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肺炎克雷伯菌氨基肽酶A的克隆表达与活性鉴定

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中华实验外科杂志 2024年第4期41卷 697-699页

作者：白丽民张筱薇李笑眉龚政汪佳希韩雨佳徐刚苏北人民医院烧伤整形科扬州225001 扬州大学临床医学院扬州225001 大连医科大学研究生院大连116044

目的对肺炎克雷伯菌(KP)中标注的氨基肽酶(PepA)进行序列扩增与蛋白表达,鉴定其酶活特性。方法根据(美国)国家生物技术信息中心(NCBI)公布的KP PepA基因序列(Reference Sequence:NZ_CP045783.1)设计扩增引物,以本科室前期分离到的一株K... 详细信息

目的对肺炎克雷伯菌(KP)中标注的氨基肽酶(PepA)进行序列扩增与蛋白表达,鉴定其酶活特性。方法根据(美国)国家生物技术信息中心(NCBI)公布的KP PepA基因序列(Reference Sequence:NZ_CP045783.1)设计扩增引物,以本科室前期分离到的一株KP基因组为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增出PepA基因全长,使用NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后连接至表达载体pET-30a。将重组质粒pET-30a-PepA转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达出KP PepA蛋白,使用N^(2+)层析柱对重组His标签蛋白进行纯化。以亮氨酸-对硝基苯胺(Leu-pNA)为底物,测定KP PepA对其水解能力,并摸索不同的反应温度和pH值条件对水解反应的影响。在反应体系中加入不同二价金属离子,观察各离子对KP PepA氨基肽酶活性的作用。组间比较采用t检验。结果扩增出长度为1527 bp的KP PepA基因,并获得可溶性KP PepA蛋白,大小为56.1×103,与预测大小一致。KP PepA加入组反应产物pNA浓度显著高于KP PepA不加组[(205.00±5.00)μmol/L比(8.00±2.00)μmol/L,t=63.36,P<0.01],表明重组KP PepA可以水解Leu-pNA。KP PepA水解Leu-pNA的最适温度为37℃,最适pH值为pH 8.0。Co^(2+)、Mn^(2+)均可以提高KP PepA酶活性,其中Co^(2+)激活作用最强,加入Co^(2+)组的相对酶活性显著高于不加离子组(181.70±7.64比95.00±0.00,t=16.44,P<0.01);Zn^(2+)、Fe^(2+)均可以抑制KP PepA酶活性,其中Zn^(2+)抑制作用最强,加入Zn^(2+)组的相对酶活性显著低于不加离子组(44.67±8.97比95.00±0.00,t=8.49,P<0.01)。结论肺炎克雷伯菌中标注的PepA具有体外氨基肽酶活性。

关键词：肺炎克雷伯菌氨基肽酶亮氨酸对硝基苯胺

肺炎克雷伯菌外膜蛋白A和黏附素蛋白抗原优势表位融合表达与小鼠免疫保护效果

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中华实验外科杂志 2024年第1期41卷 40-43页

作者：白丽民张筱薇李笑眉龚政汪佳希韩雨佳徐刚苏北人民医院烧伤整形科扬州225001 扬州大学临床医学院扬州225001 大连医科大学研究生院大连116044

目的探讨肺炎克雷伯菌(KP)外膜蛋白A(OmpA)和黏附素MrkD优势抗原表位融合蛋白对KP感染小鼠的免疫保护作用。方法根据(美国)国家生物技术信息中心(NCBI)公布的KP ompA和mrkD序列,通过生信分析选取这两个蛋白的优势抗原表位,经融合聚合酶... 详细信息

目的探讨肺炎克雷伯菌(KP)外膜蛋白A(OmpA)和黏附素MrkD优势抗原表位融合蛋白对KP感染小鼠的免疫保护作用。方法根据(美国)国家生物技术信息中心(NCBI)公布的KP ompA和mrkD序列,通过生信分析选取这两个蛋白的优势抗原表位,经融合聚合酶链反应(PCR)扩增表位序列后克隆至pColdI载体,并转入本科室保存的大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,Ni+层析凝胶纯化后获得重组蛋白rAD。rAD经皮下免疫22只BALB/c小鼠,同时设置22只佐剂对照组。完成免疫程序后通过酶联免疫吸附试验(ELISA)对小鼠血清中的抗体水平和脾脏体外抗原刺激后细胞因子分泌水平进行测定,并对小鼠鼻腔注射KP,观察免疫后的小鼠存活率和肺脏细菌数量。组间比较采用t检验。结果分别扩增出ompA和mrkD抗原表位序列,并成功融合,融合片段大小为1056 bp,与预测大小一致,克隆至pColdI载体后测序,测序正确。重组表达菌BL21(DE3)-pColdI-rAD经IPTG诱导后破碎收集上清纯化,获得可溶性rAD,大小为38.4×10^(3),与预测大小一致。rAD 3次免疫BALB/c小鼠后,免疫组抗体滴度显著高于对照组(170667.00±59121.00比0.00±0.00,t=5.00,P<0.01)。KP感染小鼠后,免疫组小鼠存活率显著高于对照组[(65.00±5.00)%比(0.00±0.00)%,t=22.52,P<0.01],免疫组小鼠肺脏细菌数显著低于对照组[(9500.00±1384.00)CFU比(87833.00±25365.00)CFU,t=7.55,P<0.01]。脾细胞分离后经rAD刺激,免疫组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)分泌量均显著高于对照组[(115.70±17.21)pg/ml比(24.00±9.17)pg/ml,t=8.14,P<0.01;(200.30±8.51)pg/ml比(9.00±3.00)pg/ml,t=36.75,P<0.01;(92.33±6.11)pg/ml比(9.67±1.53)pg/ml,t=22.73,P<0.01]。结论KP OmpA和MrkD优势抗原表位融合蛋白rAD,免疫BALB/c小鼠有助于对KP感染的抵抗。

关键词：肺炎克雷伯菌外膜蛋白菌毛蛋白亚单位疫苗

改良型富血小板纤维蛋白对裸鼠深Ⅱ度烧伤创面的作用

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中华烧伤与创面修复杂志 2023年第8期39卷 771-778页

作者：唐黎珺李笑眉张筱薇罗艺徐刚同济大学附属养志康复医院烧伤康复科上海201613 扬州大学临床医学院苏北人民医院烧伤整形外科扬州225001

目的探讨改良型富血小板纤维蛋白(A-PRF)对裸鼠深Ⅱ度烧伤创面的作用及其机制。方法采用实验研究方法。招募苏北人民医院40名健康志愿者,包括32名女性、8名男性,年龄为60~72岁,抽取静脉血后制备富白细胞血小板纤维蛋白(L-PRF)和A-PRF膜... 详细信息

目的探讨改良型富血小板纤维蛋白(A-PRF)对裸鼠深Ⅱ度烧伤创面的作用及其机制。方法采用实验研究方法。招募苏北人民医院40名健康志愿者,包括32名女性、8名男性,年龄为60~72岁,抽取静脉血后制备富白细胞血小板纤维蛋白(L-PRF)和A-PRF膜片,采用场发射扫描电子显微镜观察2种富血小板纤维蛋白(PRF)膜片的微观结构。以下实验样本数均为3。将L-PRF、A-PRF膜片分别设为L-PRF组、A-PRF组并进行培养,采用酶联免疫吸附测定法检测培养1、3、7、14 d上清液中血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)和血管内皮生长因子(VEGF)的释放浓度。取小鼠L929成纤维细胞(Fb),分为L-PRF组、A-PRF组,并分别加入L-PRF或A-PRF条件培养基培养,于培养1、3、7 d采用噻唑蓝法检测细胞增殖活性,采用划痕试验检测并计算划痕后24 h细胞迁移率。取36只6~8周龄雄性BALB/c裸鼠,于一侧后腿皮肤制作1个深Ⅱ度烧伤创面后,按随机数字表法分为生理盐水组、L-PRF组、A-PRF组,每组12只。生理盐水组裸鼠创面仅行生理盐水冲洗,L-PRF组、A-PRF组裸鼠创面另覆盖相应PRF膜片,3组裸鼠创面均用敷料包扎固定。治疗4、7、14 d,观察创面愈合情况并计算创面愈合率,取创面组织行Masson染色观察新生胶原情况,行免疫组织化学染色检测创面CD31阳性细胞百分比。对数据行独立样本t检验、重复测量方差分析、析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD检验。结果L-PRF膜片由粗大的纤维蛋白束构成致密的网状结构,散在分布形态完整的白细胞及血小板。A-PRF膜片由细小的纤维蛋白束构成疏松的网状结构,散在分布少量变形的白细胞及血小板。培养1 d,A-PRF组PRF培养上清液中PDGF-AB释放浓度明显高于L-PRF组(t=5.73,P0.05);培养3、7、14 d,A-PRF组PRF培养上清液中PDGF-AB、VEGF释放浓度均明显高于L-PRF组(t值分别为6.93、7.45、5.49,6.97、8.97、13.64,P<0.05)。培养3、7、14 d,2组PRF培养上清液中PDGF-AB、VEGF释放浓度均明显高于组内前一时间点(P<0.05)。培养1、3、7 d,A-PRF组小鼠Fb增殖活性分别为0.293±0.034、0.582±0.054、0.775±0.040,均明显强于L-PRF组的0.117±0.013、0.390±0.036、0.581±0.037(t值分别为8.38、5.14、6.16,P<0.05)。划痕后24 h,A-PRF组小鼠Fb迁移率为(60.9±2.2)%,明显高于L-PRF组的(39.1±2.3)%(t=11.74,P<0.05)。治疗4 d,L-PRF组和A-PRF组裸鼠创面渗液较少且未见明显感染迹象,生理盐水组裸鼠创面有较多渗液。治疗7 d,L-PRF组和A-PRF组裸鼠创面干燥结痂,生理盐水组裸鼠创面仍有少量渗液。治疗14 d,A-PRF组裸鼠创面趋于愈合,L-PRF组裸鼠仍残留小部分创面,生理盐水组裸鼠创面仍有未脱落焦痂。治疗4、7、14 d,L-PRF组裸鼠创面愈合率与CD31阳性细胞百分比均明显高于生理盐水组(P<0.05);与生理盐水组和L-PRF组相比,A-PRF组裸鼠创面愈合率均明显升高(P<0.05),新生胶原排列有序、分布均匀且未见过度沉积,CD31阳性细胞百分比均明显升高(P<0.05)。结论A-PRF稳定的纤维蛋白网状结构能维持生长因子持续释放、加快细胞增殖、促进细胞迁移,以缩短裸鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合时间且改善愈合质量。

关键词：烧伤伤口愈合细胞增殖富血小板纤维蛋白生长因子

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基于动静载试验的连续梁桥承载能力分析

基于动静载试验的连续梁桥承载能力分析

第二十届沈阳科学学术年会

作者：张筱薇沈阳建筑大学交通与测绘工程学院

桥梁结构在投入运营后,需要定期评估其承载力和工作状态。本文以通辽市某桥梁为例,对其进行承载力分析。首先利用Midas civil有限元软件对桥梁进行梁单元建模,在等效设计荷载下,分别计算各控制断面应变、挠度的理论值及理论频率、理论... 详细信息

桥梁结构在投入运营后,需要定期评估其承载力和工作状态。本文以通辽市某桥梁为例,对其进行承载力分析。首先利用Midas civil有限元软件对桥梁进行梁单元建模,在等效设计荷载下,分别计算各控制断面应变、挠度的理论值及理论频率、理论冲击系数。再通过静力车辆荷载及动力车辆荷载试验测得应变、挠度的实测值及实测频率、实测冲击系数,根据实测值与理论值的对比分析结果,判断该桥梁的承载能力并对给出该桥梁结构的维护建议。

关键词：连续梁桥有限元分析静载试验动载试验承载能力评定

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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基于数据融合的连续梁桥损伤识别研究

公路交通科技 2023年第11期40卷 115-122页

作者：曹悦包龙生张筱薇孟宪彪沈阳建筑大学辽宁沈阳110168 中铁十九局集团轨道交通工程有限公司北京101300

针对桥梁损伤识别过程中采用单一损伤指纹进行识别而导致识别结果不精准、损伤误判的情况,提出了将数据融合理论D-S证据理论引入到损伤识别理论中来。在基础损伤指标位移模态与曲率模态的基础上,采用二次融合的识别方法,将位移模态差和... 详细信息

针对桥梁损伤识别过程中采用单一损伤指纹进行识别而导致识别结果不精准、损伤误判的情况,提出了将数据融合理论D-S证据理论引入到损伤识别理论中来。在基础损伤指标位移模态与曲率模态的基础上,采用二次融合的识别方法,将位移模态差和曲率模态差分别自我融合后再将各自融合结果进行二次融合。首先,建立了三跨连续梁有限元模型,通过模态分析获取原始损伤指纹并构造损伤指标。应用Matlab编写了基于D-S证据理论准则的融合损伤识别程序,先计算位移模态差及曲率模态差,再对位移模态差及曲率模态差进行各自自我融合,通过单一损伤工况及两处损伤工况的模态数据分析了采用单一指纹自我融合的识别效果。然后,应用程序对两个指标自我融合后的指标进行再次融合,通过单一损伤及两处损伤工况的模态数据分析了最终损伤识别结果。最后,通过对三跨连续梁损伤单元处预设5%和10%程度的早期损伤对该方法进行了验证。结果表明:最终识别结果显示无论单一损伤或两处损伤,即使损伤微小,该数据融合方法依然能对损伤位置进行精准识别且识别效果较好,识别结果中显示未发生损伤处的波形均相对平缓不会发生损伤误判。该方法有效改善了单一损伤指标进行损伤识别的局限性,具有一定的可行性。

关键词：桥梁工程损伤识别数据融合曲率模态 D-S证据理论

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网状植皮治疗化脓性汗腺炎一例

中国麻风皮肤病杂志 2022年第10期38卷 726-728页

作者：周圣杰徐刚罗艺张筱薇白丽民扬州大学临床医学院扬州225001 江苏省苏北人民医院烧伤整形科扬州225009 大连医科大学临床医学院大连116000

化脓性汗腺炎治疗较棘手,我们应用网状植皮联合真空封闭引流技术成功治疗化脓性汗腺炎一例。本例网状植皮可能会更利于化脓性汗腺炎的恢复,为治疗该病提供了一种新的手术方式。

关键词：反常性痤疮化脓性汗腺炎毛囊闭锁网状植皮负压封闭引流

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论文化冲突与犯罪

现代法学 1995年第4期17卷 2-7页

作者：张筱薇华东政法学院

论文化冲突与犯罪张筱薇一、文化冲突与犯罪形成的相互关系１．文化冲突的社会变异条件和反规范性特征文化冲突导致犯罪，是当代犯罪学理论中一个著名的论点。以美国著名的犯罪学家塔夫脱（Ｄ．Ｒ．Ｔａｆｔ）为代表的文化冲突理论，在... 详细信息

论文化冲突与犯罪张筱薇一、文化冲突与犯罪形成的相互关系１．文化冲突的社会变异条件和反规范性特征文化冲突导致犯罪，是当代犯罪学理论中一个著名的论点。以美国著名的犯罪学家塔夫脱（Ｄ．Ｒ．Ｔａｆｔ）为代表的文化冲突理论，在采用社会学和文化学原理研究美国社会...

关键词：文化冲突文化结构犯罪论文化文化价值观念反规范传统文化规范冲突规范意识主导文化

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中国与亚洲国家贩运人口犯罪研究

犯罪与改造研究 2004年第12期 3-9页

作者：张筱薇华东政法学院

贩运人口犯罪已经成为排在毒品贩运、武器贩运之后的第三大严重的国际犯罪。亚洲国家则是世界上人口犯罪的主要源头国家,而且随着全球化水平的提髙,亚洲各国的贩运人口犯罪渐趋国际化。本文作者以翔实的资料,列举了亚洲各地区的贩运人... 详细信息

贩运人口犯罪已经成为排在毒品贩运、武器贩运之后的第三大严重的国际犯罪。亚洲国家则是世界上人口犯罪的主要源头国家,而且随着全球化水平的提髙,亚洲各国的贩运人口犯罪渐趋国际化。本文作者以翔实的资料,列举了亚洲各地区的贩运人口犯罪状况,分析了其基本特征,对中国和亚洲各国的此类犯罪原因进行了剖析。

关键词：拐卖人口人口贩运

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亚洲的性奴役——贩运人口犯罪透视

青少年犯罪问题 2013年第3期 48-57页

作者：张筱薇华东政法大学

"贩运人口"是当前全球范围内普遍发生的犯罪。联合国在2006年发布的首份全球贩运人口评估报告指出:"奴役的事实———以人口贩运为形式———在21世纪的继续存在,对我们所有的人来说都是一种耻辱。"事实上,全球没有哪一个国家能够免遭... 详细信息

"贩运人口"是当前全球范围内普遍发生的犯罪。联合国在2006年发布的首份全球贩运人口评估报告指出:"奴役的事实———以人口贩运为形式———在21世纪的继续存在,对我们所有的人来说都是一种耻辱。"事实上,全球没有哪一个国家能够免遭以性剥削和强迫劳工为目的的贩运人口犯罪的侵害,而妇女和儿童是此类犯罪的首要被害人。亚洲国家因人口密集、贫困人数庞大而成为全球贩运人口最主要的源头地区,贩运妇女和儿童犯罪特别严重。

关键词：贩运人口被害人性剥削性奴役