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天然抗菌肽的作用机理与分子改造研究进展

中国兽医杂志 2014年第10期50卷 53-57页

作者：张庆华徐彦召王青赵志雨尚田田胡建和河南科技学院动物科学学院河南新乡453003

目前细菌耐药问题的日益严重,如超级细菌的产生,以及动植物食品的药物残留问题,给人类的健康安全产生重大的威胁。而在过去的几个世纪,新型抗菌药物的研发进展一直进展缓慢。因此人们急需一种抗菌活性高、安全、不易产生耐药性的新型抗... 详细信息

目前细菌耐药问题的日益严重,如超级细菌的产生,以及动植物食品的药物残留问题,给人类的健康安全产生重大的威胁。而在过去的几个世纪,新型抗菌药物的研发进展一直进展缓慢。因此人们急需一种抗菌活性高、安全、不易产生耐药性的新型抗菌药物。在寻找抗生素替代药物的过程中,人们逐渐把眼光投向了抗菌肽。

关键词：抗菌药物超级细菌耐药问题研发进展替代药物药物残留问题抗菌活性作用机理 α-螺旋革兰阴性菌

基于CMV启动子构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传操作系统

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中国兽医学报 2016年第7期36卷 1092-1097页

作者：徐彦召王青胡建和张慧辉河南科技学院河南新乡453003

构建了一种利用CMV启动子的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)反向遗传操作系统。在获得XX-2012株HP-PRRSV全长cDNA的基础上,将CMV真核启动子序列置于该病毒全长cDNA的5′端,获得含有CMV启动子和XX-2012株HP-PRRSV全长cDNA克隆... 详细信息

构建了一种利用CMV启动子的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)反向遗传操作系统。在获得XX-2012株HP-PRRSV全长cDNA的基础上,将CMV真核启动子序列置于该病毒全长cDNA的5′端,获得含有CMV启动子和XX-2012株HP-PRRSV全长cDNA克隆的重组质粒,将重组质粒直接转染MARC-145宿主细胞拯救病毒。结果显示:转染细胞后获得了拯救病毒,拯救病毒与亲本病毒在MARC-145细胞上具有相似的增殖特性,且拯救病毒序列含有不同于亲本病毒的分子标记(突变产生的MluⅠ酶切位点)。本试验建立了一种简单、操作方便、节约时间和成本的HP-PRRSV反向遗传操作系统的方法,为进一步开展HP-PRRSV的相关研究奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 CMV启动子反向遗传

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猪源奇异变形杆菌的分离鉴定与耐药性分析

猪源奇异变形杆菌的分离鉴定与耐药性分析

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会第二十三次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第三次学术研讨会、中国兽医病理学家第三次学术研讨会

作者：董萌萌徐彦召河南科技学院动物科技学院

为了对河南省某猪场疑似细菌感染病例进行确诊,本研究采集了病猪肠管中的样品从中分离到1株革兰阴性短杆菌,同时对其进行了培养特性观察、生化试验、药敏试验以及16SrRNA基因序列分析。结果显示:分离菌的生化特性、培养特性基本符合奇... 详细信息

为了对河南省某猪场疑似细菌感染病例进行确诊,本研究采集了病猪肠管中的样品从中分离到1株革兰阴性短杆菌,同时对其进行了培养特性观察、生化试验、药敏试验以及16SrRNA基因序列分析。结果显示:分离菌的生化特性、培养特性基本符合奇异变形杆菌的特征,16SrRNA基因序列与奇异变形杆菌的同源性在98%以上,将该分离菌株命名为ZB17;序列分析表明该分离菌株与猪源奇异变形杆菌(HQ259935.1和KR133627.1)的同源性最高,与大肠杆菌、沙门氏菌,克雷伯菌的同源性相对较低;分离株具有较强的致病性和多重耐药性,对复达欣、庆大霉素、奈替米星、阿米卡星敏感,但对氨苄西林、美洛西林、先锋霉素IV、先锋霉素V、先锋霉素VI、卡那霉素、新霉素、四环素、强力霉素耐药。本研究为猪源奇异变形杆菌的分离鉴定及治疗提供了参考。

关键词： 16S rRNA 奇异变形杆菌猪分离鉴定药敏试验

来源： cnki会议评论

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抗菌肽JH-3的抑菌活性及其稳定性分析

畜牧兽医学报 2016年第2期47卷 361-366页

作者：魏晓晓杭柏林马翠夏一赫张冰清王青徐彦召胡建和河南科技学院动物科学学院新乡453003

对牛血红蛋白源抗菌肽P3进行氨基酸改造,并了解改造后抗菌肽JH-3的抑菌活性和稳定性。通过微量稀释法检测了抗菌肽JH-3的最小抑菌浓度（MIC）,通过扫描电镜观察了细菌和真菌形态的变化,测定了抗菌肽JH-3的溶血性、热稳定性、酸碱稳定性... 详细信息

对牛血红蛋白源抗菌肽P3进行氨基酸改造,并了解改造后抗菌肽JH-3的抑菌活性和稳定性。通过微量稀释法检测了抗菌肽JH-3的最小抑菌浓度（MIC）,通过扫描电镜观察了细菌和真菌形态的变化,测定了抗菌肽JH-3的溶血性、热稳定性、酸碱稳定性和盐稳定性。结果表明：抗菌肽JH-3对革兰阳性菌（金黄色葡萄球菌、猪链球菌2型）的MIC为6.25-25μg·mL^-1,对革兰阴性菌（大肠杆菌、猪霍乱沙门菌、副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌）的MIC为3.125-50μg·mL^-1,对真菌（白色念珠菌）的MIC为12.5μg·mL^-1,均具有良好的抗菌活性。经抗菌肽JH-3处理后,大肠杆菌细胞表面出现皱缩、孔洞;金黄色葡萄球菌出现菌体皱缩,细胞的完整性受到破坏;白色念珠菌细胞表面出现凹陷、突出、裂痕。在6-100倍MIC时312.5μg·mL^-1抗菌肽JH-3的溶血率仅12.84%;75-100℃的高温、80-100mmol·L^-1的高浓度NaCl和pH 4.0及pH 10.0的高酸碱性对抗菌肽JH-3的抑菌活性没有明显的影响。研究结果为抗菌肽JH-3的临床应用提供了理论基础,且抗菌肽JH-3有替代抗生素成为新抗菌药物的潜力。

关键词：抗菌肽JH-3 抑菌活性溶血性稳定性

PRRSV XX2012株的分离及其N基因变异特征研究

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PRRSV XX2012株的分离及其N基因变异特征研究

中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会

作者：王飞飞徐彦召中国农业科学院上海兽医研究所河南科技学院动物科技学院

猪繁殖与吸综合征（PRRS）是导致母猪繁殖障碍以及仔猪呼吸系统疾病的重大疾病之一,PRRS从其被发现以来已给全球养猪业带来巨大经济损失。PRRSV被分为两个基因型:美洲型（代表株VR2332）,欧洲型（代表毒株LV）。PRRSV是单股正链RNA病毒...

猪繁殖与吸综合征（PRRS）是导致母猪繁殖障碍以及仔猪呼吸系统疾病的重大疾病之一,PRRS从其被发现以来已给全球养猪业带来巨大经济损失。PRRSV被分为两个基因型:美洲型（代表株VR2332）,欧洲型（代表毒株LV）。PRRSV是单股正链RNA病毒,基因组全长约15kb,不分节,基因组5’端有甲基化的帽子结构,3’端有poly结构,有10个开放阅读框已经被确定,ORF1a,ORF1b,ORF2a,ORF2b,ORF3-7。猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）基因组存在广泛的变异性,在所有毒株之间N蛋白相对比较保守。N蛋白又称为核衣壳蛋白。本研究利用PRRSV N蛋白基因的保守性,克隆得到了新发现毒株的N基因,并将其与经典毒株和高致病毒性进行比较,确定该毒株的种类。本研究从河南新乡某猪场送检的母猪繁殖障碍病例的血清中,用细胞培养法分离得到一株猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）,命名为PRRSVXX2012。据Gen Bank中已经存在的PRRSV基因序列设计出一对特异性引物,以分离得到的PRRSV XX2012的RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增出该病毒株N基因的全长片段,然后将它插入到质粒载体中,构建出一个重组质粒,并对克隆出的N基因进行测序,将所得序列利用Dnastar等软件进行分析,并与PRRSV VR-2332株和Hu N4株的N基因进行同源性对比。结果显示,成功的克隆得到长372 bp的PRRSV N基因,序列对比结果表明,该基因与经典代表毒株PRRSV VR-2332中N基因核苷酸的同源性是94.1%,与高致病性（HP）-PRRSV代表株Hu N4的核苷酸同源性为99.5%;系统进化树结果表明所分离到的病毒属于高致病性PRRSV。

关键词：

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高校大型实验仪器设备管理策略的探讨

才智 2016年第24期 158-159页

作者：王青徐彦召胡建和河南科技学院

对高校大型仪器设备进行有效的管理是高校科研工作人员及仪器管理操作人员的工作重点。如何对大型、精密、昂贵的实验仪器设备进行有效的管理,不同高校都有自己独特的管理方式。本文仅就如何对大型仪器设备进行科学、高效、合理的管理... 详细信息

对高校大型仪器设备进行有效的管理是高校科研工作人员及仪器管理操作人员的工作重点。如何对大型、精密、昂贵的实验仪器设备进行有效的管理,不同高校都有自己独特的管理方式。本文仅就如何对大型仪器设备进行科学、高效、合理的管理进行了初探,探讨如何加强大型仪器设备的高效能管理,促进高校科研体系的全面发展。

关键词：高校大型仪器设备管理

乙型脑炎病毒SXBJ07株的分离鉴定及序列分析

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2009年第4期37卷 1-6,12页

作者：王韦华张旭张彦明邢福珊徐彦召西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

【目的】分离鉴定乙型脑炎病毒（JEV）,确定分离毒株的基因分型及其E区段氨基酸的序列特征。【方法】采用BHK-21细胞培养法,从猪脑组织标本中分离出1株病毒,对其进行细胞和免疫荧光试验,同时采用RT-PCR扩增并克隆该毒株的PrM、E区段核... 详细信息

【目的】分离鉴定乙型脑炎病毒（JEV）,确定分离毒株的基因分型及其E区段氨基酸的序列特征。【方法】采用BHK-21细胞培养法,从猪脑组织标本中分离出1株病毒,对其进行细胞和免疫荧光试验,同时采用RT-PCR扩增并克隆该毒株的PrM、E区段核苷酸序列,利用PrM（456-695位）区核苷酸序列与36株参考序列进行基因分型分析,并对E区核苷酸序列与减毒活疫苗株SA-14-14-2株的相应序列进行比对,分析分离株和疫苗株氨基酸的同源性及关键结构域的差异。【结果】分离出的病毒经细胞病变和直接免疫荧光试验证实为乙脑病毒,命名为SX-BJ07;用该病毒感染BHK-21细胞,72 h后所有细胞均发生病变（CPE）;用该病毒接种3日龄乳鼠,72 h之内即可导致乳鼠死亡;SXBJ07株PrM（456-695位）区基因分型证实,分离株属于基因Ⅰ型,E区段核苷酸和氨基酸与减毒活疫苗株SA-14-14-2株的同源性分别为87.7%和97.0%,但在E蛋白的活性关键结构域有13个氨基酸存在差异。【结论】从陕西省境内首次成功分离到1株Ⅰ型乙脑病毒,初步确定了该分离株的分子特征,对乙型脑炎的流行病学研究及其防治具有重要意义。

关键词：猪乙型脑炎乙脑病毒分离鉴定 PrM基因分型 E基因

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5a多克隆抗血清的制备

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中国生物工程杂志 2015年第8期35卷 38-43页

作者：王青徐彦召魏晓晓王秋霞杭柏林孙亚伟王飞飞胡建和河南科技学院新乡453003

构建XX2012株猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5a蛋白基因的真核表达载体,并制备出GP5a蛋白的多克隆抗血清。以XX2012株PRRSV GP5a蛋白的基因序列为扩增模板,设计并合成一对特异... 详细信息

构建XX2012株猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5a蛋白基因的真核表达载体,并制备出GP5a蛋白的多克隆抗血清。以XX2012株PRRSV GP5a蛋白的基因序列为扩增模板,设计并合成一对特异性扩增引物,通过RTPCR扩增得到该病毒株的GP5a蛋白全长基因片段,将其定向克隆到真核表达载体p CAGG中,构建含有GP5a蛋白基因的重组表达载体p CAGGS-GP5a,并将获得的p CAGGS-GP5a载体采用基因免疫的方式免疫BALB/c小鼠制备GP5a蛋白的多克隆抗体。结果显示,成功克隆出了XX2012株PRRSV GP5a蛋白全长基因,片段大小为156 bp;构建的p CAGGS-GP5a载体经PCR、双酶切、测序鉴定均无误;通过三次基因免疫小鼠成功制备出了GP5a蛋白的多克隆抗体,间接免疫荧光试验证实制备出的多克隆抗体能特异性识别病毒感染后的细胞。由此获得了PRRSV GP5a蛋白基因的真核表达载体,制备出了GP5a蛋白的特异性多克隆抗血清,为今后开展GP5a蛋白的亚细胞定位及相关功能的研究奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5a蛋白真核表达基因免疫

猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离及其基因组变异特征的研究

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中国兽医科学 2016年第10期46卷 1241-1247页

作者：王青徐彦召王磊张慧辉张文举胡建和石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 河南科技学院动物科技学院河南新乡453003

为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）在河南省新乡地区猪体内的进化情况,笔者对河南省新乡地区某猪场送检的疑似猪繁殖与呼吸综合征的病料进行了病毒的分离鉴定,并采用PCR扩增得到了该病毒的全基因组序列,同时对分离病毒株的GP5和NSP... 详细信息

为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）在河南省新乡地区猪体内的进化情况,笔者对河南省新乡地区某猪场送检的疑似猪繁殖与呼吸综合征的病料进行了病毒的分离鉴定,并采用PCR扩增得到了该病毒的全基因组序列,同时对分离病毒株的GP5和NSP2序列进行了比对分析。结果显示：成功分离并鉴定出1株美洲型PRRSV（XX2015）,与中国代表毒株CH-1a中的核苷酸同源性是92.8%,与高致病性（HP）-PRRS病毒代表株Hu N4、Hu B1、He Nan-1、He NAN-A14株的核苷酸同源性则分别为97.2%、97.0%、97.2%、94.4%。对基因组的进一步分析表明,该毒株GP5蛋白非中和性表位处存在氨基酸变异,NSP2蛋白在第481位、第485-488位、第533-561位共缺失34个氨基酸。XX2015分离株是HP-PRRSV的一个代表株,该病毒株在NSP2蛋白中存在跳跃性突变,为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子进化提供了分子证据。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 XX2015株全基因组遗传进化分析