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极地嗜冷菌Pseudoalteromonas ***-1产适冷蛋白酶及其基因克隆与表达的研究

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极地嗜冷菌Pseudoalteromonas ***-1产适冷蛋白酶及其基因克隆与...

作者：徐国英山东大学

学位级别：硕士

极地具有独特的地理、气候和环境特征,形成了一个酷寒、强辐射和高盐的自然环境,造就了极地微生物的新颖性与多样性,是发现微生物新物种和新型活性先导化合物的新资源宝库。在极端环境中生存的微生物,在与环境长期抗争的适应过程中必然... 详细信息

极地具有独特的地理、气候和环境特征,形成了一个酷寒、强辐射和高盐的自然环境,造就了极地微生物的新颖性与多样性,是发现微生物新物种和新型活性先导化合物的新资源宝库。在极端环境中生存的微生物,在与环境长期抗争的适应过程中必然形成了许多普通微生物所没有的独特特性和适应机制。因此极地微生物不仅是研究在低温条件下生物适应性的极好材料,而且也是获得在低温条件下具有较大催化能力的低温酶类的最佳来源之一。对极地微生物及其产生低温酶的研究不仅有着重要的生物学意义,而且由于低温酶具有能在低温下有效发挥催化作用的特点,在生物工程某些领域有着广阔的应用前景。从实验室保存的极地微生物资源库中通过酪蛋白平板法筛选到106株在低温条件（4℃）下具有蛋白酶活性的菌株,并对部分酪蛋白水解圈较大的菌株进行了发酵液酶活测定和分子鉴定与系统发育分析。结果表明,8株低温条件下蛋白酶酶活较高的极地菌分别属于假交替单胞菌属（Pseudoalteromonas）、科尔韦尔氏菌属（Colwellia）、希瓦氏菌属（Shewanella）、嗜冷杆菌属（Psychrobacter）。选择低温条件下蛋白酶活性较高的菌株Pseudoalteromonas sp. QI-1为研究对象,以酪蛋白为底物对其产适冷蛋白酶的粗酶酶性质进行了初步研究。结果表明,菌株QI-1产适冷蛋白酶酶活最适反应温度为40℃,0℃仍保持10%的相对酶活,酶作用最适反应pH值为10.0;其催化作用不需要金属离子的参与;热稳定性极差,在60℃放置15min即完全失活;4℃条件下,与0.05mol/L pH9.0Tris-HCl缓冲液混合放置36h仍可保持90%的相对酶活,在0.05mol/L pH 7.0～pH 9.0的Tris-HCl和pH 9.0～pH 11.0Glycine-NaOH缓冲液中放置36小时仍可保持80%以上的相对酶活。对Pseudoalteromonas sp. QI-1蛋白酶酶谱的研究表明,Pseudoalteromonas sp. QI-1可能分泌四种蛋白酶。 Pseudoalteromonas sp. QI-1产适冷蛋白酶的产酶条件优化表明,菌株QI-1的最适生长和产酶温度均为5℃;最佳接种浓度为1%;发酵培养基的最适初始pH值和装样量的最适值分别为pH 5.0-pH 10.0和10%;20%oNaCl对菌体的生长和产酶最有利;麸皮和醋酸钠分别为培养基中最佳氮源和碳源;酪蛋白对菌株QI-1胞外蛋白酶的产生有明显的诱导作用;Mg2+和0.5%的tween-80有利于产酶;正交实验结果的分析结果显示：Pseudoalteromonas sp. QI-1产蛋白酶最佳培养基配方为：麸皮5g／L,酵母粉2.5g／L,酪蛋白0.3%, MgCl2·6H2O 3g/L, KCl 1.5g/L,最佳培养液酶活可达到166.20U／ml。考虑到低温培养的局限性,对Pseudoalteromonas sp. QI-1的适冷蛋白酶基因进行了克隆与异源表达研究。提取Pseudoalteromonas sp. QI-1的基因组DNA后,采用限制性内切酶Sau3AI酶切染色体DNA,分离纯化2～9kb的DNA片段,然后与事先经BamHI酶切且去磷酸化的质粒载体pUC118连接,导入大肠杆菌DH5α中,以此建立了Pseudoalteromonas sp. QI-1基因组DNA文库,产生约20000个重组子的基因组文库,采用常规的透明圈法从基因组文库中筛选目的克隆,即在37℃培养至长出可见菌落,然后4℃放置4d,最终筛选到1个有明显透明圈的克隆子。提取该阳性克隆的质粒DNA并测序发现,该克隆子质粒包含一个完整的蛋白酶的可读框架（2127bp）,编码708个氨基酸,其序列已经提交Genbank,序列注册号为HM047289。结构分析表明,该酶基因编码的蛋白质序列可能包括四个结构域：信号肽、N端前导序列、催化中心及C端延伸序列,并具有Asp 185、His244和Ser425组成的活性催化中心。对适冷蛋白酶PRO-2127的氨基酸组成分析结果显示,PRO-2127具有大多数适冷酶的特性,蛋白质序列中精氨酸及精氨酸与精氨酸+赖氨酸（Arg/（Arg+Lys））的摩尔比例下降,脯氨酸含量下降,甘氨酸含量上升。适冷蛋白酶基因pro-2127的异源表达研究发现,重组的蛋白酶基因pColdⅢ-pro-2127及pMAL-c4x-pro-2127在E. coli BL21（DE3）中诱导表达后酶活分别为4.44U/ml and 3.65 U/ml。重组E. coli pColdⅢ-pro-2127表达蛋白酶PRO-2127的最适温度和最适pH分别为40℃和pH 10.0～pH 11.0,重组

关键词：极地微生物适冷蛋白酶筛选发酵条件酶学性质基因克隆与表达

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D企业考勤管理系统研究与设计

D企业考勤管理系统研究与设计

作者：徐国英石家庄铁道大学

学位级别：硕士

本文以机械制造型D企业的考勤管理为研究对象,在对国内外考勤管理系统的研究现状进行分析的基础上,主要对该企业在考勤管理中存在的问题进行调研分析,采用软件项目管理、软件工程方法进行研究,包括软件前期调研、需求分析、设计实现、... 详细信息

本文以机械制造型D企业的考勤管理为研究对象,在对国内外考勤管理系统的研究现状进行分析的基础上,主要对该企业在考勤管理中存在的问题进行调研分析,采用软件项目管理、软件工程方法进行研究,包括软件前期调研、需求分析、设计实现、软件测试、软件部署实施及运行维护,在整个生命周期管理中,考虑质量、进度控制,进行考勤管理软件的开发及推广实施,同时进行了考勤业务流程梳理。

关键词：企业考勤管理开发

添加不同纳米颗粒的导热油直接吸收集热实验性能

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化工学报 2014年第S2期65卷 293-298页

作者：徐国英李凌志张小松孙岳明东南大学能源与环境学院江苏南京210096 东南大学化学与化工学院江苏南京210096

提出并探讨了采用导热油基液纳米流体为集热介质的太阳能直接吸收式集热方法。分别对添加纳米CuO、Fe3O4、石墨颗粒的导热油基液纳米流体进行了闷晒实验研究。结果显示:添加上述纳米颗粒均可显著提高导热油对太阳辐射的吸收;80℃以内工... 详细信息

提出并探讨了采用导热油基液纳米流体为集热介质的太阳能直接吸收式集热方法。分别对添加纳米CuO、Fe3O4、石墨颗粒的导热油基液纳米流体进行了闷晒实验研究。结果显示:添加上述纳米颗粒均可显著提高导热油对太阳辐射的吸收;80℃以内工况下,纳米流体的直接吸收集热效率要高于传统镀膜真空管内导热油间接吸收的集热效率;但在更高温度工况下的对外散热损失增大,效率迅速下降。同时,实验对比分析了纳米颗粒的添加质量分数对导热油-CuO纳米流体集热效率、散热损失系数等性能参数的影响规律,得出了最佳纳米颗粒添加比例范围。

关键词：太阳能集热纳米流体导热油集热效率

平板型太阳能光伏/光热一体化热泵热水系统特性

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化工学报 2012年第S2期63卷 136-141页

作者：徐国英张小松赵善国东南大学能源与环境学院江苏南京210096 常熟市东南应用技术研究院江苏常熟215500

研究了一种平板型太阳能光伏/光热一体化热泵(PV/T-HP)系统,制冷剂R134a直接在太阳能光伏板背面盘管内吸热而蒸发,以降低光伏电池工作温度,保证其高效稳定地输出电能;集热器同时作为蒸发器,所收集的热量经热泵循环进行温度提升,为建筑... 详细信息

研究了一种平板型太阳能光伏/光热一体化热泵(PV/T-HP)系统,制冷剂R134a直接在太阳能光伏板背面盘管内吸热而蒸发,以降低光伏电池工作温度,保证其高效稳定地输出电能;集热器同时作为蒸发器,所收集的热量经热泵循环进行温度提升,为建筑提供生活热水、供暖和驱动制冷空调。对平板型PV/T-HP热水系统在南京室外的一个夏季晴天工况下循环加热180L水至60℃进行了实验研究,探讨了太阳总辐照度、光伏/集热器工作温度以及光电输出控制方式对系统光电、光热综合输出特性的影响规律;对比实验得出了在热电联供模式下,系统发电量比无冷却的单一光电输出模式下相对高出35%。

关键词：太阳能热泵光伏/光热一体化集热/蒸发器光电特性

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四自由度机械臂视觉伺服系统的研究

四自由度机械臂视觉伺服系统的研究

作者：徐国英哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

现代工业中,各种类型的机器人的应用越来越普遍,适用领域越来越广泛,执行任务也越来越复杂。为赋予机器人更高级的智能,增强机器人认知和适应工作环境、自主分析、自动执行任务的能力,各种外部传感器,如力觉、触觉、距离和视觉传感器被... 详细信息

现代工业中,各种类型的机器人的应用越来越普遍,适用领域越来越广泛,执行任务也越来越复杂。为赋予机器人更高级的智能,增强机器人认知和适应工作环境、自主分析、自动执行任务的能力,各种外部传感器,如力觉、触觉、距离和视觉传感器被越来越多的应用在机器人控制系统中。其中,视觉传感器为无接触测量,具有信号范围大、信息完整等优点,被认为是机器人最重要的传感器。因此,在机器人位置和运动控制中应用视觉信息,对反馈图像进行快速图像处理,在尽量短的时间内给出机器人运动控制信号,以构成机器人的位置闭环控制,是近年来研究的热点。机器人视觉伺服涉及许多自成一体的研究领域,如图像处理、计算机视觉、运动学、动力学、控制理论及实时计算等。本文主要研究机器人视觉伺服系统的结构组成及软、硬件实现方案,并建立一个四自由度视觉机械臂实验系统。首先,在分析各种机器人视觉伺服系统优缺点的基础上,针对本课题的研究对象及特点,采用了外环为视觉控制器、内环为关节伺服控制的双闭环结构,并采用了基于图像的视觉控制策略。引用无标定视觉伺服方法——图像雅可比矩阵方法,并利用人工神经网络方法逼近图像雅可比矩阵,将图像空间的目标信息转换到机器人坐标系。机械臂各关节直流电机采用PWM方式驱动,伺服控制器采用了位置环和速率环相结合的双闭环结构。视觉子系统采用USB摄像头与PC机结合的方式,在Matlab环境下完成图像采集、图像增强、图像识别和特征提取的算法实现,并采用串口通讯的方式将图像特征矢量传输至主控计算机。另一方面,利用PCI1711板卡实现机器人位姿传感器及关节控制器与主控计算机之间的连接,在Simulink环境下建立实时视窗目标(Real-Time Windows Target)仿真系统,使控制系统与实际装置之间能够进行实时通信和实时控制,最终实现机器人的视觉伺服控制。目前,已完成了关节伺服控制器和视觉子系统的设计和调试,并对视觉机械臂进行了整体调试,取得了较理想良好的性能。

关键词：视觉伺服机械臂图像雅可比矩阵神经网络

民国时期民众教育馆图书馆(室)的发展研究——基于云南省的分析

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思想战线 2015年第S1期41卷 185-187页

作者：张志东徐国英云南大学教务处云南工商学院

民众教育馆图书馆(室)是民国时期一种重要的公共图书馆类型,伴随着民国时期图书馆法规的颁布、民众教育运动的开展得以迅速发展,自身的制度建设不断完善。普及了大众文化,促进了当时民众的文化繁荣,推动了公共图书馆事业的发展。

关键词：民众教育馆图书馆(室) 民国时期

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中国零售企业如何应对外商企业渗透

商业时代 2001年第04A期 10-12页

作者：王涓徐国英

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中小学教师课堂教学技能的新修炼

中小学教师课堂教学技能的新修炼

2007年

作者：徐国英高春利

课堂教学技能是教师圆满完成教学任务的行为方式。可以肯定，一个没有熟练教学技能的教师难以有效组织学生主动的学习。本书针对教学技能作了以下几个方面的阐述：教学技能概述（技能；技能的形成；教学技能；教学技能训练）；备课技能... 详细信息

ISBN: (纸本)7561338430

课堂教学技能是教师圆满完成教学任务的行为方式。可以肯定，一个没有熟练教学技能的教师难以有效组织学生主动的学习。本书针对教学技能作了以下几个方面的阐述：教学技能概述（技能；技能的形成；教学技能；教学技能训练）；备课技能（分析教学对象；设计教学目标；分析……

关键词：文化、科学、教育、体育教育中等教育

来源：汇雅图书（南通市图书馆... 评论

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疯鹿病的流行病学和病原学

中国人兽共患病杂志 2004年第1期20卷 1-4页

作者：于恩庶徐国英林春芳福建省疾病预防控制中心福州350001

疯鹿病在医学上称为慢性消耗病(chronic wasting disease,CWD),60年代美国北部首先发现以来,在鹿中间迅速蔓延,大约3000个农场的175000头鹿感染,是鹿的一种致命性疾病.美国有3人在小孩时曾吃过鹿肉和麋鹿肉,到30岁时患上了克雅氏病.食... 详细信息

疯鹿病在医学上称为慢性消耗病(chronic wasting disease,CWD),60年代美国北部首先发现以来,在鹿中间迅速蔓延,大约3000个农场的175000头鹿感染,是鹿的一种致命性疾病.美国有3人在小孩时曾吃过鹿肉和麋鹿肉,到30岁时患上了克雅氏病.食品和药品专家认为此例虽非确诊病例,但不能排除慢性消耗病害人的可能性.因为本病无特异临床症状,潜伏期很长,又不认识,故对本病流行真实情况尚不清楚.

关键词：疯鹿病流行病学病原学克雅氏病