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生防链霉菌17-7生理生化功能研究

江苏农业科学 2024年

作者：李岚岚戴利铭施玉萍蔡志英熊延林李云刘一贤云南省热带作物科学研究所/云南省天然橡胶可持续利用研究重点实验室(筹)/天然橡胶良种选育与栽培技术国家地方联合工程研究中心勐腊田野橡胶销售有限责任公司

为了更好地开发利用生防链霉菌17-7,为开发新型生物农药储备生防菌资源,研究了生防链霉菌17-7的生理生化功能。通过Ashby无氮培养基选择培养法、溶磷圈法、Nessler's试剂显色法、CAS平板检测法、Salkowski比色法定性检测该菌株的固氮能... 详细信息

为了更好地开发利用生防链霉菌17-7,为开发新型生物农药储备生防菌资源,研究了生防链霉菌17-7的生理生化功能。通过Ashby无氮培养基选择培养法、溶磷圈法、Nessler's试剂显色法、CAS平板检测法、Salkowski比色法定性检测该菌株的固氮能力、溶磷能力、产氨能力、产铁载体能力和产吲哚乙酸能力;在CAS平板检测法定性检测基础上,使用标准品绘制标准曲线,通过CAS检测液显色反应测定D630nm,得到D630nm值,代入标准曲线,计算发酵液中铁载体含量;在Salkowski比色法定性检测基础上,基于LC-MS/MS激素分析方法定量检测链霉菌17-7菌株发酵液中9大类激素含量。研究发现,生防链霉菌17-7具有固氮能力、产氨能力、产铁载体能力和产吲哚乙酸能力;定量检测出该菌株发酵液中铁载体浓度为（33.146±0.005）μg/mL,检测出该菌株发酵液中含有36种激素,包括1种脱落酸、17种生长素、11种细胞分裂素、1种乙烯类、1种赤霉素、3种茉莉酸、1种褪黑素、1种水杨酸,发酵液中检测到的生长素类激素种类最多,含量最高的五种激素也是属于生长素类,分别是L-色氨酸、氧化吲哚乙酸、吲哚-3-乳酸、吲哚乙酸、吲哚,含量分别为852.449、750.033、268.721、188.3586、180.467 ng/mL。综上所述结果表明,生防链霉菌17-7对植物具有促生和抗逆作用,具有潜在开发利用价值。

关键词：生防菌链霉菌促生作用抗逆激素

生防链霉菌17-7菌株发酵配方优化及发酵滤液稳定性研究

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热带作物学报 2024年

作者：刘一贤施玉萍李岚岚戴利铭蔡志英云南省天然橡胶可持续利用研究重点实验室云南省热带作物科学研究所

为了提升链霉菌17-7菌株的抑菌活性，合理利用菌株的代谢产物。本研究以橡胶树褐根病菌为靶标菌，采用正交实验和单因子实验相结合，在原培养基的基础上对链霉菌17-7菌株的发酵培养基配方进一步优化。获得了该菌株最适宜产活性物质的配... 详细信息

为了提升链霉菌17-7菌株的抑菌活性，合理利用菌株的代谢产物。本研究以橡胶树褐根病菌为靶标菌，采用正交实验和单因子实验相结合，在原培养基的基础上对链霉菌17-7菌株的发酵培养基配方进一步优化。获得了该菌株最适宜产活性物质的配方为：大豆粉25 g/L、玉米粉10 g/L、葡萄糖10 g/L、酵母粉2 g/L、KH2PO41 g/L、NaCl 0.5 g/L、CaCO30.5 g/L，发酵滤液稀释500倍后对橡胶树根病菌的相对抑菌活性为51.37%，较之前提高了17.66%，并且具有广谱的抑菌活性。在此基础上测定了温度、紫外线辐射、蛋白酶、酸碱度和贮存条件对17-7菌株发酵滤液抗真菌物质稳定性的影响。结果表明，17-7菌株发酵滤液对高温不敏感，紫外线照射1 h后发酵滤液的抑菌活性开始显著下降，长时间紫外照射并不会丧失抑菌活性。17-7菌株发酵滤液还具有较好的酸碱耐受性，在pH=3～10条件下发酵滤液都能发挥较好的抑菌活性，并且对胰蛋白酶和胃蛋白酶不敏感。菌株发酵滤液在低温（4 ℃）和室温（25 ℃）条件下贮存120 d仍能保持较强生物活性。对17-7菌株无菌发酵滤液稳定性和贮存条件的研究可为后续开发利用该菌株提供理论依据和数据支持。

关键词：链霉菌17-7 发酵配方优化稳定性抑菌活性

红根病感染对橡胶树根际土壤微生物群落和代谢物的影响

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热带农业科技 2024年第1期47卷 56-62页

作者：戴利铭李岚岚刘一贤施玉萍蔡志英云南省热带作物科学研究所/云南省天然橡胶可持续利用研究重点实验室(筹)/天然橡胶良种选育与栽培技术国家地方联合工程研究中心云南景洪666100

以景洪小勐养植胶区的健康和发病橡胶树根际土壤为研究对象,通过高通量测序和代谢组技术对土壤进行研究,以期揭示感染红根病后橡胶树根际土壤中微生物和代谢物的变化情况。结果发现健康和发病橡胶树根际土壤微生物群落结构及其土壤代谢... 详细信息

以景洪小勐养植胶区的健康和发病橡胶树根际土壤为研究对象,通过高通量测序和代谢组技术对土壤进行研究,以期揭示感染红根病后橡胶树根际土壤中微生物和代谢物的变化情况。结果发现健康和发病橡胶树根际土壤微生物群落结构及其土壤代谢物成分有很大差异。在发病土壤中酸杆菌门的相对丰度最高,比健康土壤高5.11%,放线菌门和变形菌门相对丰度小于健康土壤;在属分类水平,健康土壤中根瘤菌属相对丰度最高,其次为链霉菌属,而发病土壤中链霉菌属相对丰度最高;KEGG功能注释发现发病土壤和健康土壤在碳水化合物代谢、氨基酸代谢方面无明显差异,NOG数据库注释发现发病土壤中ABC转运蛋白和丝氨酸、苏氨酸蛋白激酶均高于正常土壤;利用GC-MS非靶向代谢组学技术测定发现,与健康土壤相比,发病土壤中的蜡酸、甘油磷酸酯、胆固醇、胆甾烷-3,5,6-三醇、富马酸、豆甾醇、N-环己基甲酰氨等7个物质含量显著增加,而花生四烯酸和N-乙酰基-5-羟色胺含量显著降低。

关键词：橡胶树红根病土壤微生物代谢物

橡胶狗尾草平脐蠕孢叶斑病病原菌鉴定及生物学特性研究

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植物保护 2023年第2期49卷 227-234,242页

作者：刘一贤施玉萍戴利铭李岚岚蔡志英云南省热带作物科学研究所景洪666100

为明确采自西双版纳景洪地区疑似橡胶麻点病的病原菌,采用组织分离法进行病原菌分离,活体接种法进行致病性测定,通过形态学观察结合rDNA-ITS和GAPDH两个核苷酸片段序列分析,将病原菌确定为狗尾草平脐蠕孢Bipolaris setariae。通过单因... 详细信息

为明确采自西双版纳景洪地区疑似橡胶麻点病的病原菌,采用组织分离法进行病原菌分离,活体接种法进行致病性测定,通过形态学观察结合rDNA-ITS和GAPDH两个核苷酸片段序列分析,将病原菌确定为狗尾草平脐蠕孢Bipolaris setariae。通过单因子变量试验,对病原菌进行生物学特性研究,结果表明:菌丝生长最适温度为30℃,最适pH为7~8,最适培养基为PDA,菌丝致死温度为53℃,10 min。该病原菌能有效利用多种碳源和氮源,碳源以可溶性淀粉利用率最高,最适氮源为蛋白胨。24 h黑暗条件下培养更有利于菌丝生长。分生孢子萌发的最适温度为28~35℃,最适pH为7~8,28℃黑暗培养2 h后萌发率达到最大,为95.5%,分生孢子致死温度为60℃,10 min。

关键词：橡胶树叶斑病狗尾草平脐蠕孢生物学特性

橡胶树叶斑病病原菌鉴定及其生物学特性测定和防治药剂筛选

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南方农业学报 2022年第9期53卷 2575-2584页

作者：施玉萍刘一贤李岚岚戴利铭蔡志英云南省热带作物科学研究所云南景洪666100

【目的】明确一种橡胶树新叶斑病的病原菌分类地位及其生物学性状,筛选有效的防治药剂,为其防治提供理论依据。【方法】以采自云南省普洱市江城县曲水镇怒那村橡胶树苗圃的橡胶叶斑病病叶为材料,采用组织分离法和单胞分离法进行病原菌... 详细信息

【目的】明确一种橡胶树新叶斑病的病原菌分类地位及其生物学性状,筛选有效的防治药剂,为其防治提供理论依据。【方法】以采自云南省普洱市江城县曲水镇怒那村橡胶树苗圃的橡胶叶斑病病叶为材料,采用组织分离法和单胞分离法进行病原菌分离纯化,结合柯赫氏法则进行致病性测定,通过形态特征观察及ITS、GADPH、TEF1-α多基因序列分析对病原菌进行分类鉴定;采用单因子变量法研究病原菌生物学特性;采用菌丝生长速率法测定8种药剂对该叶斑病病原菌的毒力。【结果】经组织分离法从橡胶病叶上分离获得2株真菌分离物,其中菌株JCMP17a的孢子形态与感病叶片上挑取的孢子形态相似。柯赫氏法则证明菌株JCMP17a是橡胶树叶斑病的致病菌,该菌的形态特征与双色平脐蠕孢(Bipolaris bicolor)相似,且多基因联合聚类分析显示与B. bicolor聚在系统发育进化树同一分支上。菌株JCMP17a最适生长温度为28℃,最适生长p H 7;致死温度为55℃处理15 min;能利用多种碳源和氮源,碳源以可溶性淀粉最有利于菌丝生长,牛肉浸膏为最适氮源;全黑暗(0 L∶24 D)和光暗交替(12 L∶12 D)条件下均有利于菌丝生长。250 g/L苯醚甲环唑、30%咪鲜胺和250 g/L戊唑醇对病原菌有很好的抑制效果,EC_(50)分别为0.1158、0.2427和0.2613 mg/L。【结论】引起云南省普洱市江城曲水镇怒那村橡胶树苗圃橡胶叶斑病的病原菌为双色平脐蠕孢,这是首次在云南植胶区内发现双色平脐蠕孢侵染引起橡胶叶斑病。250 g/L苯醚甲环唑乳油、30%咪鲜胺微囊悬浮剂和250 g/L戊唑醇水乳剂可用于该病害的防治。

关键词：橡胶树叶斑病双色平脐蠕孢鉴定生物学性状药剂筛选

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滇金丝猴粪便微生物木聚糖降解酶研究

滇金丝猴粪便微生物木聚糖降解酶研究

作者：戴利铭云南师范大学

学位级别：硕士

植食性动物胃肠道中存在丰富的与木质纤维素降解有关的酶类,但不同动物之间存在差异。滇金丝猴是我国I类重点保护动物,为典型植食性灵长类动物,由于摄食种类和物种的差异,其胃肠道中可能蕴含有不同于其它动物的新型微生物木聚糖酶基因... 详细信息

植食性动物胃肠道中存在丰富的与木质纤维素降解有关的酶类,但不同动物之间存在差异。滇金丝猴是我国I类重点保护动物,为典型植食性灵长类动物,由于摄食种类和物种的差异,其胃肠道中可能蕴含有不同于其它动物的新型微生物木聚糖酶基因资源。本文结合传统纯培养和宏基因组学技术,从滇金丝猴粪便微生物中获取丰富的木聚糖降解酶基因,为新型木聚糖酶的开发和滇金丝猴胃肠道微生物资源的利用奠定基础,并为滇金丝猴胃肠道中木质纤维素的降解机理研究提供理论依据。研究结果总结如下:1.以野生和半圈养滇金丝猴粪便微生物宏基因组DNA为模板,GH10木聚糖酶简并引物扩增木聚糖酶基因片段构建文库。从野生和半圈养滇金丝猴粪便微生物克隆文库中分别获得26、28条GH10木聚糖酶基因片段,与GenBank中木聚糖酶序列一致性分别介于58%–95%、63%–81%之间。比对分析发现,两种环境中的GH10木聚糖酶基因都来源于未培养细菌、厚壁菌门、拟杆菌门,其中Bacillus、Bacteroides、Butyrivibrio来源的GH10木聚糖酶基因只存在野生滇金丝猴克隆文库,而Paludibacter、Roseburia来源的GH10木聚糖酶基因只存在半圈养滇金丝猴克隆文库。2.通过培养和免培养技术,从滇金丝猴粪便微生物中获得丰富的木聚糖降解酶基因,其中XynRBM26和XynRBM为编码第10家族的木聚糖酶,XylRBM26为编码第43家族的木糖苷酶。三个基因与已知基因的相似性为55%–84%,说明其为新颖糖苷水解酶基因,分析发现XylRBM26具有两个结构域,为木糖苷酶结构与功能的研究提供了实验材料。3.上述三个基因经原核表达、纯化后研究其酶学特性发现:***26最适pH为5.5,在pH 5.0–7.0之间具有良好的稳定性;最适温度为45℃,50℃时半衰期大于1 h;在5M的NaCl条件下活性保持在86%;此外,该酶对胰蛋白酶有较好的抗性,在饲料行业中有一定应用潜力。***最适温度为50℃,在0℃、10℃下酶活分别为13.5%、46.9%;50℃耐受60 min,活性仍保持95%以上;添加胰蛋白酶放置1 h酶活达120%;能水解燕麦木聚糖、山毛榉木聚糖,4-Nitrophenyl-β-D-xylopyranoside、4-Nitrophenyl-α-L-arabinofuranoside。该酶在水产养殖中具有一定的应用潜力,且能为底物特异性与木糖苷酶的结构研究提供良好的模型材料。***26最适温度为50℃,50℃下半衰期大于1 h;500 mM的木糖条件下剩余酶活50%;具有较好的NaCl、Pb2+、Ca2+抗性;能将木二糖、木三糖、木四糖降解为木糖。该酶在耐Pb2+、耐Ca2+机制研究方面具有一定理论价值,同时在木糖生产和海产品加工方面具有潜在应用价值。

关键词：滇金丝猴木聚糖酶木糖苷酶异源表达多样性

橡胶树多主棒孢拮抗细菌BACYitc8-7的分离鉴定及其挥发性抑菌物质组分分析

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热带作物学报 2022年第8期43卷 1636-1645页

作者：戴利铭李岚岚施玉萍刘一贤邓乐晔吴忠华蔡志英云南省热带作物科学研究所云南景洪666100

多主棒孢菌(Corynespora cassiicola)是为害橡胶叶片的一种重要病原真菌,目前生产上普遍使用化学农药防治该病害,给植胶区的生态环境带来很多负面影响,从橡胶树根际土壤中筛选对橡胶树多主棒孢菌具有高拮抗活性的细菌,可为橡胶树棒孢霉... 详细信息

多主棒孢菌(Corynespora cassiicola)是为害橡胶叶片的一种重要病原真菌,目前生产上普遍使用化学农药防治该病害,给植胶区的生态环境带来很多负面影响,从橡胶树根际土壤中筛选对橡胶树多主棒孢菌具有高拮抗活性的细菌,可为橡胶树棒孢霉落叶病生防药剂的研发提供理论依据。本研究通过稀释涂布、平板对峙法从发病橡胶树根际土壤中分离筛选到1株对橡胶树多主棒孢菌具有高拮抗活性的细菌,抑菌带为(57.68±0.66)mm,且该菌株对9种重要的植物病原真菌均具有抑制作用;经过形态观察、生理生化检测及16S rRNA基因序列分析,结果发现其与铜绿假单孢菌基本相符,命名为BACYitc8-7;以LB、NA、高氏、金氏B和PDA为营养来源,评定不同营养条件下菌株BACYitc8-7挥发性物质对多主棒孢菌的抑制作用,发现菌株BACYitc8-7在金氏B和LB培养基上的拮抗作用最强,抑菌率达43.47%~48.69%;利用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法(HS-SPME-GC-MS)收集并检测菌株BACYitc8-7挥发性物质的抑菌组分,获得包括胺类、醇类、烯类、酚类、酯类、吡嗪类等35种物质,其中含量前5的物质为胺、硼烷二甲硫醚络合物、异戊醇、1-十三烯和2-甲基-3-甲硫基呋喃。

关键词：多主棒孢拮抗细菌分离鉴定挥发性物质抑菌组分

橡胶树季风性落叶病病原菌的分离鉴定及其防治药剂筛选

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中国农业科技导报 2023年第11期25卷 114-122页

作者：施玉萍刘一贤李国伟唐轶戴利铭李岚岚蔡志英云南省热带作物科学研究所云南省天然橡胶可持续利用研究重点实验室(筹)天然橡胶良种选育与栽培技术国家地方联合工程研究中心云南景洪666100 勐腊县勐捧农场有限责任公司云南勐腊666307 勐捧农场社区综合服务中心云南勐腊666307

近2年西双版纳植胶区橡胶树发生大面积落叶,病害症状与季风性落叶病相似。为弄清引起橡胶树落叶病害的致病菌并筛选出有效的防治药剂,采用组织分离法和菌丝尖端纯化法进行病原菌分离、纯化,结合柯赫氏法则、形态特征、生理学特性及病原... 详细信息

近2年西双版纳植胶区橡胶树发生大面积落叶,病害症状与季风性落叶病相似。为弄清引起橡胶树落叶病害的致病菌并筛选出有效的防治药剂,采用组织分离法和菌丝尖端纯化法进行病原菌分离、纯化,结合柯赫氏法则、形态特征、生理学特性及病原菌rDNA-ITS、COXⅡ核苷酸序列分析对病原菌进行鉴定。结果表明,引起橡胶树落叶病害的致病菌为簇囊疫霉(Phytophthora botryosa),为我国橡胶树季风性落叶病致病菌新记录种。采用菌丝生长速率法测定15种杀菌剂对该病原菌的室内抑菌活性,结果表明,48%烯酰·氰霜唑悬浮剂、80%烯酰吗啉水分散粒剂、30%烯酰·甲霜灵水分散粒剂、35%烯酰·霜脲氰悬浮剂、30%氟吡菌胺·甲霜灵水分散粒剂、0.3%四霉素水剂均可有效抑制病原菌的菌丝生长,其EC_(50)分别为0.1371、0.1759、0.2017、0.2577、0.2651和0.3510 mg·L^(-1),这些药剂均可用作该病害田间防治的备选药剂。

关键词：橡胶树季风性落叶病簇囊疫霉病原菌鉴定中国新记录种防治药剂

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暗褐网柄牛肝菌菌核形成相关基因分析

微生物学通报 2023年第10期50卷 4583-4597页

作者：杨天伟戴利铭刘静高锋许欣景方艺伟王文兵杨瑞恒鲍大鹏张春霞云南省热带作物科学研究所云南景洪666100 上海市农业科学院食用菌研究所农业农村部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403

【背景】暗褐网柄牛肝菌(Phlebopus portentosus)是第一个能够人工栽培的食用牛肝菌,人工栽培过程中,不同菌株会形成数量不等的菌核。【目的】探明不同菌株产核差异机制。【方法】采集多菌核(JH1)、寡菌核(JH2)菌株的成熟菌核及无菌核(J... 详细信息

【背景】暗褐网柄牛肝菌(Phlebopus portentosus)是第一个能够人工栽培的食用牛肝菌,人工栽培过程中,不同菌株会形成数量不等的菌核。【目的】探明不同菌株产核差异机制。【方法】采集多菌核(JH1)、寡菌核(JH2)菌株的成熟菌核及无菌核(JH3)菌株培养相同时间的菌丝体进行转录组测序,分析差异表达基因对菌核形成的作用和功能。【结果】KEGG富集分析显示,JH2 vs. JH1互比,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成,精氨酸和脯氨酸代谢,半胱氨酸及蛋氨酸代谢显著富集;JH3 vs. JH1互比,乙醛酸和二羧酸代谢显著富集;JH3 vs. JH2互比,谷胱甘肽、乙醛酸和二羧酸代谢显著富集。菌核形成相关基因分析显示,从JH2 vs. JH1、JH3 vs. JH1和JH3 vs. JH2的差异表达基因中分别筛选到69、118和82条与信号转导、感知刺激、防御、碳水化合物活性酶等有关的基因,其中碳水化合物活性酶基因数量最多。三个比较组共有的碳水化合物活性酶基因在JH1中的表达量高于JH2、JH3,表明JH1更能充分利用底物营养以形成更多菌核。【结论】本研究从转录组水平初步分析了暗褐网柄牛肝菌不同菌株产核差异的原因,为后续菌核与出菇及产量相关性研究提供了理论基础。

关键词：暗褐网柄牛肝菌菌核转录组差异表达基因

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