卷 196-198页

作者：严杰方平楚浙江医科大学微生物学教研室

应用酚水法提取了幽门螺杆菌９０２９０５株的脂多糖（ＬＰＳ）。该ＬＰＳ在０．５ｎｇ／ｍｌ浓度时即能凝固鲎血液变形细胞溶解物，注入家兔后可使动物出现Ｓｈｗａｒｔｚｍａｎ现象和发热反应，其热曲线呈双峰型。该ＬＰＳ注入家兔后... 详细信息

应用酚水法提取了幽门螺杆菌９０２９０５株的脂多糖（ＬＰＳ）。该ＬＰＳ在０．５ｎｇ／ｍｌ浓度时即能凝固鲎血液变形细胞溶解物，注入家兔后可使动物出现Ｓｈｗａｒｔｚｍａｎ现象和发热反应，其热曲线呈双峰型。该ＬＰＳ注入家兔后０．５小时动物血压明显下降，至注后１小时血压降为零，外周血中白细胞数则先升后降。小鼠体内注入该ＬＰＳ后，可导致动物死亡，其内脏出现严重的毛细血管扩张并伴有少量出血。与Ｅ．ｃｏｌｉＬＰＳ对比实验结果证实幽门螺杆菌ＬＰＳ具有典型的内毒素活性。

关键词：幽门螺杆菌脂多糖内毒素

ELISA双抗体夹心一步法快速检测粪样中的轮状病毒

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中国人兽共患病杂志 1990年第6期6卷 25-27页

作者：邵传森楼跃飞方平楚浙江医科大学微生物学教研室

同时将酶标记 McAb与粪样加于抗体包被孔内孵育作 ELISA双抗体夹心一步法,以检测粪样中轮状病毒(RV),发现包被抗体采用兔抗 RV IgG 较抗 RV McAb更为敏感,粪样与酶标记 McAb混合物最适孵育时间为90分钟。经实际粪样测定显示,一步法测得A... 详细信息

同时将酶标记 McAb与粪样加于抗体包被孔内孵育作 ELISA双抗体夹心一步法,以检测粪样中轮状病毒(RV),发现包被抗体采用兔抗 RV IgG 较抗 RV McAb更为敏感,粪样与酶标记 McAb混合物最适孵育时间为90分钟。经实际粪样测定显示,一步法测得A_(492)值与常规法(二步法)呈直线正相关,两法阳性检出率无显著差异,说明一步法完全可以取代二步法而应用于临床。

关键词：轮状病毒 ELISA 抗原检测