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登革病毒对人血管内皮细胞分泌ET-1及PGI_2的影响

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中华实验和临床病毒学杂志 1999年第3期13卷 239-242页

作者：江丽芳郭辉玉方丹云中山医科大学微生物学教研室广州510089

目的　研究登革病毒感染对人血管内皮细胞分泌重要的血管活性物质ＥＴ１及ＰＧＩ２的影响，以了解登革出血热及登革休克综合征（ＤＨＦＤＳＳ）的发病机制。方法　用登革病毒Ⅱ型，感染人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ），于感染后... 详细信息

目的　研究登革病毒感染对人血管内皮细胞分泌重要的血管活性物质ＥＴ１及ＰＧＩ２的影响，以了解登革出血热及登革休克综合征（ＤＨＦＤＳＳ）的发病机制。方法　用登革病毒Ⅱ型，感染人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ），于感染后４、２４、４８、７２及９６小时，分别收集病毒感染上清液，用放射免疫检测法测定ＥＴ１及ＰＧＩ２的含量。结果　登革病毒感染可使ＨＵＶＥＣ分泌ＥＴ１及ＰＧＩ２的能力受到明显抑制。在病毒感染早期（４小时），ＨＵＶＥＣ分泌ＥＴ１及ＰＧＩ２的能力即受到明显抑制。登革病毒对ＨＵＶＥＣ分泌ＥＴ１抑制作用强烈而持久，至感染后９６小时，ＨＵＶＥＣ分泌ＥＴ１的能力与未受感染的阴性对照组比较，差异仍有显著性。然而，登革病毒对ＨＵＶＥＣ分泌ＰＧＩ２的抑制作用，可随时间的推移而减弱，至感染后９６小时，ＨＵＶＥＣ分泌ＰＧＩ２的能力已达正常水平。结论　登革病毒感染可影响血管内皮细胞分泌血管活性物质ＥＴ１及ＰＧＩ２的功能，导致血管通透性增加和凝血、止血功能障碍。因此，登革病毒所致的血管内皮细胞功能障碍。

关键词：登革病毒血管内皮细胞内皮素前列环素

登革2型病毒海南分离株全长E基因的测定与分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2003年第4期23卷 304-306页

作者：周俊梅江丽芳高阳薛耀华方丹云中山大学中山医学院微生物学教研室广州510089

目的　测定我国登革 2型病毒海南分离株E基因的全序列 ,并分析其病毒学特性和分子进化特征。方法　运用RT PCR法扩增我国登革 2型病毒海南分离株 (D2V HN89)E基因 ,测序并用计算机分析序列 ,作毒株感染细胞及乳小白鼠试验。结果　D2V H... 详细信息

目的　测定我国登革 2型病毒海南分离株E基因的全序列 ,并分析其病毒学特性和分子进化特征。方法　运用RT PCR法扩增我国登革 2型病毒海南分离株 (D2V HN89)E基因 ,测序并用计算机分析序列 ,作毒株感染细胞及乳小白鼠试验。结果　D2V HN89株E基因核苷酸全长 146 4bp ,核苷酸和氨基酸序列与D2V NGC株的同源性分别为 95 %和 98%,系统树分析显示其与登革 2型牙买加株及登革 2型巴西 90株的亲缘关系最近。D2V HN89株的细胞病变效应与D2V NGC株相同 ,但对乳小白鼠神经毒力较弱。结论　D2V HN89株的E基因区有缺失 ,该流行毒株可能来源于牙买加或巴西登革热流行区。

关键词：登革2型病毒海南分离株全长E基因测定分析

Epstein Barr病毒LMP1 DNA免疫小鼠免疫效果的测定

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中山医科大学学报 2001年第6期22卷 427-430页

作者：陈元晏辉钧郭辉玉方丹云中山医科大学微生物学教研室广东广州510080

【目的】探讨EBV LMP1重组体DNA免疫小鼠后的免疫效果。【方法】将已构建的EBVLMP1基因 (EBVLMP1)重组质粒 pcDNA3 BLMP1肌肉注射免疫Balb/c小鼠 ,在免疫后的不同时间分别用ELISA、流式细胞仪及LDH法检测免疫小鼠体内特异性EBVLMP1抗体... 详细信息

【目的】探讨EBV LMP1重组体DNA免疫小鼠后的免疫效果。【方法】将已构建的EBVLMP1基因 (EBVLMP1)重组质粒 pcDNA3 BLMP1肌肉注射免疫Balb/c小鼠 ,在免疫后的不同时间分别用ELISA、流式细胞仪及LDH法检测免疫小鼠体内特异性EBVLMP1抗体滴度、CD4+ /CD8+ T淋巴细胞亚群的数量变化以及EBVLMP1特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)的活性。用 pcDNA3质粒及PBS作为阴性对照及空白对照。【结果】重组质粒免疫Balb/c小鼠后 ,可在外周血液血清中检测到特异性的EBVLMP1抗体 ;其脾细胞中CD4+ /CD8+ T淋巴细胞亚群数量明显高于阴性对照及空白对照 ,且可检测到EBVLMP1特异性的CTL存在。以上结果在免疫 16周之内无明显改变。【结论】EBV LMP1质粒重组体可刺激小鼠产生特异性的体液和细胞免疫 ,并且可维持一定的时间 ,具有较好的免疫原性 ,是一种有效、制备方便的EBV候选疫苗。

关键词：疱疹病毒疫苗 DNA T淋巴细胞细胞毒性 T淋巴细胞亚群小鼠动物实验免疫效果测定

23S rRNA基因序列分析及其在细菌鉴别诊断中的应用

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第3期24卷 241-244页

作者：洪帮兴江丽芳胡玉山方丹云郭辉玉中山大学中山医学院微生物学教研室

目的　研究细菌 2 3SrRNA基因序列的差异 ,为细菌鉴别诊断和相关研究提供科学依据。方法　设计合适的通用引物、寻找恰当的扩增条件扩增常见细菌的 2 3SrRNA基因片段。通过序列测定和运用生物信息学分析不同种属细菌 2 3SrRNA基因的保... 详细信息

目的　研究细菌 2 3SrRNA基因序列的差异 ,为细菌鉴别诊断和相关研究提供科学依据。方法　设计合适的通用引物、寻找恰当的扩增条件扩增常见细菌的 2 3SrRNA基因片段。通过序列测定和运用生物信息学分析不同种属细菌 2 3SrRNA基因的保守序列、变异规律及菌株间种系进化关系。结果　扩增出常见引起食源性感染的 16属 (种 )细菌 2 3SrRNA基因片段。部分扩增产物进行了限制性酶切鉴定和序列测定。序列比较研究获得 2 1个 2 3SrRNA的通用保守序列 ,2 3SrRNA基因保守序列与变异区在种系间呈间隔分布 ,大量变异区呈“马赛克”式分布。种系间进化关系与 16SrRNA分析结果一致。结论　 2

关键词： 23S rRNA 基因序列分析细菌感染鉴别诊断生物信息学基因芯片

SARS-CoV基因组及其产物的生物学功能(I)

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第四军医大学学报 2004年第17期25卷 1628-1630页

作者：唐小龙江振友江丽芳蔡淑玉方丹云暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室广东广州510632 中山大学医学院微生物学教研室广东广州510080 安徽理工大学医学院安徽淮南232001

严重急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyn drome,SARS)在 2 0 0 3年我国南方爆发流行 ,波及众多国家和地区 ,引起了全球关注 .在确证SARS病原体为继Group1 ,2 ,3后的一类新冠状病毒SARSCoronavirus(SARS CoV)之后 ,全球对SARS相... 详细信息

严重急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyn drome,SARS)在 2 0 0 3年我国南方爆发流行 ,波及众多国家和地区 ,引起了全球关注 .在确证SARS病原体为继Group1 ,2 ,3后的一类新冠状病毒SARSCoronavirus(SARS CoV)之后 ,全球对SARS相关冠状病毒进行了广泛的研究 .至目前为止 ,SARS CoV的基因组已在多个实验室中测定 ,并通过多种途径分析了其基因结构特征 .本文综述了SARS CoV的基因组成与结构、病毒的复制。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒复制酶复合蛋白

SARS-CoV基因组及其产物的生物学功能(Ⅱ)

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第四军医大学学报 2004年第20期25卷 1913-1917页

SARS CoV具有多种蛋白酶 ,其中有 3种蛋白酶 (解旋酶和另外两种半胱氨酸蛋白酶 )在病毒的复制、转录、翻译和 /或翻译后加工等过程中发挥重要的生理和病理作用 ;而其结构蛋白则在形成病毒粒子、参与病毒的致病机制中发挥重要作用 .本文... 详细信息

SARS CoV具有多种蛋白酶 ,其中有 3种蛋白酶 (解旋酶和另外两种半胱氨酸蛋白酶 )在病毒的复制、转录、翻译和 /或翻译后加工等过程中发挥重要的生理和病理作用 ;而其结构蛋白则在形成病毒粒子、参与病毒的致病机制中发挥重要作用 .本文综述了SARS CoV的主要产物酶及结构蛋白的结构及其功能等方面研究进展 .

关键词：严重急性呼吸综合症冠状病毒开放读码框

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Ⅱ型登革病毒E基因的克隆及其酵母表达

中国人兽共患病杂志 2003年第4期19卷 31-33页

作者：薛耀华江丽芳魏惠永方丹云郭辉玉中山大学中山医学院微生物学教研室广州510089 广东省人民医院

目的　克隆 2型登革病毒E基因并用酵母真核表达 ,获得全长的重组E蛋白 ,为其结构与功能的研究提供条件。方法　从感染DEN2 (NGC株 )后病变的C6 /36细胞上清中提取RNA ,通过RT -PCR扩增E基因片段 ,与载体pPICZαB连接筛选得到重组质粒 ,... 详细信息

目的　克隆 2型登革病毒E基因并用酵母真核表达 ,获得全长的重组E蛋白 ,为其结构与功能的研究提供条件。方法　从感染DEN2 (NGC株 )后病变的C6 /36细胞上清中提取RNA ,通过RT -PCR扩增E基因片段 ,与载体pPICZαB连接筛选得到重组质粒 ,电穿孔法将重组体整合入酵母菌P pastoris,经抗生素Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定 ,取Mut+菌诱导表达 ,SDS -PAGE、免疫印迹检测表达产物。结果　RT -PCR得到 1 5kb的E基因片段 ,酶切鉴定与测序显示重组质粒含DEN2全长E基因 ;Mut+ 酵母转化菌可分泌表达约 6 9kDa的蛋白 ,与DEN2E单抗的免疫印迹证实它为型特异的重组E蛋白。结论　成功将克隆的全长DEN2E基因在酵母菌中表达 ,获得的重组E蛋白具有免疫反应性。

关键词：登革病毒 E基因克隆酵母表达

10种中草药对空肠弯曲菌粘附抑制作用的观察

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中国人兽共患病杂志 1993年第4期9卷 32-33,35页

作者：邝耀陶廖筑华邓志爱方丹云王霓广东医药学院微生物学教研室

空肠弯曲菌是引起人类急性腹泻的病原菌之一,其致病作用与其粘附作用、侵袭力及毒素有关。目前,临床治疗空肠弯曲菌引起的腹泻多采用抗生素药物,但由于耐药株的不断产生,效果常不理想,因此,有必要开辟新的药物治疗途径,故我们采用十种... 详细信息

空肠弯曲菌是引起人类急性腹泻的病原菌之一,其致病作用与其粘附作用、侵袭力及毒素有关。目前,临床治疗空肠弯曲菌引起的腹泻多采用抗生素药物,但由于耐药株的不断产生,效果常不理想,因此,有必要开辟新的药物治疗途径,故我们采用十种中草药对空肠弯曲菌的粘附抑制作用进行了初步研究,并用D^+……甘露糖、抗弯曲菌抗血清进行对照研究,现将结果报道如下。

关键词：中草药弯曲杆菌空肠药理

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登革2型病毒重组E蛋白的生物学特性分析

中山大学学报（医学科学版） 2003年第3期24卷 214-216,220页

作者：魏惠永江丽芳曾祥凤方丹云郭辉玉中山大学中山医学院微生物学教研室

[目的]检测重组 D2V全长 E蛋白纯化后的免疫反应性与抗原性,为其亚单位疫苗研制奠定基础.[方法]酵母表达上清超滤浓缩后用金属螯合亲和层析(MCAC)法过柱,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术观察蛋白条带.将纯化蛋白与... 详细信息

[目的]检测重组 D2V全长 E蛋白纯化后的免疫反应性与抗原性,为其亚单位疫苗研制奠定基础.[方法]酵母表达上清超滤浓缩后用金属螯合亲和层析(MCAC)法过柱,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术观察蛋白条带.将纯化蛋白与组氨酸抗体、 D2V E单抗进行斑点印迹和蛋白印迹,以确定纯化物是否为含组氨酸尾的 D2V E融合蛋白,并用 ELISA检测纯化 E蛋白与不同 DV抗体的结合反应.用纯化的重组 D2V E蛋白免疫小鼠后测定其产生的抗体类型与滴度,以分析其抗原性.[结果]表达产物经 MCAC柱纯化获得单一的相对分子质量为 69× 103的蛋白,组氨酸抗体与 D2V E单抗的印迹试验证实该条带就是含多聚组氨酸尾型特异的重组 E蛋白(rEgp) , ELISA显示纯化的 rEgp保留有免疫反应性及型特异性,内糖苷酶 H消化证实其含有 N联高甘露糖残基.接种 rEgp可诱生针对 D2V抗原与重组 E蛋白的高效抗体.[结论]纯化的 D2V全长 E蛋白保留其免疫原性和免疫反应性,并具有型特异性.

关键词：登革热病毒膜糖蛋白类重组蛋白质分离纯化抗体层析法