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Identification and analysis of mutations of the Wilson disease gene in Chinese population

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Chinese Medical Journal 2000年第1期113卷 40-43页

作者：吴志英王柠慕容慎行林珉婷 China 350005

OBJECTIVE: To investigate the characteristics of mutations in exon 3-20 of Wilson disease (WD) gene and their consequences in Chinese population. METHODS: Sixty unrelated normal Chinese and forty-four unrelated WD patients were studied. Genomic DNA was prepared from peripheral blood leukocytes by a salt-out method. Polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) and subsequently direct sequencing were used to identify the mutations and polymorphisms of WD gene. RESULTS: Ten different mutations have been found, accounting for 52% of the mutant genes. Five of them are identified as novel missense mutations. Mutations Arg778Leu, Thr935Met and Ala874Val were represented respectively in 28.4%, 6.8% and 3.4% of WD chromosomes. The remaining mutations were found rare and limited to one or two patients. A total of 11 patients were homozygous for a single mutation, and 17 patients were in a compound heterozygous state with or without a known mutation. CONCLUSION: In Chinese, WD seems to result from two or three relatively common mutations and a large number of rare mutations. Arg778Leu and Thr935Met might be hotspots of mutation in Chinese population. The results indicated that the feature of mutations of WD gene is different between Chinese and the Western. Instead of exon 14 and exon 18, we had to select exon 8 and exon 12 first to detect mutations of WD gene in Chinese. It is of great importance to establish a direct diagnostic method for WD. This study improves our knowledge on functional domains of the WD gene, and helps elucidate the wide spectrum of manifestations of the disease as well.

关键词： Mutation Adenosinetriphosphatase Adolescent Adult Cation Transport Proteins Child Female Hepatolenticular Degeneration Humans Male Research Support, Non-U.S. Gov't

Wilson病基因突变体的体外构建及表达研究

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中华神经科杂志 2003年第5期36卷 339-342页

作者：吴志英王柠慕容慎行福建医科大学附属第一医院神经内科福州350005

目的　研究并比较正常ATP7B蛋白及其突变体蛋白的表达水平 ,为进一步探寻ATP7B蛋白参与铜转运的机制奠定基础。方法　构建含健康人全长Wilson病 (WD)cDNA片段的真核细胞表达质粒ATP7BcDNA/ pcDNA3,定点诱变三种具有代表意义的突变体表... 详细信息

目的　研究并比较正常ATP7B蛋白及其突变体蛋白的表达水平 ,为进一步探寻ATP7B蛋白参与铜转运的机制奠定基础。方法　构建含健康人全长Wilson病 (WD)cDNA片段的真核细胞表达质粒ATP7BcDNA/ pcDNA3,定点诱变三种具有代表意义的突变体表达质粒Arg778Leu/pcDNA3、Gln914Ter/ pcDNA3和Thr935Met/ pcDNA3;同时设计并制备包含ATP7B蛋白N端主要功能区的具有高度特异性和敏感性的ATP7Bn33 6 2 9抗体 ;分别以上述质粒瞬时转染中国仓鼠卵细胞 (Chinesehamsterovary ,CHO) ,收集细胞提取蛋白 ,以ATP7Bn33 6 2 9抗体为一抗 ,免疫印迹分析并比较正常和突变体ATP7B蛋白的表达程度。结果　ATP7B蛋白在正常ATP7BcDNA/pcDNA3表达质粒和Arg778Leu/ pcDNA3、Thr935Met/pcDNA3错义突变体表达质粒转染的CHO细胞中表达量一致 ,而在Gln914Ter/ pcDNA3截短突变体表达质粒转染的CHO细胞中表达量明显增加。结论　成功构建了WD突变体表达质粒并在转染细胞中表达 ,为进一步的功能研究打下基础。错义突变未改变ATP7B蛋白表达量 ,提示错义突变引起铜代谢障碍的机制与蛋白表达量无关。截短突变产生的ATP7B蛋白产物表达量增加可能与其所需的翻译时间相对较短有关。

关键词： Wilson病基因突变 ATP7B蛋白铜代谢障碍发病机制真核细胞表达质粒

肝豆状核变性基因12号外显子突变特征的研究

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中华医学杂志 1999年第6期79卷 422-424页

作者：吴志英王柠慕容慎行林珉婷福建医科大学附属第一医院神经内科

目的研究中国人肝豆状核变性（ＷＤ）基因１２号外显子的突变特征，为建立直接基因诊断的方法提供理论依据。方法应用聚合酶链反应单链构象多态（ＰＣＲＳＳＣＰ）技术，对４４例无亲缘关系的确诊患者和６０名正常对照组进行ＷＤ基... 详细信息

目的研究中国人肝豆状核变性（ＷＤ）基因１２号外显子的突变特征，为建立直接基因诊断的方法提供理论依据。方法应用聚合酶链反应单链构象多态（ＰＣＲＳＳＣＰ）技术，对４４例无亲缘关系的确诊患者和６０名正常对照组进行ＷＤ基因第１２号外显子的突变检测，并用ＤＮＡ测序证实其突变性质和位置。结果８例患者在１２号外显子检测到２种错义突变，占１８％（８／４４），其中６例为Ｔｈｒ９３５Ｍｅｔ突变，２例为Ｇｌｙ９４３Ａｓｐ突变。结论中国人ＷＤ基因第１２号外显子的突变特征与西方人不同。这对于建立准确快速的直接基因诊断方法具有重要价值。

关键词：肝豆状核变性常染色体异常基因突变

Wilson病基因全长外显子的突变检测和分析

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中华神经科杂志 2001年第3期34卷 152-155,W003页

作者：吴志英王柠林珉婷方玲慕容慎行福建医科大学附属第一医院神经内科福州350005

目的　研究报道Wilson病 (WD)基因 7种新突变和 5种新多态 ,结合前期在部分外显子发现并报道的突变和多态现象 ,进一步分析WD基因全长外显子的突变特征 ,以期对中国人WD基因的突变状况有一个完整的认识。方法　研究对象包括 6 0名无亲... 详细信息

目的　研究报道Wilson病 (WD)基因 7种新突变和 5种新多态 ,结合前期在部分外显子发现并报道的突变和多态现象 ,进一步分析WD基因全长外显子的突变特征 ,以期对中国人WD基因的突变状况有一个完整的认识。方法　研究对象包括 6 0名无亲缘关系的正常对照和 84例分别来自6 5个家系的WD患者。抽取上述研究对象的外周静脉血 ,用盐析法或过柱法抽提基因组DNA。用聚合酶链反应方法分别扩增全部的 2 1个外显子顺序 ,以单链构象多态分析及DNA测序方法 ,检测上述研究对象的基因突变和多态。结果　共检测到 18种突变和 17种多态 ,包括 7种新突变和 5种新多态。其中Arg778Leu和Thr935Met为基因突变热点 ,突变频率分别高达 37 7%和 10 0 % ,其余突变的频率均低于 4 0 %。此次研究还发现曾作为突变形式加以报道的Ile1148Thr应考虑为一种多态现象。结论　我国WD基因突变是以少数几个热点突变和广泛存在的罕见突变为特征。

关键词：肝豆状核变性 DNA序列分析基因突变热点外显子

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203例神经痛治疗介绍

中华麻醉学杂志 1989年第2期9卷 108-111页

作者：杨锡馨慕容慎行福建医学院附属第一医院

Wilson病基因突变类型与临床表型的关系

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中华医学杂志 2003年第4期83卷 309-311页

作者：吴志英王柠林珉婷方玲慕容慎行福建医科大学附属第一医院神经内科福州350005 福建省神经病学研究所

目的探讨Wilson病(WD)基因突变类型与临床表型的关系。方法应用聚合酶链反应-单链构象多态分析(PCR-SSCP)和DNA测序方法,对84例WD患者进行WD基因全长21个外显子的突变检测,结合统计学方法,着重分析并探讨中国人WD基因突变热点Arg778Le... 详细信息

目的探讨Wilson病(WD)基因突变类型与临床表型的关系。方法应用聚合酶链反应-单链构象多态分析(PCR-SSCP)和DNA测序方法,对84例WD患者进行WD基因全长21个外显子的突变检测,结合统计学方法,着重分析并探讨中国人WD基因突变热点Arg778Leu基因型与临床表型的关系。结果 18例患者检出Arg778Leu纯合突变。29例患者在一条染色体上检出Arg778Leu杂合错义突变,其中,在另一条染色体上,3例检出移码突变;15例突变未明;余11例检出其他错义突变。就理论而言,与错义突变相比,移码突变可导致更严重的功能缺陷及表型,不能与错义突变混合进行统计学分析,另15例患者因有一条染色体突变未明亦被排除在外。因此,相对Arg778Leu纯合错义突变进行统计学分析时,只能选择11例发生复合错义突变的患者做为Arg778Leu杂合突变病例组。经统计学分析,携带Arg778Leu纯合突变的患者和携带Arg778Leu杂合突变的患者,其起病年龄、血清铜蓝蛋白水平及临床类型均差异有显著意义,P值小于0.05或0.001。结论 Arg778Leu突变不是一种温和的突变,它可导致患者症状出现较早并较严重。

关键词： Wilson病基因突变临床表型

进行性肌营养不良症骨骼肌病及坏死与再生纤维关系的研究

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中华病理学杂志 1990年第3期19卷 172-174页

作者：陈碧芬慕容慎行福建医科大学福建福州福建医科大学附属第一医院福建福州

单链构象多态技术检测脊髓性肌萎缩症基因缺失

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中华神经科杂志 1998年第5期31卷 289-291页

作者：吴志英王柠慕容慎行林珉婷福建医科大学附属第一医院神经内科

目的探讨中国人脊髓性肌萎缩症（ＳＭＡ）基因诊断的可行性。方法应用聚合酶链反应单链构象多态（ＰＣＲＳＳＣＰ）技术研究来自１６个家系的２０例ＳＭＡ患者及２０名正常对照的运动神经元生存（ＳＭＮ）基因的第７、８号外显子的... 详细信息

目的探讨中国人脊髓性肌萎缩症（ＳＭＡ）基因诊断的可行性。方法应用聚合酶链反应单链构象多态（ＰＣＲＳＳＣＰ）技术研究来自１６个家系的２０例ＳＭＡ患者及２０名正常对照的运动神经元生存（ＳＭＮ）基因的第７、８号外显子的缺失情况。结果２０例患者均缺失端粒ＳＭＮ（ＳＭＮＴ）基因的第７号外显子，１９例患者缺失第８号外显子，而正常对照均无外显子缺失。

关键词：脊髓性肌萎缩症运动神经元基因缺失 PCR-SSCP

应用限制性酶谱分析法快速检出Wilson病基因突变热点

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中华神经科杂志 1999年第5期32卷 281-283页

作者：王柠吴志英林珉婷慕容慎行福建医科大学附属第一医院神经内科福州350005

目的建立Wilson病（WD）基因突变热点的快速检出方法，并探讨其在WD临床可疑患者诊断中的价值。方法PCR扩增我国WD基因的突变热区──第8号和12号外显子，分别以限制性内切酶MspI和TaiI消化扩增产物，2％琼脂糖凝胶电泳分离，得出相应... 详细信息

目的建立Wilson病（WD）基因突变热点的快速检出方法，并探讨其在WD临床可疑患者诊断中的价值。方法PCR扩增我国WD基因的突变热区──第8号和12号外显子，分别以限制性内切酶MspI和TaiI消化扩增产物，2％琼脂糖凝胶电泳分离，得出相应限制性酶切图谱并进行分析。56例非同源家系的WD患者及60例正常对照进行了该项检测。其中44例同时进行这两个外显子的测序检测。结果37．5％（21／56）的WD患者在第8号外显子检测到Arg778Leu／Gln点突变，其中12例为纯合点突变，9例为杂合点突变，染色体突变频率为29．5％（33／112）。16．1％（9／56）的患者在第12号外显子检测到Thr935Met点突变，均为杂合点突变，染色体突变频率为8．0％（9／112）。结果与测序相符。结论采用限制性酶谱分析法可准确检出WD基因最常见的两个突变点，有助于对临床可疑患者进行诊断。并具有简便快速、结果清晰可靠、不需用同位素等优点，易于推广应用。

关键词：肝豆状核变性基因突变限制酶图谱法