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CRISPR-Cas技术在病毒性传染病诊断中的应用

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动物医学进展 2022年第7期43卷 107-112页

作者：战佳兴文雪霞张莹沈阳农业大学动物科学与医学学院/东北畜禽疫病研究教育部重点实验室辽宁沈阳110161

病毒性传染病尤其是新发和再发病毒性传染病一直是人类和动物健康的重大威胁,而开发准确、快速、便捷的诊断方法有利于病毒性传染病的有效防控。CRISPR-Cas系统是当前应用广泛的基因编辑技术。近年来,有些类型CRISPR-Cas系统已在传染性... 详细信息

病毒性传染病尤其是新发和再发病毒性传染病一直是人类和动物健康的重大威胁,而开发准确、快速、便捷的诊断方法有利于病毒性传染病的有效防控。CRISPR-Cas系统是当前应用广泛的基因编辑技术。近年来,有些类型CRISPR-Cas系统已在传染性病原微生物的分子诊断方面展现出巨大潜力,其与核酸扩增、荧光标记等技术结合建立的检测方法准确、灵敏度高、操作简便,不需要很复杂的设备,适宜用于疫病的现场快速诊断。论文综述了CRISPR-Cas系统Ⅱ型CRISPR-Cas9、Ⅴ型CRISPR-Cas12和Ⅵ型CRISPR-Cas13技术的作用机制及其在病毒性传染病诊断中的应用,以期为病毒性传染病的诊断和防控提供参考。

关键词： CRISPR-Cas技术病毒性传染病分子诊断

cGAS-STING信号通路在先天性免疫中的作用研究进展

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动物医学进展 2022年第4期43卷 87-92页

作者：于思慧单朝萌文雪霞张莹沈阳农业大学动物科学与医学学院/东北畜禽疫病研究教育部重点实验室辽宁沈阳110161

先天性免疫是动物抵抗外界病原微生物入侵的第一道防线。当病原微生物入侵时,机体可通过模式识别受体识别病原体相关分子模式,启动抵抗外源微生物感染的免疫反应。环磷酸鸟苷-腺苷合成酶(cGAS)是一种DNA感受器,可感知外源DNA并激活cGAS-... 详细信息

先天性免疫是动物抵抗外界病原微生物入侵的第一道防线。当病原微生物入侵时,机体可通过模式识别受体识别病原体相关分子模式,启动抵抗外源微生物感染的免疫反应。环磷酸鸟苷-腺苷合成酶(cGAS)是一种DNA感受器,可感知外源DNA并激活cGAS-STING信号通路。而cGAS-STING信号通路的激活可诱导产生干扰素,这是先天性免疫反应至关重要的组成部分。论文综述了cGAS-STING信号通路介导先天性免疫的分子机制及病毒通过该信号通路调控机体先天性免疫的策略,以期为研究cGAS-STING信号通路及其与病毒间的相互作用提供参考。

关键词： cGAS-STING信号通路先天性免疫病毒感染

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土拉弗朗西斯菌致病机制研究进展

动物医学进展 2023年第12期44卷 108-112页

作者：董译滟王聪任晨洋文雪霞张莹沈阳农业大学动物科学与医学学院/东北畜禽疫病研究教育部重点实验室辽宁沈阳110866 中牧实业股份有限公司北京100070

土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis,Ft)是一种可引起人畜共患的胞内病原菌,属于革兰氏阴性菌,具有多形性,无芽孢,无鞭毛,可感染多种类型的细胞。在体内,Ft主要感染巨噬细胞并在其中复制。为了在宿主体内建立有效感染,Ft已进化出多... 详细信息

土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis,Ft)是一种可引起人畜共患的胞内病原菌,属于革兰氏阴性菌,具有多形性,无芽孢,无鞭毛,可感染多种类型的细胞。在体内,Ft主要感染巨噬细胞并在其中复制。为了在宿主体内建立有效感染,Ft已进化出多种策略以拮抗宿主的免疫机制,适应宿主巨噬细胞质的环境并延缓细胞凋亡。这些策略主要包括增强机体对菌体的摄取、菌体从吞噬小体中逃逸、拮抗宿主的氧化防御、抑制宿主的炎症反应和维持菌体自身的稳定等。论文主要从这些方面对Ft的致病机制研究进展进行综述,以期为该病原的研究提供参考。

关键词：土拉弗朗西斯菌病原特征致病机制

H5N1亚型禽流感病毒非结构蛋白单克隆抗体的制备及其表位研究

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H5N1亚型禽流感病毒非结构蛋白单克隆抗体的制备及其表位研究

作者：文雪霞中国农业科学院

学位级别：硕士

禽流感(Avian influenza, AI)是由正粘病毒科流感病毒属A型AI病毒(Avian influenza virus,AIV)所引起的一种禽类传染病。近年来，以H5N1亚型为代表的AI的流行使得养禽业遭受严重损失，同时对人类健康和世界公共卫生安全构成重大威胁。... 详细信息

禽流感(Avian influenza, AI)是由正粘病毒科流感病毒属A型AI病毒(Avian influenza virus,AIV)所引起的一种禽类传染病。近年来，以H5N1亚型为代表的AI的流行使得养禽业遭受严重损失，同时对人类健康和世界公共卫生安全构成重大威胁。疫苗免疫接种是预防AI有效措施。然而疫苗的大范围使用，免疫鸡群血清学阳性率极高，与病毒感染途径引起的血清学阳性相混淆。这两种途径发生的血清学改变，通过现有的血清学检测技术均不能鉴别，给AI的监控工作带来一定困扰，因此，很多研究开始关注AI感染和免疫的鉴别(Differentiation of infected and vaccinatedanimals, DIVA)方法研究。目前对流感病毒感染和免疫的鉴别研究主要集中在非结构蛋白(NS1)上，其中针对NS1的单克隆抗体(MAb)是必不可少的重要基础，因此，开展了本项研究工作。本研究通过原核表达获得了NS1蛋白，浓缩纯化后，免疫BALB/c小鼠，利用常规的MAb制备技术，将免疫小鼠脾细胞和SP2/0融合，经3次克隆后，共制备2株能稳定分泌抗NS1特异性抗体的杂交瘤细胞株D9和D7。Western blot鉴定表明，这2株MAbs均能够识别NS1重组蛋白。另外，还构建了pCAGGs-NS1重组质粒转染SF9细胞后，以间接免疫荧光(IFA)的方法鉴定了2株MAbs能与瞬时表达的NS1蛋白特异性结合，从两方面验证了MAb的特异性。利用噬菌体7肽库对纯化后腹水D9进行表位筛选，经过三轮淘选，获得24个阳性克隆，测序后得到15个多肽序列，其共有序列为WNLNT--VS，与本研究所用毒株的NS1蛋白编码的氨基酸(amino acid,AA)序列比对发现其与AA182A190基本匹配，提示182WNDNTVRVS190为NS1蛋白的一个线性表位。合成多肽WNDNTVRVS，利用ELISA验证了该段多肽与D9有特异性结合。同样，利用噬菌体展示肽库筛选纯化后腹水D7，测序后得到19个多肽序列，其共有序列为NFFTQAL，但在本研究所用毒株的NS1蛋白编码的AA序列上未发现其同源序列。进一步利用多肽芯片技术对D7进行抗原表位的鉴定，发现29DAPF32为D7针对的抗原表位。利用点印记验证了DAPF与D7的特异性结合，并将NS1蛋白上多肽DAPF缺失，IFA鉴定D7与表达NS1(-DAPF)蛋白的细胞结合明显减弱，进一步验证了D7与NS1蛋白上多肽DAPF的结合。本研究制备了2株MAbs D9和D7，分别鉴定了其针对的抗原表位182WNDNTVRVS190和29DAPF32。该结果为进一步研究NS1蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础。

关键词：禽流感非结构蛋白单克隆抗体噬菌体展示多肽芯片

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p21蛋白的功能及在病毒感染中的作用

沈阳农业大学学报 2020年第3期51卷 377-383页

作者：文雪霞文润张莹沈阳农业大学畜牧兽医学院/东北畜禽疫病研究教育部重点实验室沈阳110161

p21蛋白是一种细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白(CDKI),具有多种生物学功能。首先,p21蛋白可降解细胞周期蛋白(cyclin)、抑制细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin dependent kinase,CDK)活性、与cyclin/CDK复合物或增殖细胞核抗原(PCNA)结合,... 详细信息

p21蛋白是一种细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白(CDKI),具有多种生物学功能。首先,p21蛋白可降解细胞周期蛋白(cyclin)、抑制细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin dependent kinase,CDK)活性、与cyclin/CDK复合物或增殖细胞核抗原(PCNA)结合,阻滞细胞周期进程。其次,p21蛋白可通过巨噬细胞的活化和极化及中性粒细胞的凋亡参与调控机体炎症反应。再次,p21蛋白调控细胞的凋亡过程。它既可与细胞凋亡信号调节激酶1(ASK1)和促凋亡因子相互作用抑制细胞凋亡,又可上调促凋亡蛋白Bax或激活TNF家族死亡受体(TRAIL)促进细胞凋亡。最后,p21蛋白可上调微管相关蛋白1A/1B轻链3B(LC3)和Unc-51样自噬激活激酶1(ULK1)蛋白促进细胞自噬。此外,p21蛋白在多种病毒感染过程中也发挥重要作用。在人免疫缺陷病病毒(HIV)感染的细胞中,p21蛋白可抑制HIV逆转录酶的活性、dNTP的生物合成及宿主细胞抗病毒蛋白SAMHD1失活抑制HIV复制。p21蛋白可与人乳头瘤病毒(HPV)编码的E7蛋白相互作用,诱导细胞进入S期。Epstein-Barr病毒(EBV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、鼠肝炎病毒(MHV)和A型流感病毒(IAV)感染引起p21蛋白水平变化,进而调控细胞周期。本文综述了p21蛋白的功能及在病毒感染中的作用,以期为研究病毒感染和p21蛋白之间的相互作用提供参考。

关键词： p21蛋白细胞周期炎症反应细胞凋亡细胞自噬病毒感染

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不同亚型犬、猫流感病毒的研究进展

黑龙江畜牧兽医 2021年第13期 35-40页

作者：文润张翔文雪霞张莹沈阳农业大学沈阳110161

随着时代的发展,伴侣动物越来越被人类接受和钟爱,其中与人类接触最密切的非犬、猫莫属。然而随着犬、猫感染流感病毒事件增多,人类更加重视监测犬、猫流感病毒。犬、猫能感染H1N1、H3N2、H3N8、H5N1、H5N6、H7N2等亚型流感病毒,可作为... 详细信息

随着时代的发展,伴侣动物越来越被人类接受和钟爱,其中与人类接触最密切的非犬、猫莫属。然而随着犬、猫感染流感病毒事件增多,人类更加重视监测犬、猫流感病毒。犬、猫能感染H1N1、H3N2、H3N8、H5N1、H5N6、H7N2等亚型流感病毒,可作为A型流感病毒(又称甲型流感病毒)的中间宿主。流感病毒可在犬、猫体内发生突变、重组,新型病毒对人类健康具有潜在威胁。加强对犬、猫流感病毒的研究,了解其流行趋势,有利于减少传染源、阻断传播途径,而且有重大的公共卫生意义。文章介绍了全球范围内不同亚型犬、猫流感流行情况及流感病毒的相关特性,以期为犬、猫流感防控提供参考。

关键词：犬猫流感病毒流行现状病毒特性公共卫生

急性一氧化碳中毒患者急救护理流程优化对其并发症发生率及痊愈率的影响

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实用临床护理学电子杂志 2018年第19期3卷 51-52页

作者：文雪霞广西桂林市人民医院急诊科

目的探究急性一氧化碳中毒患者急救护理流程优化对其并发症发生率及痊愈率的影响。方法选取2014年11月;017年11月人民医院急性一氧化碳中毒患者120例作为研究对象,2014年11月;015年12月收治的实施常规急诊抢救护理流程的患者40例作为对... 详细信息

目的探究急性一氧化碳中毒患者急救护理流程优化对其并发症发生率及痊愈率的影响。方法选取2014年11月;017年11月人民医院急性一氧化碳中毒患者120例作为研究对象,2014年11月;015年12月收治的实施常规急诊抢救护理流程的患者40例作为对照组,2016年1月;017年11月收治的实施实施优化急诊抢救护理流程的患者80例作为观察组,对比观察两组患者并发症发生情况和患者的痊愈情况。结果观察组并发症发生率明显低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;观察组抢救痊愈率明显高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论急性一氧化碳中毒患者优化急救护理流程,可以有效提高患者的痊愈率,减少并发症,提高抢救质量。

关键词：急性一氧化碳中毒急救护理流程优化效果