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刚地弓形虫毒力调节因子研究进展

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2015年第4期33卷 297-300页

作者：夏菁彭鸿娟南方医科大学公共卫生与热带医学学院广东省热带病研究重点实验室病原生物学系广州510515

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)主要分3种基因型(Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型),3型虫株对宿主的毒力具有明显差异。弓形虫棒状体蛋白(rhoptry protein,ROP)中的ROP18、ROP16和ROP5在弓形虫感染过程中会被分泌到宿主细胞内,发挥调节弓形虫毒力的作... 详细信息

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)主要分3种基因型(Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型),3型虫株对宿主的毒力具有明显差异。弓形虫棒状体蛋白(rhoptry protein,ROP)中的ROP18、ROP16和ROP5在弓形虫感染过程中会被分泌到宿主细胞内,发挥调节弓形虫毒力的作用,造成不同型虫株间毒力差异,是主要的毒力调节因子。本文对国内外有关弓形虫毒力调节因子的研究进行综述。

关键词：刚地弓形虫毒力毒力调节因子

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医院理工医复合型人才的培养

中华医院管理杂志 1997年第12期13卷 21-22页

作者：杨俊彭鸿娟解放军第四五八医院

医院理工医复合型人才的培养杨俊彭鸿娟作者单位：５１０６０２广州，解放军第四五八医院培养理工医结合的复合型人才，其基本内涵是：以工向医的渗透为主，通过系统地、有机结合地向医护人员传授理工医多学科知识与技能，把其培养成为... 详细信息

医院理工医复合型人才的培养杨俊彭鸿娟作者单位：５１０６０２广州，解放军第四五八医院培养理工医结合的复合型人才，其基本内涵是：以工向医的渗透为主，通过系统地、有机结合地向医护人员传授理工医多学科知识与技能，把其培养成为能综合运用自然科学理论和工程技术方...

关键词：理工复合型人才

弓形虫抑制γ干扰素依赖的宿主细胞免疫的研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2017年第5期35卷 503-508页

作者：姚礼捷彭鸿娟南方医科大学公共卫生学院病原生物学系广东省热带病研究重点实验室广州510515

近年来的研究表明,弓形虫感染小鼠细胞后,分泌的毒力蛋白——棒状体蛋白18(ROP18)能与免疫相关GTP酶(IRG)结合并使其发生磷酸化,致使IRG不能结合至纳虫泡膜上,纳虫泡不发生破裂,弓形虫得以在纳虫泡中生长增殖。此为弓形虫在小鼠细胞内... 详细信息

近年来的研究表明,弓形虫感染小鼠细胞后,分泌的毒力蛋白——棒状体蛋白18(ROP18)能与免疫相关GTP酶(IRG)结合并使其发生磷酸化,致使IRG不能结合至纳虫泡膜上,纳虫泡不发生破裂,弓形虫得以在纳虫泡中生长增殖。此为弓形虫在小鼠细胞内实现免疫逃避的机制,但是弓形虫感染人细胞后的免疫逃避机制尚未明了。据报道,人细胞中泛素标记的纳虫泡能与内溶酶体系统融合,最终导致弓形虫因酸化而死亡。为此,本文综述了近年来弓形虫抑制宿主免疫功能,尤其是γ干扰素依赖的细胞免疫,以及弓形虫通过阻断泛素标记纳虫泡膜进而成功实现免疫逃避的研究进展。

关键词：刚地弓形虫 IFN-γ 细胞免疫免疫逃避泛素蛋白

日本血吸虫腺苷酸激酶基因的表达及其重组蛋白免疫反应性的评价

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2004年第1期22卷 46-49页

作者：彭鸿娟陈晓光李华王春梅第一军医大学病原生物学教研室广州510515

目的　将亚克隆入 pET3 2a( +)质粒的日本血吸虫腺苷酸激酶 (adenylatekinase ,AK )基因进行表达及蛋白纯化 ,并对表达产物的免疫反应性进行评价。　方法　将重组表达质粒 pET3 2a( +) AK转入宿主菌大肠埃希菌BL2 1,异丙基 β D 硫代... 详细信息

目的　将亚克隆入 pET3 2a( +)质粒的日本血吸虫腺苷酸激酶 (adenylatekinase ,AK )基因进行表达及蛋白纯化 ,并对表达产物的免疫反应性进行评价。　方法　将重组表达质粒 pET3 2a( +) AK转入宿主菌大肠埃希菌BL2 1,异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达后超声裂菌 ,离心 ,取上清进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE) ;将SDS PAGE后的蛋白转移至聚偏二氟乙烯 (PVDF)膜上 ,分别用 6 组氨酸 ( 6 His)抗体、日本血吸虫尾蚴感染6wk的兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清为一抗进行蛋白质印迹试验 (Westernblotting) ;用金属Ni螯合物亲和层析树脂 (Ni NTA)层析柱纯化目标蛋白 ;以纯化后的融合蛋白为包被抗原 ,酶联免疫吸附测定 (ELISA)检测正常兔血清和血吸虫感染兔血清。　结果　重组菌用IPTG诱导表达后进行SDS PAGE ,于相对分子质量 (Mr) 40 0 0 0处见一特异表达带 ,与预期表达的融合蛋白大小相符 ;Western印迹分析显示该重组的融合蛋白带有预期的 6 His基团 ,且能与尾蚴感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清发生特异性反应 ;ELISA结果显示纯化的重组AK蛋白可以特异识别血吸虫感染兔血清。　结论　AK基因在工程菌中以可溶性融合蛋白的形式得到表达。

关键词：日本血吸虫腺苷酸激酶基因表达重组蛋白免疫反应性蛋白质印迹法酶联免疫吸附测定

日本血吸虫M_r为8000钙结合蛋白基因的表达及其融合蛋白免疫反应性的评价

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第一军医大学学报 2003年第7期23卷 706-708,713页

作者：许行彭鸿娟陈晓光第一军医大学寄生虫学教研室广东广州510515

目的将亚克隆在pET32a(+)质粒上的日本血吸虫Mr为8 000钙结合蛋白(calcium-binding protein, CBP) 基因进行表达及蛋白纯化,并对表达产物用Western blotting 及ELISA方法进行免疫反应性的评价。方法将重组表达质粒pET32a(+)-CBP 转化入... 详细信息

目的将亚克隆在pET32a(+)质粒上的日本血吸虫Mr为8 000钙结合蛋白(calcium-binding protein, CBP) 基因进行表达及蛋白纯化,并对表达产物用Western blotting 及ELISA方法进行免疫反应性的评价。方法将重组表达质粒pET32a(+)-CBP 转化入宿主菌BL21中,IPTG诱导表达后超声裂菌,离心后取上清进行SDS-PAGE,观察融合蛋白的表达情况;用金属Ni鏊合物亲和层析树脂(Ni-NTA)柱子纯化目标蛋白;将SDS-PAGE后的蛋白从凝胶转移到聚氟乙烯膜上,分别用6-组氨酸(6-His)抗体、日本血吸虫尾蚴感染6周的兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清作一抗进行免疫印迹,将纯化后的融合蛋白作为包被抗原,ELISA法检测正常兔血清及感染兔血清,对该蛋白的免疫反应性作出评价。结果重组菌株用IPTG诱导后于Mr=29 000处有一表达条带,该蛋白与硫氧还蛋白融合表达,带有6-His基团, 用抗6-His抗体做免疫印迹有特异性的反应条带,而用尾蚴感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清做免疫印迹都没有特异性的目标反应带出现,ELISA 的结果显示该蛋白与血吸虫感染兔血清没有免疫反应性。结论CBP蛋白与硫氧还蛋白融合表达后为可溶性蛋白且相对分子质量约为29 000,该蛋白与尾蚴感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清均无免疫反应性。

关键词：日本血吸虫钙结合蛋白基因基因表达免疫反应性 ELISA

弓形虫感染导致DC2.4细胞外泌体特征差异的研究

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南方医科大学学报 2020年第5期40卷 727-732页

作者：李东亮杨淑君彭鸿娟南方医科大学公共卫生学院病原生物学系广东广州510515 陆军第74集团军医院超声诊断科广东广州510318

目的分析小鼠树突状细胞(DC2.4)感染弓形虫后所分泌的外泌体及其富集的小RNA与piRNA的变化,为外泌体在弓形虫-宿主互作中的作用提供必要的信息。方法DC2.4细胞分为2组(未感染组与感染组),用含无外泌体血清的培养基培养。待细胞长满,感... 详细信息

目的分析小鼠树突状细胞(DC2.4)感染弓形虫后所分泌的外泌体及其富集的小RNA与piRNA的变化,为外泌体在弓形虫-宿主互作中的作用提供必要的信息。方法DC2.4细胞分为2组(未感染组与感染组),用含无外泌体血清的培养基培养。待细胞长满,感染组用弓形虫RH株速殖子感染28 h,未感染组则培养28 h。收集两组细胞的培养上请,采用超速离心法分别提取外泌体,通过透射电镜检测外泌体形态,并用纳米颗粒追踪仪检测外泌体的粒径大小以及颗粒密度。对外泌体进行小RNA高通量测序分析,用生物信息学方法分析感染组与对照组差异显著的piRNA,对并其靶基因及功能进行预测。结果对弓形虫感染与未感染的DC2.4细胞分泌的外泌体进行形态学鉴定以及粒径大小和密度的比较,发现弓形虫感染会导致DC2.4分泌的外泌体密度增加;而通过外泌体小RNA测序,发现弓形虫感染会导致外泌体中miRNA及piRNA数目增加,其中感染后显著升高的piRNA包括piR-mmu-159、piR-mmu-1526、piR-mmu-9082、piR-mmu-17405、和piR-mmu-25576。对上述piRNA靶基因的预测和KEGG分析,显示这些靶基因显著富集到MAPK、Ras、cAMP、actin细胞骨架调节、粘着斑形成、轴突导向等信号通路上。结论弓形虫感染导致DC2.4细胞分泌的外泌体粒径尺寸峰值增大和密度增加,miRNA及piRNA数目增加,提示外泌体在弓形虫-宿主细胞互作中起着重要作用。

关键词：弓形虫 DC2.4细胞外泌体小RNA

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白纹伊蚊蜕皮激素拮抗剂筛选酵母模型的建立

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2007年第5期25卷 376-380页

作者：顾金保孙彦涛彭鸿娟南方医科大学病原生物学系山西省大同市马军营66173部队营部

目的在毕赤酵母体内构建白纹伊蚊蜕皮激素转录活化系统,建立高通量杀虫剂筛选模型,用于筛选蜕皮激素代谢途径拮抗药物。方法人工合成果蝇蜕皮激素响应元件(EcRE)5次重复的序列,与果蝇热激蛋白基因启动子(pHSP27)序列连接,以绿色荧光蛋白... 详细信息

目的在毕赤酵母体内构建白纹伊蚊蜕皮激素转录活化系统,建立高通量杀虫剂筛选模型,用于筛选蜕皮激素代谢途径拮抗药物。方法人工合成果蝇蜕皮激素响应元件(EcRE)5次重复的序列,与果蝇热激蛋白基因启动子(pHSP27)序列连接,以绿色荧光蛋白(GFP)报告基因,将EcRE-pHSP27-GFP片段亚克隆入pPIC3.5k,整合入毕赤酵母染色体构建阴性酵母A。人工合成白纹伊蚊蜕皮激素受体(EcR)及超螺旋蛋白(USP)编码序列,两个基因以双表达盒形式亚克隆入组成型表达质粒pGAPZ,整合入酵母染色体的另一位点,使EcR与USP在酵母中组成型表达,构建模型酵母B。制备蜕皮激素拮抗剂虫酰肼悬液(浓度为0.83mg/ml),分别施加于模型酵母B与阴性酵母A,荧光显微镜下目测荧光强度,与未施加药物的对照组比较。同时提取各组RNA,半定量RT-PCR检验GFP基因的转录效率。结果模型酵母B发出绿色荧光,而阴性酵母A与空白酵母GS115未见荧光,表明在模型酵母体内表达的EcR与USP形成复合二聚体,作用于EcRE启动GFP报告基因表达荧光蛋白。施用虫酰肼,模型酵母B荧光强度明显减弱,表明GFP的表达量减少。施用虫酰肼的模型酵母B,GFP与内参灰度比值(为0.614)低于对照组(1.134),表明虫酰肼可降低模型酵母B体内GFP基因的转录水平。结论在酵母体内建立了白纹伊蚊蜕皮激素转录活化系统,该酵母模型可用于筛选作用于蜕皮激素代谢途径的药物。

关键词：白纹伊蚊蜕皮激素受体超螺旋蛋白蜕皮激素受体响应元件虫酰肼蜕皮激素拮抗物

日本血吸虫真核生物翻译起始因子2α亚基全长cDNA的克隆与功能分析

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第一军医大学学报 2003年第4期23卷 296-299页

作者：卢晓昭彭鸿娟陈晓光第一军医大学寄生虫学教研室广东广州510515

目的对用表达序列标签(EST)策略从日本血吸虫(Schistosomajaponicum)尾蚴cDNA文库中筛选出的新基因进行全长cDNA克隆及功能预测。方法将插入于pTriplEx2 质粒上的cDNA进行测序,测序结果经BLASTn程序搜索,发现该插入cDNA序列与曼氏血吸... 详细信息

目的对用表达序列标签(EST)策略从日本血吸虫(Schistosomajaponicum)尾蚴cDNA文库中筛选出的新基因进行全长cDNA克隆及功能预测。方法将插入于pTriplEx2 质粒上的cDNA进行测序,测序结果经BLASTn程序搜索,发现该插入cDNA序列与曼氏血吸虫真核生物翻译起始因子2α亚基(eukaryotic translation initiation factor 2 alpha subunit, eIF2α) 基因高度同源。根据该EST序列设计与pTriplEx2 质粒上的5'端测序引物相匹配的PCR下游引物,从该cDNA文库中扩出包含eIF2α全长ORF的cDNA片段。将PCR产物纯化后克隆到pGEM-T载体上,并对此克隆进行测序得到其全长cDNA序列。用NCBI 站点的BLASTx及BLASTn程序对所获得的新基因序列进行同源性搜索;用blast two sequence程序对同源性高的基因进行核苷酸及氨基酸水平的同源性比较。同时用网上分析软件进行基序和保守区域的搜索。结果发现一个与曼氏血吸虫eIF2α亚基mRNA高度同源的日本血吸虫新基因,核苷酸与氨基酸水平的同一性分别为87%和79%,编码由327个氨基酸组成的蛋白序列。结论用EST策略筛选到一个日本血吸虫新基因,编码eIF2α亚基,全长编码序列与曼氏血吸虫eIF2α亚基mRNA高度同源。

关键词：日本血吸虫表达序列标签基因克隆真核生物翻译起始因子2α

弓形虫棒状体蛋白2多克隆抗体制备纯化及其在免疫荧光定位中的运用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2014年第1期32卷 34-37页

作者：张丽廖启彬胡琳陈艾媛魏海霞彭鸿娟南方医科大学公共卫生与热带医学院病原生物学系广州510515

目的制备弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)多克隆抗体并纯化。方法将已构建的重组质粒pET32aROP2转化入大肠埃希菌(***)BL21(DE3)中,用0.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白ROP2,分离上清和包涵体,包涵体洗涤后,用尿素溶解... 详细信息

目的制备弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)多克隆抗体并纯化。方法将已构建的重组质粒pET32aROP2转化入大肠埃希菌(***)BL21(DE3)中,用0.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白ROP2,分离上清和包涵体,包涵体洗涤后,用尿素溶解;取纯化蛋白与等体积福氏完全佐剂或不完全佐剂混合,背部皮下免疫新西兰大白兔3次,200μg/次,3次免疫之间分别间隔14 d和19 d,末次免疫10 d后收集兔血清,亲和纯化柱纯化,并用间接ELISA检测抗体效价,蛋白质印迹(Western blotting)分析抗体特异性。将弓形虫速殖子感染人包皮成纤维细胞(HFF细胞),利用制备所得的多克隆抗体采用免疫荧光法检测ROP2在感染细胞中的定位。结果通过诱导表达,获得重组蛋白ROP2,制备的兔源性ROP2抗体纯化后为单一蛋白抗体。间接ELISA结果显示,抗体滴度为1∶102 400;Western blotting结果显示,抗体特异性良好。同时,免疫荧光定位试验结果显示,ROP2定位在弓形虫的纳虫泡膜上。结论本研究制备并纯化了抗弓形虫ROP2的兔源性多克隆抗体,并成功应用于ROP2在弓形虫纳虫泡膜上的免疫荧光定位试验。

关键词：刚地弓形虫棒状体蛋白2 多克隆抗体免疫荧光定位